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[期刊] 水产学报
[作者]
李连平 张小东 黄志勇 鄢庆枇 梁英 徐同玲
小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5d后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液,再经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE电泳、氨基酸组成及紫外光谱等方法进行表征,测得该蛋白的分子量约为8.2ku,半胱氨酸含量为15.4%,具有金属硫蛋白典型的紫外光谱特征,称为类金属硫蛋白(Zn-MT-like proteins)。试验采用琼脂糖孔穴扩散法,研究了小球藻Zn-MT-like蛋白对3种细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌)和3种真菌(青霉菌、曲霉菌、酵母菌)...
关键词：
小球藻 类金属硫蛋白 结构表征 抗菌活性
[期刊] 水产学报
[作者]
彭爱红 高爽 陈俊 庄梅珍 王凡 陈晓梅 林郑忠 黄志勇
研究锌离子胁迫对海洋小球藻生长和金属硫蛋白诱导的影响,当小球藻达到对数生长期,用不同离子浓度(5、10、20、50和100μmol/L)的锌盐(氯化锌、柠檬酸锌、乙酸锌和葡萄糖酸锌)分别进行胁迫培养,通过测定小球藻的生物量和锌结合金属硫蛋白含量,考察锌胁迫对海洋小球藻的生物量、热稳定蛋白含量以及锌结合金属硫蛋白含量的影响。结果显示,当浓度分别小于5和10μmol/L时,柠檬酸锌和氯化锌对小球藻生长无显著抑制作用;而浓度为5μmol/L时,乙酸锌和葡萄糖酸锌对小球藻生长即产生显著抑制,且抑制作用皆随锌离子浓
[期刊] 水产学报
[作者]
王玮蔚 孙雪 王冬梅 沈佳 徐年军
为探讨小球藻中碳酸酐酶对环境调控的响应规律,提高小球藻的生物量及对无机碳的利用,实验采用生化和荧光定量PCR方法研究了盐度和2种无机碳对蛋白核小球藻生长、胞外碳酸酐酶(CA)活性及3种亚型碳酸酐酶基因(ca)表达的影响。结果发现,培养至第9天时盐度15和30培养藻生长较快,盐度45藻细胞密度降为盐度15的0.83倍;CA活性随着盐度增加而降低,盐度45长时间处理酶活性降低更为明显,3种亚型ca基因表达量则随盐度升高而增加。2倍空气CO2浓度培养藻密度可达空气CO2浓度的1.23倍,但CA活性较低,第8天为空气CO2浓度组的0.41倍,α-ca和γ-ca基因表达量比空气CO2浓度组略有升高。在0...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
岳霞丽 张新萍 胡先文 董元彦
【目的】研究苄嘧磺隆对蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)的生长效应,评价苄嘧磺隆的生态风险。【方法】通过不同浓度的苄嘧磺隆对蛋白核小球藻的96h急性毒性试验,研究苄嘧磺隆对小球藻的生长及藻细胞中叶绿素和蛋白质含量的影响。【结果】低浓度苄嘧磺隆(5mg·L-1)抑制藻的生长,藻细胞叶绿素含量和可溶性蛋白质含量随药剂浓度增加而明显下降,且表现出较好的计量-效应关系,其对蛋白核小球藻的96h-EC50值为15.7mg·L-1。【结论】苄嘧磺隆对蛋白核小球藻的生长有一定的抑制作...
[期刊] 水产学报
[作者]
孙雪 吴晓微 徐年军 杨锐
psbA基因是高等植物和藻类中介导光合电子传递D1蛋白的编码基因,该基因受光照等因素的调控。以单细胞绿藻蛋白核小球藻为材料,克隆了psbA全编码序列并用荧光定量PCR的方法研究了自养和异养藻psbA基因转录水平的变化,以揭示不同培养方式下psbA基因表达变化规律。结果克隆到2 595 bp psbA序列,包括676 bp的5'-非翻译区和857 bp的3'非翻译区。该psbA基因开放阅读框编码353个氨基酸,A+T百分含量为58.0%,其成熟的D1蛋白加工方式与高等植物高粱相似。荧光定量结果表明,自养藻在光周期内psbA基因表达量先升高后下降,而异养藻psbA表达变化不明显。从自养转为异养2 ...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
郑香娇 周作明
以蛋白核小球藻为受试物,分别设0(CK)、0.06、0.12、0.18、0.24、0.30、0.36 mg/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)处理,考察CTAB对藻生长和生化指标的影响,分析其致毒机理。结果表明:CTAB对蛋白核小球藻96 h EC50值为0.17 mg/L;藻细胞叶绿素a、水溶性蛋白质含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性随CTAB浓度增加呈先升后降趋势,当CTAB剂量≤0.06 mg/L时,叶绿素a含量略微上升,>0.06 mg/L时,叶绿素a含量急剧下降;CTAB剂量≤0.24 mg/L处理下蛋白质含量增加,CTAB剂量≥0.30 mg/L处理时水溶性蛋白含量低于对照组;除剂...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
魏文志 夏文水 吴玉娟
从小球藻中提取蛋白质,并研究了小球藻蛋白质抗氧化特性。通过反复冻融、细胞破碎、离心、盐析和凝胶层析,从小球藻中得到两种蛋白质(ProⅠ和ProⅡ),获得率分别为0.280%和0.664%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为单条带,分子量分别为20.2 ku和20.4 ku。紫外可见光谱显示,ProⅠ在280 nm有一特征吸收峰,ProⅡ在280 nm和675 nm处各有一特征吸收峰。体外设计清除超氧阴离子自由基(O2?.)和羟自由基(.OH)实验,结果显示两种蛋白质能清除超氧阴离子自由基,黑暗条件下能清除羟自由基,但光照条件下生成羟自由基。
关键词：
小球藻 蛋白质 分离纯化 抗氧化活性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王宝维 陈苗璐 王秉翰 张名爱 葛文华 程凡升 岳斌
【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)mRNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
魏华 佟金凤 赵莹莹 李晓东
为系统研究重金属离子(镉和锌)诱导的金属硫蛋白在中华小长臂虾(Palaemonetes sinensis)不同组织(肝胰脏、肌肉)中的表达,采用水相暴露法对中华小长臂虾进行镉(0,0.05,0.08,0.10和0.15mg·L~(-1))与锌(0,5,8,15和18mg·L~(-1))的急性染毒试验。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法分析不同浓度的镉、锌离子在不同染毒时间下(0,24,48和96h),诱导金属硫蛋白(metallothionein,MT)在中华小长臂虾不同组织中的表达差异。结果表明:镉和锌诱导中华小长臂虾MT的表达存在组织差异性和时间效应关系。在肌肉中镉离子和锌离子不能诱导MT的表达。在肝胰脏中,0.05mg·L~(-1)的镉离子可诱导MT的表达,而5mg·L~(-1)的锌离子才能达到相同的效果。两种离子相比较,镉对中华小长臂虾的MT诱导能力更强。时间效应表现为染毒48h肝胰脏中MT表达量最高,诱导表达量随暴露时间的增加而加大,但达到一定程度后即呈下降至稳定趋势。两种重金属对中华小长臂虾肝胰脏MT的诱导能力:Cd~(2+)>Zn~(2+);MT在中华小长臂虾不同组织中的分布顺序为:肝胰脏>肌肉。染毒后中华小长臂虾肝胰脏中MT的表达有一定的时间效应关系,48h的表达量最高。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
穆亮亮 黄旭雄
在培养液中分别添加0（对照组）、20、60、180和540 μg/mL的硫酸链霉素（STRS），研究STRS作用下蛋白核小球藻SHOU-1002（Chlorella pyrenoidosa SHOU-1002）生长、细胞组成及α-亚麻酸含量。结果表明：前6 天，对照组藻细胞密度显著高于各STRS处理组，第10 天对照组生物量及单个细胞干重均显著大于各STRS处理组。STRS处理组的生物量随培养液中STRS浓度的升高不断降低。对照组、20、60和180 μg/mL STRS处理组藻细胞叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量均随培养时间的延长先降低后升高；540 μg/mL STRS处理组藻细胞叶绿素a和叶绿素b含量随培养时间的延长持续下降，而类胡萝卜素前4 天快速下降随后趋于稳定。α-亚麻酸是蛋白核小球藻SHOU-1002细胞脂肪酸组成中的优势脂肪酸，且4 天后各STRS处理组藻细胞中α-亚麻酸含量（%）显著高于对照组。第10 天，180 μg/mL STRS处理组藻细胞α-亚麻酸的绝对含量（mg/g）最高（52.09 mg/g），较对照组提升了108.19%；同时180 μg/mL STRS处理组的α-亚麻酸产量（35.34 mg/L）也最高。藻细胞色素（%DW）和脂肪酸（%）的相关性分析显示α-亚麻酸含量和叶绿素a含量呈极显著负相关。以上结果表明培养液中STRS降低蛋白核小球藻SHOU-1002叶绿素a含量和生物量的同时促进了藻细胞中α-亚麻酸的蓄积。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
何海生 原居林 刘梅 倪蒙 顾志敏
为了解接种蛋白核小球藻(Chlorella vulgaris)和种植水蕹菜(Ipomoea Aquatica)对南美白对虾(Penaeus vannamei)养殖的影响,在南美白对虾养殖水体中设置空白对照组、单纯接种蛋白核小球藻、种植水蕹菜及二者联合的4个处理组,定期监测各处理组中水质理化指标、生长特性及免疫相关酶活性的变化情况。结果显示:与对照组相比,三个处理组均能有效去除南美白对虾养殖水体中的NO~-_2-N、NH~+_4-N、TN和TP,其中接种蛋白核小球藻处理组对NO~-_2-N的去除率达到51.27%;种植水蕹菜处理组对NO~-_2-N、NH~+_4-N和TP去除效果最好,去除率分别为55.19%、70.06%和74.76%;联合处理组对水体TN去除率为49.66%,去除TN效果最佳。三个处理组均能提高南美白对虾的特定生长率和提高其成活率,其中联合处理组效果最佳,分别较对照组提高了0.66%和27.27%,水雍菜处理组分别增加了8.14%和9.10%,蛋白核小球藻处理组分别增加了4.41%和2.28%,同时联合处理组的增重率显著高于其他三组。种植水蕹菜处理组能显著增加南美白对虾CAT、GST活性和GSH含量,分别较对照组增加了128.84%、235.39%和426.26%;联合处理组对南美白对虾肝胰腺的SOD活性和GSH含量促进效果最佳且达到显著水平,分别较对照组增加了52.75%和1 376.69%。综上可见,接种蛋白核小球藻和种植水蕹菜均能不同程度地促进南美白对虾生长及免疫活性,且以联合处理的综合效果最佳。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
穆亮亮 黄旭雄
以一株新分离的蛋白核小球藻SHOU-1002(Chlorella pyrenoidosa SHOU-1002)为试验材料，设置分别添加葡萄糖、谷氨酸钠和酵母浸出物的3组混合营养组和光合自养组，比较不同营养模式下蛋白核小球藻的生长及细胞组成的差异。结果表明：在混合营养模式下接种后蛋白核小球藻细胞密度始终显著高于光合自养组。接种后6d内葡萄糖组的藻细胞密度显著高于谷氨酸钠组和酵母浸出物组；第10天起，3个混合营养组藻细胞密度无显著性差异。培养第12天，谷氨酸钠组和酵母浸出物组的叶绿素a、类胡萝卜素、蛋白和总脂含量显著高于葡萄糖组，碳水化合物含量则显著低于葡萄糖组。随培养时间的延长，葡萄糖组的饱和脂肪酸（SFAs）含量不断升高，多不饱和脂肪酸（PUFAs）含量不断降低；谷氨酸钠组和酵母浸出物组的PUFAs含量则先降低后升高；培养第12d，谷氨酸钠组和酵母浸出物组的PUFAs含量显著高于葡萄糖组。表明该株蛋白核小球藻具有混合营养能力且混合营养模式下其生长效能显著提升，混合营养模式下添加酵母浸出物或谷氨酸钠所培养的藻细胞较添加葡萄糖所培养的藻细胞具有更高的营养价值。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李春燕 孙雪 杨锐
以2株蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)F-9和820为实验材料,根据已知绿藻rbcS基因设计简并引物,分别克隆到2条245bp的cDNA片段,以此片段为基础使用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了2条长度分别为861bp和907bp的rbcS基因。序列分析表明,蛋白核小球藻F-9和820的rbcS分别编码181和184个氨基酸,编码区具有与高等植物rbcS保守序列YYDGRYWTMWKLPMFG相类似的结构,起始密码子附近有Kozak保守序列(A/GXXATGG),3′非翻译区有加尾信号TGTAA。同源性分析结果表明,F-9与蛋白核小球藻(GenBank登录号...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王明发 田亚东 钟翔 康相涛 冯培刚 王恬
为了研究肉鸡肝脏中金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量和MT mRNA表达水平作为评定锌源生物利用率的有效性,在固始鸡和AA肉鸡饲料中添加不同水平的饲料级硫酸锌(ZnSO4·H2O)、氧化锌(ZnO)和氨基酸络合锌(ZnAA),分别测定了2、3、4、5和6周龄末肝脏中MT含量和MT mRNA的表达水平。结果表明:品种间肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平差异极显著,固始鸡高于AA肉鸡。锌源和锌添加水平对所测定指标产生显著影响,氨基酸络合锌显著高于硫酸锌,这两种锌源极显著高于氧化锌;随着锌添加水平增加,肉鸡肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平提高,锌水平之间差异极显著。4周...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
秦平伟 段明革 孙文婷 李名扬 徐晶
金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类富含Cys,能够结合重金属的低分子量蛋白质,广泛分布于生物界。在构建好的蜡梅花cDNA文库并进行EST分析的基础上,通过随机克隆测序得到了1个蜡梅金属硫蛋白的cDNA,命名为CpMetallothionein(CpMT)。CpMTcDNA全长为1083bp,基因内部含有一长度为240bp的开放阅读框,可编码79个氨基酸残基。将CpMT插入原核表达载体pET-32a,并转化Origami2感受态细胞。诱导表达产物经SDS-PAGE结果显示,目的蛋白约为30kD。表达的融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白2种形式存在,用His-Bind蛋白纯化回收试...
关键词：
金属硫蛋白 克隆 序列分析 原核表达
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