为揭示GnRH基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)中的表达规律、多态性及其与产羔数的关系,深入了解其对小尾寒羊多羔的作用,采用实时荧光定量PCR技术对6只小尾寒羊(FecB++型单、多羔母羊各3只)的生殖组织及脑组织中GnRH基因的表达谱进行分析,同时采用Sequenom MassARRAY~?SNP技术对380只小尾寒羊和共380只的小尾寒羊、滩羊、苏尼特羊、策勒黑羊、湖羊和草原型藏羊GnRH基因2个单核苷酸多态性位点(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)的进行多态性检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果显示,GnRH基因在下丘脑、卵巢和子宫组织均有表达,其中在下丘脑高表达。在小尾寒羊多羔群体中,GnRH基因在卵巢、大脑、下丘脑、垂体的表达均极显著高于单羔群体(P0.05)。关联分析表明,GnRH基因的2个SNPs位点的多态性与小尾寒羊各胎产羔数差异均不显著(P>0.05);2个SNPs在所有绵羊品种中均表现为低度多态(PIC0.05)。

[目的]本试验旨在探明Ⅱ型脱碘酶(DIO2)基因在常年发情的小尾寒羊和季节性发情的草地型藏羊中的表达模式,并探讨其多态性与绵羊季节性繁殖和产羔数之间的关系。[方法]通过荧光定量PCR(qPCR)检测DIO2基因在不同品种绵羊的10种组织中的表达,同时利用SNP技术对3个常年发情绵羊品种(小尾寒羊、策勒黑羊和湖羊)和3个季节性发情绵羊品种(滩羊、苏尼特羊和草地型藏羊)的DIO2基因2个SNP位点多态性进行检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。[结果]qPCR结果显示,DIO2基因在小尾寒羊和草地型藏羊各组织中广泛表达,其中草地型藏羊下丘脑、垂体、卵巢、子宫和输卵管组织中的表达量显著高于小尾寒羊(PC位点基因型频率和等位基因频率在季节性发情和常年发情绵羊品种间差异均达到极显著水平(PC位点在滩羊和策勒黑羊中表现为中度多态(0.250.05)。生物信息学分析表明,g.88484603G>C位点突变前、后的mRNA二级结构发生了改变,而且其最小结构自由能降低,结构稳定性增强,蛋白质二级结构没有发生变化,但三级结构有一些变化。关联分析表明,这2个SNP位点与小尾寒羊前3胎产羔数均无显著关联(P>0.05)。[结论]DIO2基因与绵羊的季节性繁殖密切相关,其g.88484603G>C位点对绵羊季节性繁殖性状有一定的调控作用。

【目的】绵羊产羔数是一个极其复杂的性状,受诸多因素影响。绵羊排卵数是最重要的因素之一,而SMAD蛋白在哺乳动物卵泡发育和颗粒细胞生长分化过程中发挥着重要作用。因此本文基于前期绵羊基因组重测序数据,深入研究SMAD家族成员1 (SMAD family member 1, SMAD1)基因在不同繁殖力小尾寒羊组织表达模式,并探讨其多态性与绵羊产羔数的关系,以揭示其影响产羔数的机制,为绵羊分子育种提供科学依据。【方法】首先,采用反转录PCR技术检测SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊群体大脑,小脑,下丘脑,垂体,子宫,卵巢,输卵管,心脏,肝脏,脾脏,肺脏,肾脏,肾上腺,甲状腺,大肠,小肠,胰腺,瘤胃,肾脂19种组织的表达模式,然后利用实时荧光定量PCR技术检测SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊下丘脑,垂体,子宫,卵巢,输卵管5种繁殖组织的相对表达量。随后采用Sequenom MassARRAY?SNP技术对SMAD1基因5个单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism, SNP)位点在小尾寒羊(n=380)、湖羊(n=101)、苏尼特羊(n=21)、草原型藏羊(n=161)、策勒黑羊(n=52)、滩羊(n=22)6个绵羊品种中进行基因型检测,计算其群体遗传学指标,利用SPSS19.0软件分析5个SNPs与小尾寒羊产羔数的相关性。【结果】PCR结果显示,SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊全身性组织均有表达,在小尾寒羊单羔群体卵巢的表达量极显著高于多羔群体(P<0.01),小尾寒羊单羔群体下丘脑、垂体的表达量显著高于多羔群体(PG,g.12487558G>A和g.12487190G>T位点在单、多羔绵羊品种中基因型和等位基因频率均差异显著(PC和g.12487467A>G位点在单、多羔绵羊品种中基因型和等位基因频率均差异不显著(P>0.05);群体遗传学分析表明,g.12485895A>G、g.12487558G>A、g.12508874T>C、g.12487467A>G、g.12487190G>T位点在小尾寒羊、湖羊、策勒黑羊、苏尼特羊、草原型藏羊中均为中度多态(0.25G位点在小尾寒羊和草原型藏羊中处在Hardy-Weinberg不平衡状态(PA在小尾寒羊和湖羊群体处于Hardy-Weinberg不平衡状态(PT位点在草原型藏羊处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P0.05);关联分析表明,g.12485895A>G,g.12487558G>A,g.12508874T>C和g.12487467A>G位点与小尾寒羊产羔数无显著关联。g.12487190G>T位点TT基因型母羊前三胎的产羔数均显著高于GT和GG基因型母羊(P<0.05)。将该位点与小尾寒羊FecB(A746G)不同基因型进行组合后发现,AA-GG、AA-GT、AA-TT型母羊产羔数显著低于其他组合基因型母羊(PT可作为小尾寒羊产羔性状选育的潜在分子标记。

设计15对引物,采用PCR-SSCP技术检测孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因全部9个外显子在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔和多赛特中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊产羔数的影响。只有引物P9扩增片段具有多态性。对于P9扩增片段,在小尾寒羊、湖羊和多赛特中均检测到AA、AG和GG型,在特克塞尔中只检测到AA和AG型。测序表明GG型与AA型相比在217 bp处有一单碱基突变(A→G),但未引起氨基酸变化。GG型和AG型小尾寒羊产羔数均值分别比AA型的多0.97只(P<0.05)和0.64只(P0.05)...

为研究Izumo1基因多态性及与产羔数关系,本研究利用PCR和直接测序法对小尾寒羊和苏尼特羊的Izumo1基因DNA序列进行扩增、测序和BLAST分析,并和本课题组前期绵羊重测序数据进行比对,筛选出Izumo1基因SNP位点。同时,采用Sequenom MassARRAY~?技术进行基因分型,并对其SNP位点的基因型和等位基因频率在各群体中的分布进行研究。结果表明:小尾寒羊Izumo1基因DNA全长序列3 385 bp,苏尼特羊Izumo1基因DNA全长序列3 382 bp;筛选出8个Izumo1基因SNP位点,经过初步筛选,将在小尾寒羊、苏尼特羊、滩羊、萨福克羊、杜泊羊、草原藏羊这6个绵羊品种中位点分布没有差异的SNP位点排除,最终筛选获得的g.54412135A>G和g.54412107C>A 2个位点。Izumo1基因g.54412135A>G位点在多羔和单羔绵羊品种中存在GG、GA和AA 3种基因型,G基因为优势等位基因;g.54412107C>A在多羔品种中存在CC和CA 2种基因型,而在单羔品种中存在CC、CA和AA 3种基因型,C基因为优势等位基因,其基因型频率和基因频率在单、多羔绵羊群体间的分布差异均极显著(PG多态位点在6个品种中的多态信息含量(PIC)都属于低度多态(PICA多态位点在杜泊羊中属于中度多态(0.25A位点的不同基因型与小尾寒羊不同胎次产羔数之间不存在显著关联(P>0.05)。

为阐明GnRHR基因的多态性与崂山奶山羊产羔数的关系,设计7对引物,采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术检测GnRHR基因在不同产羔数崂山奶山羊的单核苷酸多态性,并分析其与产羔数的关系。结果显示:该基因存在2个多态位点,A261G突变对于初产母羊GA型产羔数比AA型多0.06只,比GG型多0.04只,差异不显著(P>0.05);对于经产母羊GA型产羔数比AA型多0.35只,差异显著(P0.05)。G55A位点共检测到GG和GA这2种基因型,其中对于初产母羊GG型比GA型产羔数多0.13只,经产母羊GG型比GA型产羔数多0.19只,但差异...

【背景】随着人们生活水平不断提高,蛋白含量丰富、胆固醇含量较少的羊肉在日常生活中越来越受青睐,羊肉总体消费需求呈逐年增长趋势。但是近年来以羊肉为主的羊产品短缺,导致羊肉的价格一直居高不下,造成羊肉供需之间的矛盾。在早期对绵羊各项生产性能研究中发现,其繁殖性能高低对羊肉生产有重要影响。因此,提高绵羊繁殖力对改变我国肉羊生产周转慢、效益差的局面有重要意义。产羔数是最重要的繁殖性状,但产羔数是一个低遗传力的数量性状,且受微效多基因的控制,故传统的育种方法难以快速改良产羔数性状。近年来随着分子标记技术的出现,研究人员发现了一些影响绵羊繁殖力的主效基因,比如BMPR1B、BMP15、GDF9等,所以后期人们开始利用常规育种结合这些分子标记进行高繁殖力绵羊品种选育。研究表明除了这些已经发现的主效基因外,仍有一些基因对绵羊的繁殖力具有一定的调控作用。【目的】探究影响绵羊繁殖力的候选基因BMP2、BMP6、BMP7、CAST和CART在小尾寒羊和苏尼特羊性腺轴相关组织(大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管)的表达差异,为阐明绵羊高繁殖力机理提供参考。【方法】以产多羔的小尾寒羊和产单羔的苏尼特羊为对象,利用实时荧光定量PCR检测上述5个基因在两个绵羊品种与性腺轴相关的7种组织中的表达差异。【结果】BMP2在小尾寒羊和苏尼特羊的性腺轴7种组织中均有表达,在小尾寒羊下丘脑中的表达量高于苏尼特羊(P<0.05),在小尾寒羊输卵管、卵巢、垂体、小脑的表达量高于苏尼特羊(P0.05);BMP6在小尾寒羊垂体和卵巢以及输卵管中表达量高于苏尼特羊(P0.05);BMP7在小尾寒羊垂体、大脑的表达量高于苏尼特羊(P<0.05),在小尾寒羊下丘脑、输卵管、卵巢中的表达量高于苏尼特羊(P0.05);CAST在小尾寒羊和苏尼特羊的下丘脑、垂体中呈痕量表达,在其它组织中均有较高表达量,其在小尾寒羊输卵管和子宫中的表达量高于苏尼特羊(P0.05);CART在2种绵羊下丘脑中有较高表达量,在苏尼特羊垂体中的表达量高于小尾寒羊(P<0.05),在小尾寒羊大脑中的表达量高于苏尼特羊(P0.05)。【结论】暗示这5个基因可能对绵羊繁殖力具有一定的调控作用。

为探究GJB6和PRKAA1基因对槐山羊繁殖性能的影响，以122只不同产羔数的槐山羊群体为研究对象，参照NCBI数据库中山羊GJB6和PRKAA1基因参考序列设计引物，利用PCR与测序技术扫描GJB6和PRKAA1基因单核苷酸多态性(SNP),并进行遗传多态性、群体遗传参数分析和基因型与产羔数的关联分析。结果表明，在GJB6基因中检测到2个SNP位点：g.50694819 C>T和g.50694816 T>C,均为同义突变；在PRKAA1基因中检测到3个SNP位点：g.33691489 T>C、g.33693395 A>T和g.33693100 T>C,均位于非编码区。GJB6基因g.50694819 C>T位点和PRKAA1基因g.33693100 T>C位点为低度多态；GJB6基因g.50694816 T>C位点、PRKAA1基因g.33691489 T>C和g.33693395 A>T位点为中度多态。卡方检验结果表明，5个SNP位点均处于Hardy-Weinberg平衡。基因型与产羔数的关联分析结果表明，GJB6基因2个SNP的各个基因型间槐山羊产羔数的差异不显著，不适用于槐山羊群体的多羔性状选育。PRKAA1基因g.33691489 T>C位点的TC基因型个体产羔数显著高于CC基因型，g.33693395 A>T位点AT基因型个体产羔数显著高于AA、TT基因型(P<0.05),且g.33691489 T>C和g.33693395 A>T位点呈现强连锁平衡状态(D′>0.8,r~2>0.33)。单倍型关联分析结果显示，PRKAA1基因TCA单倍型个体的产羔数显著高于CTA、CTT、TTA单倍型个体的产羔数(P<0.05)。因此，槐山羊PRKAA1基因g.33691489 T>C位点TC基因型与g.33693395 A>T位点AT基因型以及TCA单倍型个体具有较高的产羔数，可作为槐山羊产羔数选育的潜在分子标记。

该研究以内蒙古阿尔巴斯型白绒山羊为研究对象,选择绒山羊催乳素(PRL)及其受体(PRLR)基因部分序列作为候选基因,采用PCR-SSCP分子标记技术和DNA测序技术研究其多态性,然后运用最小二乘方差分析方法,对各基因型间生产性状指标进行差异显著性检验,分析绒山羊PRL、PRLR基因的SNP与绒山羊产绒性状的关系,寻找可用于辅助选择的分子标记。结果表明:PRL基因P1和PRLR基因P3引物位点存在SSCP多态,在PRL基因Exon 5区域存在X76049:g.576 bp C-A突变,该突变导致第176个密码子CCC变成ACC,从而使脯氨酸变成苏氨酸(Pro-Thr)。方差分析表明,该位点多态与...

【目的】探索绵羊BMPRIB基因第7外显子多态性与产羔数的相关性，寻找控制绵羊繁殖力的分子标记位点。【方法】以相同饲养管理条件下同龄已有产羔记录的蒙古羊（单胎母羊和双胎母羊）、无角陶赛特羊（单胎母羊和双胎母羊）、小尾寒羊（多胎母羊）为试验材料，采用PCRSSCP结合DNA直接测序的方法，对BMPRIB基因第7外显子进行多态性检测与分析。【结果】试验羊只存在AA型和AB型2种基因型；AB型个体在BMPRIB基因第864位点发生C→T突变，出现T/C的杂合，所有试验样本的优势基因型均为AA型，优势等位基因均为A基因。χ2适合性检验表明，无角陶赛特羊、蒙古羊和小尾寒羊均处于Hardyweinberg...

为提高肉用绵羊的杂交育种效果,采用PCR-RFLP方法检测骨形态发生蛋白受体IB基因(BMPR-IB)在湖羊、小尾寒羊、杜泊绵羊及杜湖、杜寒杂交F1群体中的多态性。结果证明:在湖羊和小尾寒羊中检测到两种基因型(BB和B+),湖羊基因型频率分别为0.909和0.091,小尾寒羊基因型频率分别为0.563和0.437;在杜泊绵羊中只存在一种基因型(++);而在杜湖和杜寒杂交绵羊中发现两种基因型(B+和++),杜湖基因型频率分别为0.875和0.125,杜寒基因型频率分别为0.786和0.214。

为确定二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因与奶山羊产奶性状的关系,采用PCR-SSCP技术,对197只西农萨能奶山羊二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因的第5内含子进行多态性分析。在西农萨能奶山羊中检测的DGAT2基因第5内含子发现AA、AB和BB 3种基因型,其频率分别为0.228 40、.406 1和0.365 5;不同基因型与西农萨能奶山羊的产奶量和乳脂率之间有显著的关联性(P<0.05),AA和AB基因型个体的产奶量和乳脂率显著高于BB型(P0.05)。结果提示DGAT2基因对奶山羊产奶性状有一定的影响。

为探究金钱鱼（ＳｃａｔｏｐｈａｇｕＳ ａｒｇｕＳ）Ｍｈｃ Ⅱβ基因的结构和特性，采用同源克隆和ｒａｃＥ等技术，在获得ｃＤＮａ全序列的基础上，分析其内含子序列、基因多态性和组织表达情况。结果表明，金钱鱼Ｍｈｃ ＩⅡβ基因ｃＤＮａ序列全长１１７２ ｂｐ，其中５′ｕｔｒ长３４ ｂｐ，３′ｕｔｒ长３８８ ｂｐ，开放阅读框（ｏｒＦ）长７５０ ｂｐ，编码２４９个氨基酸，包含信号肽、β１结构域、β２结构域、连接肽（ｃｐ）、跨膜区（ｔＭ）和胞质区（ｃＹｔ）；Ｍｈｃ Ⅱβ基因由６个外显子和５个内含子组成，其中内含子３将β２结构域分开。从４３尾金钱鱼的２０９个有效克隆中，获得２０９条不同的核苷酸序列，可归为４８个．．．

为探究金钱鱼(Scatophagus argus)MHC IIβ基因的结构和特性,采用同源克隆和RACE等技术,在获得c DNA全序列的基础上,分析其内含子序列、基因多态性和组织表达情况。结果表明,金钱鱼MHC IIβ基因c DNA序列全长1172 bp,其中5?UTR长34 bp、3?UTR长388 bp、开放阅读框(ORF)长750 bp,编码249个氨基酸,包含信号肽、β1结构域、β2结构域、连接肽(CP)、跨膜区(TM)和胞质区(CYT);MHC IIβ基因由6个外显子和5个内含子组成,其中内含子3将β2结构域分开。从43尾金钱鱼的209个有效克隆中,获得209条不同的核苷酸序列,可归...

为探究金钱鱼(Scatophagus argus)MHC IIβ基因的结构和特性,采用同源克隆和RACE等技术,在获得c DNA全序列的基础上,分析其内含子序列、基因多态性和组织表达情况。结果表明,金钱鱼MHC IIβ基因c DNA序列全长1172 bp,其中5?UTR长34 bp、3?UTR长388 bp、开放阅读框(ORF)长750 bp,编码249个氨基酸,包含信号肽、β1结构域、β2结构域、连接肽(CP)、跨膜区(TM)和胞质区(CYT);MHC IIβ基因由6个外显子和5个内含子组成,其中内含子3将β2结构域分开。从43尾金钱鱼的209个有效克隆中,获得209条不同的核苷酸序列,可归...