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[期刊] 水产学报
[作者]
熊华伟 简少卿 贾小芳 虞舜 何宝荣 曾艳 张丽军 虞鹏程
实验探讨了富硒酵母对斑点叉尾肝脏的毒性作用及蛋白质组学的影响,结果表明,饲养56 d后正常组和有机硒组采用原子荧光法检测硒含量均值为0.15和0.81 mg/kg。H.E染色显示有机硒组肝细胞有明显的疏松化,部分发生脂肪变。通过二维凝胶电泳结合ImageMaster软件分析,鉴定出8个表达差异蛋白质点,其中3个在有机硒组表达上调,5个在有机硒组特异表达,经液相色谱串联质谱分析鉴定,这些蛋白质分别是伴侣蛋白TCP1-亚基8、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、4SNc-Tudor蛋白、腺苷激酶、酮糖移转酶、丙氨酰-tRNA合成酶。富硒酵母饲料对斑点叉尾肝具有明显的毒性效应,有机硒调控4SNc-Tudor...
[期刊] 水产学报
[作者]
吕昊 叶元土 易皓明 孙飞 石瑶瑶 吕斌 周伟 蒋蓉
为研究饲料中海带酶解提取物对斑点叉尾鮰生长和肝脏转录组表达的影响,在日粮中分别添加0 g/kg (S,对照组)、0.3 g/kg (KP3)、0.5 g/kg (KP5)、1.0 g/kg (KP10)、1.5g/kg (KP15)、2.0 g/kg(KP20)的海带酶解提取物,以初始体质量为(51.18±1.14) g的斑点叉尾鮰为实验对象,随机分为6组,每组3个重复,每个重复40尾鱼,在池塘网箱中养殖60 d。结果显示:(1)与对照组(S)相比,饲料添加海带酶解提取物对斑点叉尾鮰的存活率(SR)没有显著影响,特定生长率(SGR)提高了1.20%～5.39%,饲料系数(FCR)降低了-0.83%～9.09%;分别以SGR和FCR为目标进行二次多项式回归分析,得到海带酶解提取物在饲料中的最适添加量分别为0.98和0.96 g/kg;KP10～KP20组肥满度(CF)和脏体比(VSI)显著降低,KP10组肝体比(HSI)显著降低;各组全鱼的水分、粗脂肪、粗蛋白质和粗灰分含量差异不显著。(2) KP3组肠道皱襞高度,KP5组肠道皱襞高度、宽度、肌层厚度,KP10组的皱襞宽度均显著高于S组。(3)选取S组与KP10组鱼肝脏提取总RNA后进行转录组测序和基因差异表达分析,表达显著下调的基因数有81个,显著上调的有199个;GO功能分类分析结果显示,差异表达基因(DEGs)被注释到DNA转录、金属离子结合、膜及膜组成成分等条目上;KEGG pathway分析结果显示,DEGs主要富集到细胞增殖与分化、激素调控、脂类代谢、糖类代谢以及生长因子代谢等相关的12个显著差异代谢通路。研究表明,日粮添加海带酶解提取物可以促进斑点叉尾鮰生长,降低饲料系数,改善肠道形态结构,加强肝脏的糖脂代谢能力,适宜添加量为0.96～0.98 g/kg。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 周宇 谭芸 甘西
以吉富罗非鱼为研究对象,通过对其肝脏蛋白质的提取方法、等电聚焦程序和IPG胶条pH选择这几个关键环节的优化探索,建立了吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术体系。结果表明:①采用液氮研磨法比匀浆器匀浆法提取蛋白质的效果更好;②聚焦时延长除盐时间至10 h,同时升高电压至8000 V,可获得清晰的电泳图谱;③通过双向电泳检测到吉富罗非鱼肝脏的蛋白点主要分布于pH值4.0~7.0之间。该技术体系的建立为今后开展罗非鱼蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。
关键词：
吉富罗非鱼 肝脏 蛋白质组学 双向电泳
[期刊] 淡水渔业
[作者]
程光平 黄钧 吴登华
斑点叉尾鱼回（ＩｃｔａｌｕｒｕｓＰｕｎｃｔａｔｕｓ）属鲶形目（Ｓｆｌｕｒｉｆｏｕｏｒｍｅｓ）鱼回科（Ｉｃａａｌｕｒｉｄａｅ）。１９８４年引入我国，１９８７年后逐渐形成规模养殖。该鱼在水产品市场中属中档品种。其肌肉纤维细且短，肉质细嫩，久煮不老，可作...
[期刊] 水产学报
[作者]
于海罗 肖调义 骆艺文 王红权 任为 叶利海 章燕铃
为研究饲料中添加胍基乙酸（GAA）对斑点叉尾鮰生长、肝脏抗氧化以及肌肉能量代谢的影响。本实验共设计4个实验组，分别投喂含0（对照组）、300、600和900 mg/kg GAA（GAA0、GAA300、GAA600和GAA900）的等能等氮饲料。实验鱼初始体质量为（36.67±0.00）g，实验周期8周。结果显示，各添加GAA组末均重（FBW）和增重率（WGR）较对照组均有提高趋势，但差异不显著；添加GAA显著影响脏体比（VSI）和腹脂率（IPF），在GAA300组VSI和IPF最低；以IPF和VSI为评价指标，通过二次函数分析获得GAA最适量分别为275和150 mg/kg。添加GAA对全鱼水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分均无显著影响，对肌肉中游离氨基酸和脂肪酸均无显著影响，但能显著提高肌肉中羟脯氨酸（HYP）含量，改善肌肉品质。添加GAA可提高肝脏抗氧化能力，其中GAA300组的总抗氧化能力（T-AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）活性显著高于对照组。添加GAA可改善肌肉能量代谢，其中GAA300组的琥珀酸脱氢酶（SDH）和丙酮酸激酶（PK）活性显著高于对照组。研究表明，饲料中添加GAA对斑点叉尾鮰生长及饲料利用无显著促进作用，但添加150～300 mg/kg GAA能降低斑点叉尾鮰腹部脂肪含量和脏体比，并能提高肝脏抗氧化能力和肌肉能量代谢。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
罗璋 姚鹃 陈昌福 谭斌 汪成竹 王绍辉
在饲料中添加定量的酵母免疫多糖,投喂注射接种了福尔马林灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)菌苗的斑点叉尾(Ictalurus punctatus),28 d后通过测定供试鱼的增重量、血清中凝集抗体效价、溶菌酶活性、谷丙转氨酶活性(SGPT)、血清总蛋白含量、白细胞吞噬活性以及活菌攻毒后的免疫保护率(RPS),探讨了酵母免疫多糖对受免斑点叉尾免疫应答的增强作用。结果表明,用添加200.0 mg/(kg.d)酵母免疫多糖的饲料投喂受免斑点叉尾,不仅可以使受免斑点叉尾对灭活嗜水气单胞菌的免疫应答水平提高,增强抵抗嗜水气单胞菌人工感染的能力,而且还具有一定的促进生长和改...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
吴慧 陶妍
NK-lysin是毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生的具有抗菌作用的多肽,在机体免疫系统中发挥重要作用,被认为是抗生素的理想替代品。NK-lysin的生物学功能主要由其成熟肽(m NK-lysin)决定。本文在已有斑点叉尾(Ictalurus punctatus)NK-lysin成熟肽原核重组表达载体p ET-32a(+)-m NK-lysin的基础上,通过PCR在m NK-lysin的5’端和3’端分别添加EcoRI和Xba I酶切位点,并在3’端添加6×His标签以便于纯化;扩增到的片段与表达载体p
[期刊] 华北农学报
[作者]
金红 V.V.Doljia V.V.PeremysloV
利用酵母双杂合体系统，检测与植物线状病毒组中热休克蛋白ＨＳＰ７０相结合的其它相关的ＢＹＶ蛋白。在体外构建两种编码融合蛋白的酵母表达质粒：一组为将编码转录激活区域的基因与ＨＳＰ７０ｒ基因融合并克隆到ｐＡＣＴ质粒中（ｐＡＣＴ·ＨＳＰ７０ｒ），它编码转录激活区域与ＨＳＰ７０蛋白的融合蛋白；另一组为将编码ＤＮＡ结合区域的基因分别与甜菜黄化病毒基因组其它７个基因融合并克隆到ｐＡＳ质粒中（ｐＡＳ·－），分别编码７个融合蛋白。经两质粒共转化酵母细胞后，通过双报告基因（Ｌａｃｚ基因和组氨酸Ｈｉｓ３基因）筛选获得阳性菌落，以阳性菌落总ＤＮＡ为模板，经体外特异性引物的ＰＣＲ扩增，检测出ＨＳＰ７０蛋白与ｐ２０蛋白之...
[期刊] 水产学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 陈明 周宇 谭芸 甘西
为研究罗非鱼感染无乳链球菌前后肝脏组织蛋白质的表达变化。本研究以吉富罗非鱼为材料,采用双向电泳技术分析其在无乳链球菌感染胁迫下24 h、48~144 h、12 d与对照组(未感染)肝脏组织蛋白质组的变化,对差异表达蛋白进行质谱分析鉴定。结果显示:吉富罗非鱼在无乳链球菌胁迫下,3个实验组的蛋白质图谱与对照组相比存在显著差异,共有30个蛋白质点发生显著改变,其中13个表达上调,15个下调,2个蛋白质点在感染12 d后消失。通过MALDI-TOF/TOF 4800质谱分析和数据库检索对这些蛋白质进行了功能分类,发现它们涉及到能量代谢、细胞防御与应激、消化免疫、抗氧化与排毒等许多方面。推测这些蛋白质可...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
周丽颖 钟立强 张世勇 陈校辉 刘洪岩 王明华
本研究对斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus)的发酵饲料进行了合理饲喂，并确定了其对斑点叉尾鮰生长、肠道菌群和代谢组学的影响。实验设置3组：持续投喂组(A)，间隔投喂组即向膨化饲料中按周间隔添加发酵饲料(B)，对照组仅投喂膨化饲料(C)。实验共持续6个月。实验结束后，对斑点叉尾鮰进行称重，并用16S rRNA扩增子测序技术和基于液相色谱的代谢组学技术分别检测斑点叉尾鮰肠道菌群组成以及代谢组学。结果显示，间隔投喂组斑点叉尾鮰终末体重(FBW)显著高于对照组和持续投喂组(P0.05)。厚壁杆菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteriota)、蓝藻门(Cyanobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteriota)、绿弯菌门(Chloroflexi)和异常球菌门(Deinococcota)是优势细菌门。优势肠道菌属包括未命名的叶绿体科中的一个属(norank＿f＿norank＿o＿Chloroplast)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、鲸杆菌属(Cetobacterium)、罗姆布茨菌属(Romboutsia)、微小杆菌属(Exiguobacterium)和狭义梭菌属(Clostridium＿sensu＿stricto＿1)。代谢组学分析表明，持续投喂组主要通过N-乙酰-D-半乳糖胺显著上调影响肠道菌群半乳糖和磷酸转移酶系统代谢通路(P<0.05)，进而影响鱼体对碳水化合物的消化吸收。而间隔投喂组差异代谢产物L-丝氨酸和L-苯丙氨酸显著上调(P<0.05)，影响斑点叉尾鮰肠道菌群硫代谢、氨基酸代谢等，继而影响斑点叉尾鮰能量吸收、抗炎症、免疫等能力。本研究为斑点叉尾鮰发酵饲料投喂方式的探索和健康绿色养殖提供了理论依据。
关键词：
斑点叉尾鮰 发酵饲料 肠道菌群 代谢组学
[期刊] 水产学报
[作者]
黄岩 李建 王学习 王琨 叶继丹
为了探讨饲料蛋白质和碳水化合物对斜带石斑鱼的互作效应,实验采用3×3因子设计,配制蛋白质水平(P)为38%、45%和52%,淀粉水平(S)为10%、20%和30%的9种实验饲料,分别饲喂斜带石斑鱼56 d。结果显示,38%粗蛋白与10%淀粉饲料组(38P/10S饲料组)增重率显著低于其他各组,52P/10S组增重率最高,但与45P/20S、45P/30S、52P/20S组差异不显著。增加饲料蛋白质或淀粉水平显著增加饲料效率、鱼体蛋白质与脂肪含量及肝糖原肝脂含量,而降低摄食率和鱼体水分含量。增加饲料蛋白质水
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张欣倩 张国财 包颖 赵博 张秋爽
采用超声法提取豚草活性物质,通过灌胃给药途径喂给小白鼠,以有机磷药剂敌敌畏(DDVP)和空白组作为对照,研究豚草提取液对哺乳动物肝脏羧酸酯酶(CarE)活性及蛋白质含量的影响。结果表明:豚草提取液对小鼠肝脏CarE活性有激活作用,在给药后6h内酶比活力值上升显著,达到15.006μmol/(min·mg);随后逐渐降低,24h时酶比活力值降至9.156μmol/(min·mg),基本恢复至正常水平。DDVP对小鼠肝脏CarE活性产生明显抑制作用,给药后其CarE活性始终处于被抑制状态,显著低于空白组,且恢复缓慢。豚草提取液和DDVP均对小鼠肝脏蛋白质含量有抑制作用。作为杀虫抑菌制剂,豚草活性物...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
赵慧 王遂 姜静 刘桂丰
小黑杨ＰｓｎＷＲＫＹ７０是能够响应盐胁迫的转录因子。为了进一步探究该转录因子在参与盐胁迫应答途径中与哪些蛋白质之间存在相互作用关系，本研究以１４０ ｍｍｏｌ／ｌ ｎａ Ｃｌ溶液处理过的小黑杨叶片为材料，利用热稳定核酸酶（Ｄｓｎ）构建了均一化的ＰＧａＤＴ７－ＤＥｓＴ酵母双杂交ＣＤｎａ文库，将ＰｓｎＷＲＫＹ７０基因亚克隆至ＰＧＢＫＴ７载体，形成ＢＤ－ＷＲＫＹ重组质粒，并以之为诱饵蛋白表达载体筛选小黑杨酵母双杂交ＣＤｎａ文库。经过２轮酵母双杂交筛选以及回转验证试验，初步选出了５种与ＰｓｎＷＲＫＹ７０相互作用的蛋白质。对所筛选出的５种蛋白质进行保守结构域分析发现：有２种预测蛋白（ＨＰ１和ＨＰ２，其中Ｈ．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
黄锋涛 熊海林 曹胜波 熊传喜 王敏 王卫民 吴兵 刘玉林 刘学芹
为构建基于杆状病毒表达系统的CCV新型亚单位疫苗,将CCV的囊膜蛋白基因ORF6克隆至杆状病毒转座载体pFastBacTM 1质粒中,并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得重组子rBacmid-ORF6。在脂质体介导下将该重组子转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒AC-ORF6。AC-ORF6感染的sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见重组杆状病毒呈多粒包埋,经间接免疫荧光、Western-blotting检测,CCV的ORF6蛋白可以在感染了AC-ORF6的sf9细胞中表达。研究表明,获得了插入ORF6基因的重组杆状病毒,并且该基因可以在重组杆状...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
张海强 陈建明 张珏锋
为了筛选出适合褐飞虱Nilaparvata lugens类酵母共生菌蛋白质提取的细胞破碎方法,选择超声波破碎法、反复冻融法和液氮研磨法等3种细胞破碎方法提取共生菌吡虫啉敏感菌株和抗性菌株蛋白质。结果表明:菌体显微形态观察发现,使用超声波破碎法和液氮研磨法处理类酵母共生菌的细胞破碎效果均优于反复冻融法,处理后菌体分布均匀,破碎彻底;72 h是提取菌体蛋白质的最佳培养时间。定量分析表明:用超声波破碎法提取蛋白质质量浓度最高,液氮研磨法次之,反复冻融法提取蛋白质质量浓度的效果最差,各方法所提蛋白质质量浓度差异显著(P
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