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[期刊] 中国农业科学
[作者]
王帅玉 盛清 吕正兵 陈健 聂作明 王丹 刘立丽 沈红丹 舒建洪 陈剑清 吴祥甫 张耀洲
【目的】从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条新基因Bm595,分析Bm595在家蚕体内的表达和定位情况。【方法】利用生物信息学分析Bm595序列,并构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,以纯化的融合蛋白抗原,制备多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法分析Bm595基因在家蚕各组织中的分布。用免疫细胞化学的方法研究Bm595蛋白的定位情况。【结果】Bm595在五龄幼虫的转录水平最高,卵中最低。Bm595在家蚕五龄幼虫各组织中的转录水平由高到低依次为:睾丸、丝腺、肠、头、卵巢、脂肪体、表皮、气管。在表达水平方面,睾丸的表达量最高,其次是丝腺和头,脂肪体有较明显的表达。以家蚕Bm5细...
关键词：
Bm595 组织分布 亚细胞定位
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张奎 潘光照 苏晶晶 谈娟 徐曼 李钰添 崔红娟
【目的】鉴定、克隆家蚕(Bombyx mori)glial cell missing(BmGcm)基因,分析其mRNA表达及亚细胞定位特征。制备多克隆抗体,同时在细胞水平进行过表达,检测Gcm对细胞增殖和周期的影响,为探究BmGcm功能打下基础。【方法】利用RACE方法克隆获得BmGcm全长c DNA序列,利用ORF Finder和SMART等在线工具对BmGcm基本序列特征和结构信息进行分析,运用Clustalx和MEGA 6.0等软件对多物种Gcm蛋白进行同源序列比对和进化分析。采用RT-PCR和qR
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谈娟 张奎 徐曼 陈思源 崔红娟
【目的】克隆家蚕整合素基因BmintegrinαPS3,分析其mRNA表达及亚细胞定位特征,并进行原核表达及蛋白纯化,为进一步探究BmintegrinαPS3在家蚕中的功能奠定基础。【方法】利用RACE方法克隆获得BmintegrinαPS3的cDNA全长序列;采用RT-PCR方法检测BmintegrinαPS3的时空表达;在原核表达系统中表达获得BmintegrinαPS3重组蛋白;并构建BmintegrinαPS3真核表达载体,转染家蚕胚胎细胞系分析其蛋白亚细胞定位。【结果】家蚕整合素基因BmintegrinαPS3编码框全长为2 895 bp,编码965个氨基酸,含有整合素家族蛋白典型的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘丽华 沈卫德 李兵 秦佳梅 刘涛
【目的】研究家蚕细胞周期蛋白家族基因（ＣｙＣｌｉｎＡ、ＣｙＣｌｉｎＢ、ＣｙＣｌｉｎＢ３、ＣｙＣｌｉｎＥ、ＣｙＣｌｉｎｌ１）在滞育卵与即时浸酸处理的滞育卵发育过程中的转录活性，为家蚕胚胎发育及细胞周期调控机制研究提供参考。【方法】以家蚕品种大造为试材，取产后１～８ｄ的滞育卵及产后２０ｈ即时浸酸的非滞育卵，提取其ＲｎＡ反转录成ＣｄｎＡ，采用实时荧光定量ＰＣＲ方法分析家蚕ＣｙＣｌｉｎ家族基因在胚胎发育过程中的转录水平。【结果】在即时浸酸处理的家蚕非滞育卵中均能检测到ＣｙＣｌｉｎ家族基因的表达，但不同发育阶段ＣｙＣｌｉｎ家族基因表达量差异很大，在发育开始的１～３ｄ，ＣｙＣｌｉｎ家族基因变化显著，说明此．．．
关键词：
家蚕 细胞周期蛋白 胚胎发育 基因表达谱
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘丽华 沈卫德 李兵 王文兵
【目的】研究家蚕细胞周期蛋白家族基因(CyclinA、CyclinB、CyclinB3、CyclinE、CyclinL1)在丝腺及其他组织中的表达情况,为探讨细胞周期蛋白家族基因在细胞周期中的作用提供参考。【方法】取家蚕5龄3d幼虫的脑、脂肪体、中肠、丝腺、马氏管、精巢、卵巢及血液等组织,用Trizol提取各组织的总RNA并反转录合成cDNA。以Actin3为内参基因,合成的cDNA为模板,利用每个基因的特异性引物进行实时荧光定量PCR,检测细胞周期蛋白家族基因在转录水平上的表达情况。【结果】在丝腺中,CyclinE基因的表达量最高,CyclinA、CyclinL1基因表达较弱,而Cyclin...
关键词：
细胞周期蛋白 丝腺 表达谱 家蚕
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘丽华 沈卫德 李兵 王文兵
【目的】研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedroviruses,BmNPV)对家蚕卵巢细胞系(BmN)细胞周期及细胞周期蛋白基因转录水平的影响。【方法】用BmNPV感染家蚕BmN细胞,分别在病毒感染后的不同时间(12,24,36,48h),应用实时荧光定量PCR方法检测细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB、CyclinE的表达情况,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。【结果】BmNPV感染24h后,BmN细胞出现明显感染症状,变为圆形;48h后细胞核内出现多角体。随着感染时间的延长,CyclinA、CyclinB、CyclinE基因表达量均下降,分别...
关键词：
BmNPV Cyclin基因 细胞周期
[期刊] 西南农业学报
[作者]
高建华 杨大平 杨伟克 丁志伟
【目的】探究家蚕感染BmNPV后,不同组织碱性磷酸酶(ALP)及其基因表达变化规律,为阐明BmNPV的侵染机制及培育抗NPV蚕品种的选育提供借鉴和思考。【方法】通过经口添食BmNPV,检测分析家蚕中肠、血淋巴和脂肪体ALP基因的表达水平及其编码的碱性磷酸酶活性变化情况。【结果】家蚕中肠ALP基因在感染BmNPV后6、9和12 h呈现上调表达趋势,其编码的碱性磷酸酶活性显著高于对照组,在感染24 h基因表达被抑制,同时酶活性显著降低。血淋巴碱性磷酸酶及ALP基因对BmNPV的响应略晚于中肠,ALP基因在感染9 h开始上调表达,在12 h表达量最高,在24 h表达量急剧降低。碱性磷酸酶活性在9和12 h极显著高于对照组,而在24 h急剧减弱,显著低于对照组。脂肪体ALP基因表达量及碱性磷酸酶活性仅在感染12 h显著高于对照组。【结论】家蚕感染BmNPV后,中肠、血淋巴和脂肪体ALP基因表达水平及碱性磷酸酶活性变化均是呈现先升高后急剧减弱的趋势。基因的表达情况与酶活性变化规律一致,这与家蚕感染BmNPV后,其自身机体的生理代谢进程存在紧密联系,暗示碱性磷酸酶在家蚕抗病毒过程中发挥了重要作用。
关键词：
BmNPV 碱性磷酸酶 基因表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
武宁宁 刘翠 汪惟超 张俊玲
为明确牙鲆(Paralichthys olivaceus)foxl3的结构和功能,通过PCR克隆和测序获得了牙鲆foxl3的编码区(coding sequence, CDS)和3'非编码区(untranslated region, UTR),共1089 bp,其中开放阅读框(open reanding frame,ORF) 750 bp,编码249个氨基酸。Foxl3二级结构包含一个FH (Forkhead)结构域;三级结构则包含20.48%的α螺旋、15.26%的延伸链和64.26%的无规则卷曲,不均匀分布在蛋白多肽链上。比较多种生物Foxl3氨基酸序列发现,牙鲆Foxl3与其他鱼类相似度较高,其中与大菱鲆(Scophthalmus maximus)同源性最高,达到91.97%,与斑马鱼(Danio rerio)的同源性最低,仅为66.27%。通过氨基酸序列比对发现,与Foxl2相比, Foxl3在不同物种之间的差异更为显著,说明foxl3的进化速度比foxl2快。亚细胞定位显示,Foxl3细胞融合蛋白在细胞核和细胞质中表达。实时荧光定量PCR检测结果显示foxl3在牙鲆卵巢中表达量最高,显著高于精巢等其他组织,暗示foxl3可能在牙鲆卵巢发育与分化中具有重要意义。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵为民 涂枫 方晓敏 王学敏 付言峰 李碧侠 周李生 任守文
运用RT–PCR技术克隆猪PKM2基因的编码区序列,对该序列进行生物信息学分析,研究PKM2基因的组织表达及亚细胞定位。结果显示:猪PKM2基因CDS全长1 596 bp,编码531个氨基酸;预测其蛋白相对分子质量为5.79×104,等电点为7.96,含有多个磷酸化位点,为稳定蛋白;PKM2蛋白含有丙酮酸激酶家族的barreldomain和alpha/beta domain 2个结构域,其蛋白二级结构中α–螺旋和无规则卷曲占主要类型;猪PKM2蛋白序列在物种间非常保守,系统进化树分析表明,该蛋白与兔的亲缘关系最近;组织表达显示,猪PKM2基因在肾、小肠中相对高表达,而在肝脏与肌肉中相对低表达;亚细胞定位显示,PKM2蛋白在猪3D4/21和PK15细胞中表达于细胞质,而不表达于细胞核。
[期刊] 华北农学报
[作者]
腾海艳
为研究Osp39基因在水稻叶绿体蛋白质输入调控过程中的作用，采用生物信息学方法对水稻的Osp39基因进行了序列搜索和启动子上游元件分析，对其编码的OsP39蛋白进行了同源性比对、结构和性质预测，并分别通过定量PCR和瞬时表达进行了基因的组织表达分析和蛋白质亚细胞定位分析。结果显示，Osp39基因位于水稻5号染色体，基因编码区含11个外显子，无可变剪切方式。Osp39启动子中含有I box、ATCT-motif等多种光响应和叶绿体调节元件，转录分析也显示，在苗期和扬花期，Osp39基因在水稻叶、叶鞘等绿色组织中的转录水平均极显著高于根、花等非绿色组织。OsP39蛋白稳定性好，耐热，分子量约38.7 ku,理论等电点pH值8.64,共含有361个氨基酸残基，富含甘氨酸，第245—271氨基酸残基形成高度保守的L6 loop区，为OMP85蛋白家族的特征性结构域，空间结构预测显示，OsP39蛋白是富含β-折叠片的β-桶状膜蛋白，亚细胞定位结果显示，OsP39蛋白定位于水稻叶绿体膜。上述结果表明，Osp39是一个叶绿体膜功能相关基因，参与水稻的光响应和叶绿体功能调节。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苏晶晶 陈思源 张奎 余霜 李钰添 梁航华 赵羽卒 晁会娟 崔红娟
【目的】克隆家蚕(Bombyx mori)蛋白酶O基因Cathepsin O(Bm Cat O),分析其m RNA表达特征,通过原核表达、蛋白纯化和多次免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,为进一步探究组织蛋白酶O在家蚕变态发育中的功能奠定基础。【方法】利用RACE技术克隆获得家蚕组织蛋白酶O的全长c DNA序列,然后采用RT-PCR对其时空表达特征进行研究。从NCBI下载其他物种组织蛋白酶O基因序列,利用Clustalx和MEGA 6.0软件进行同源比对和进化分析。选取特异性较高的片段设计特异性引物,将PCR扩增产物连接至PET32a质粒,转化至E.coil表达菌株Rosetta(DE3),经IP...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谭鹏 徐曼 梁航华 张亚军 胡仁建 崔红娟
【目的】克隆家蚕（ＢｏｍＢｙｘ ｍｏｒｉ）ＧＡＴＡ转录因子ＢｍＧＡＴＡ６，将其在原核细胞中进行表达，纯化重组蛋白，多次免疫小鼠获得ＢｍＧＡＴＡ６多克隆抗体，为进一步分析ＢｍＧＡＴＡ６在家蚕变态发育中的功能提供抗体条件。【方法】解剖家蚕获得５龄第３天的各组织及４眠至熟蚕整个时期的中肠组织，在液氮中研磨为粉末，利用Ｔｒｉｚｏｌ法提取ｒＮＡ，体外反转录得到ｃ ＤＮＡ。基于家蚕ＢｍＧＡＴＡ６的基因编码序列设计全长特异引物，并以Ｂｍ ＡｃＴｉＮ３作为内参，进行家蚕５龄第３天各组织及４龄眠期至熟蚕期各时期的ｒＴ－Ｐｃｒ检测。设计原核表达引物，扩增原核表达片段连接到Ｐ ＥＴ３２Ａ载体上，构建原核表达载体，转．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘丽华 沈卫德 李兵 秦佳梅 郁有兰 马鹏宇
[目的]研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对家蚕卵巢细胞系(Bm N)细胞cyclin A基因表达及细胞周期的影响。[方法]通过脂质体转染试剂将针对cyclin A基因的特异性siRNA片段转入家蚕Bm N细胞,采用SYBR荧光定量PCR法检测cyclin A mRNA的表达,流式细胞技术检测细胞周期变化。[结果]转染siRNA-cyclin A可有效下调cyclin A基因的表达,转染48 h后,cyclin A mRNA表达量降低到对照的37.4%;流式细胞仪分析表明:与对照组相比,转染组G0/G1期细胞比例显著增加,细胞周期阻滞于G1期。[结论]靶...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘丽华1 沈卫德2 李兵2 秦佳梅1 郁有兰3 马鹏宇1
[目的]研究小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）对家蚕卵巢细胞系（BmN）细胞 cyclinA基因表达及细胞周期的影响。[方法] 通过脂质体转染试剂将针对 cyclinA 基因的特异性 siRNA 片段转入家蚕 BmN 细胞，采用 SYBR 荧光定量 PCR 法检测 cyclinA mRNA 的表达，流式细胞技术检测细胞周期变化。[结果]转染 siRNA-cyclinA 可有效下调 cyclinA 基因的表达，转染 48 h 后，cyclinA mRNA 表达量降低到对照的 37.4%；流式细胞仪分析表明，与对照组相比，转染组 G0/G1期细胞比率显著增加，...
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