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[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴萍 刘挺 覃光星 郭锡杰
【目的】筛选家蚕(Bombyx mori)中肠感染质型多角体病毒的应答基因,为阐明家蚕感染质型多角体病的分子机制奠定基础。【方法】应用含有约23 000个家蚕基因组寡核苷酸芯片比较分析感染家蚕质型多角体病毒24、48及72 h的中肠试验组与中肠对照组的差异表达基因;结合生物信息学工具对差异表达基因的功能注释、分类及涉及的信号通路等进行分析;应用实时荧光定量PCR验证17个基因的差异表达。【结果】在感染24、48及72 h后,分别得到了9、51及258个差异表达基因。KEGG通路分析表明,在感染48及72 h后,大多数涉及到代谢通路的基因的表达水平下调,所有涉及到核糖体通路和蛋白酶体通路的基因的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高坤 邓祥元 裘智勇 覃光星 郭锡杰
【目的】分析家蚕感染质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)后中肠组织中蛋白质的差异表达,为从蛋白质分子水平上探索家蚕感染BmCPV后的分子应答机制奠定基础。【方法】通过蛋白质双向凝胶电泳技术(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)对BmCPV病毒感染组和灭菌水对照组家蚕p50的中肠组织蛋白进行比较,通过基质辅助质量飞行时间质谱技术(MALDI-TOFMS)和家蚕蛋白质数据库检索对所得到的差异蛋白点进行鉴定与分析。【结果】2-DE电泳结果比较分析表...
关键词：
家蚕 质型多角体病毒 中肠 差异蛋白
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高坤 邓祥元 吴萍 覃光星 侯成香 钱荷英 耿涛 郭锡杰
【目的】克隆家蚕Arylphorin的cDNA全长序列,利用生物信息学对该序列进行分析,检测该基因在家蚕感染质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)后的表达量变化模式,为进一步研究其生物学功能奠定基础。【方法】以家蚕中肠总RNA为模板反转录合成cDNA,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆家蚕Arylphorin的全长cDNA;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其组织表达模式和在家蚕感染BmCPV后的表达差异。【结果】克隆得到了家蚕Arylphorin的全长cDNA(命名为BmAryl),在GenBan...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭睿 刘卫星 潘中华 薛仁宇 曹广力 朱越雄 贡成良
【目的】构建能够感染家蚕和茶尺蠖的重组家蚕核型多角体病毒(rBmNPV),解决EoNPV扩增困难而不易获得的难题。【方法】通过Bac-to-Bac系统构建具备BmNPV的多角体蛋白基因(polh)表达盒和EoNPV的解旋酶基因(hel)表达盒的重组家蚕核型多角体病毒。【结果】家蚕或家蚕细胞扩增的rBmNPV可以感染茶尺蠖并致病,表明rBmNPV的宿主域拓展至茶尺蠖。【结论】成功构建了能够感染茶尺蠖的rBmNPV,为利用家蚕作为宿主来生产重组病毒杀虫剂打下基础。
关键词：
EoNPV BmNPV 重组病毒 宿主域
[期刊] 西南农业学报
[作者]
邵榆岚 张一川 唐芬芬 张永红 朱峰 白兴荣
[目的]对云南蚕区家蚕品种的家蚕质型多角体病毒病进行抗性分类,为抗病育种、抗病关键基因的研究提供参考。[方法]在前期工作基础上选取58个家蚕品种对其进行家蚕质型多角体病毒感染率的调查,3龄起蚕添食相同浓度的家蚕质型多角体病毒液,接种后第7天,镜检确定感染数,采用方差分析、多重比较、聚类分析等方法相结合进行数据分析。[结果]不同家蚕品种对家蚕质型多角体病毒的感染率差异显著(P<0.01),采用聚类分析K-Mean法获得4个抗性分类,10品种和14品种为高抗品种,高感品种有23个。采用系统聚类法谱系图获得2大类,4个小分类,高抗品种5个,高感品种10个。[结论]云南蚕区部分家蚕品种资源对BmCPV的抗性能力分为4个水平,根据系统聚类法,高抗品种占9%,高感品种占17%,中感品种占34%,中抗品种占40%。
关键词：
家蚕 质型多角体病毒 抗性 聚类分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高坤 尚梦珂 钱荷英 覃光星 郭锡杰
【目的】筛选家蚕与二分浓核病毒（ＢｏｍＢｙｘ ｍｏｒｉ Ｂｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ｓｔｒａｉｎ，Ｂｍ Ｂｄｖ－Ｚｊ）感染相关的差异表达基因，鉴定家蚕与病毒感染有关的调控基因，为进一步阐明家蚕抗Ｂｍ Ｂｄｖ－Ｚｊ的分子机制提供理论依据。【方法】采用ｉｌｌｕｍｉｎａ高通量测序技术，构建家蚕品种ｊｓ口服感染Ｂｍ Ｂｄｖ－Ｚｊ的数字基因表达谱，为排除个体间差异，以１０头蚕作为一个样本用于ｄｇｅ检测。样本中基因的差异表达检测通过严格的运算法则进行，对差异检验的Ｐ值（Ｐ ｖａｌｕｅ）作多重假设检验校正，通过控制Ｆｄｒ（Ｆａｌｓｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ）来决定Ｐ值的域值。本研究中．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王强 陈克平 郭忠建 姚勤 王海燕 陈慧卿
【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPVorf90克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3'末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其转化到含穿梭载体bacmid的感受态细胞DH10Bac中,通过转座作用,经白斑筛选得到重组穿梭载体。纯化DNA,用脂质体介导转染家蚕BmN细胞,得到重组病毒bacmid-egfp-90。【结果】转染细胞72h后在荧光显微镜下可以观察到强烈的绿色荧光。重组病毒穿刺接种家蚕蛹,5d后观察到很强的荧光。结果表明构建的B...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
魏智薪 辛鲁生 白昌明 李亚楠 张淑敏 李成华 王崇明
Ets蛋白是宿主MAPK信号通路下游的一类可参与调控病毒基因转录复制的重要转录因子。本研究通过基因克隆成功获得魁蚶(Scapharca broughtonii) Ets家族9条基因(分别命名为ETS-1～ETS-9),开放阅读框(ORF)大小分别为1065、1290、1569、912、1344、1404、1521、1968和1191 bp,并分别编码354、429、522、303、447、468、506、655和396个氨基酸。系统进化树分类表明,本研究所获得的基因均属Ets家族。对ETS-1和ETS-3的氨基酸序列和三维结构分析表明,其均含有高度保守的ETS结构域。在不同水温条件下,通过人工注射牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)对魁蚶进行感染,并对病毒拷贝数和Ets的相对表达量进行定量分析。结果显示,ETS-1和ETS-3只在高温阳性组中相对表达量显著上调,与病毒拷贝数在高温条件下增长趋势呈正相关;ETS-4和ETS-8只在低温阳性组中相对表达量显著上调,但在高温阳性组中ETS-4和ETS-8的相对表达量与病毒拷贝数呈负相关;初步研究结果显示,从魁蚶Ets基因中筛选出2条Ets基因(ETS-1和ETS-3),在高温条件下(16±2)℃,其可能参与正向调控病毒Os HV-1的复制过程。本研究为进一步探索魁蚶在夏季因感染牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)而导致的大量死亡提供了科学数据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
夏定国 张国政 王文兵 赵巧玲 唐顺明
【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA,通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制效果相当(滴度TCID50的最大抑制差值为4.00左右);经RNAi的不同时间点的gp64mRNA表达水平均明显下调(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高贵田 陈克平 姚勤 陈慧卿 王林玲 徐家萍 赵远 王永杰
【目的】探讨家蚕中肠羧酸酯酶活力变化及羧酸酯酶基因表达差异与家蚕抗浓核病毒之间的关系,阐明其抗性的分子机理。【方法】以易感浓核病毒中国株家蚕品系华八和完全抗性品系BC8(华八的近等基因系)为材料,用BIO-TEK SYNERGY测定经口接种病毒(以下简称接种)后12h、36h、72h2个品系中肠的羧酸酯酶活力,并用实时荧光定量PCR研究接种后12h、36h、72h中肠羧酸酯酶基因的表达差异。【结果】接种后12h中肠羧酸酯酶活力BC8接种组分别是BC8对照组、华八接种组和华八对照组的3.28倍、2.26倍和3.02倍,差异达到极显著水平(P<0.01)其它时间段的供试组之间无统计学差异;接种后1...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
璩檾昇 浦仕奇 徐梅 方昱嘉 唐旭东 钱平
【目的】家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)感染引发的微粒子病是影响蚕业发展的重要病害。为了揭示可变剪接(AS)基因在家蚕响应微孢子虫感染中的作用，对其中肠内的AS事件进行分析。【方法】利用Illumina Hiseq TM 4000测序平台，对健康家蚕(对照组)和被微孢子虫感染的家蚕中肠组织进行转录组测序。使用rMATS软件对样品中的AS事件与差异剪接基因(DSGs)进行鉴定，并对DSGs进行GO富集和KEGG信号通路分析。【结果】在对照组和感染组中分别检测到5 346个和4 992个AS事件，两组的AS事件类型都以外显子跳跃(SE)事件为主，差异分析发现了25个显著的DSGs。GO富集分析表明，DSGs主要富集在21个条目，其中以细胞过程、物质代谢、结合、催化活性的基因数量较多；KEGG信号通路分析显示，DSGs富集数较多的是信号传导、免疫系统、多糖生物合成与降解、能量代谢等通路。【结论】家蚕中肠组织存在大量AS事件，在微孢子虫感染过程中存在25个DSGs,其功能涉及新陈代谢和细胞免疫等。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王延稳 吕志强
【目的】研究感染绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）和金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）后，家蚕中肠和脂肪体中6种抗菌肽基因表达的变化，为家蚕肠道免疫研究提供一定的理论依据。【方法】给家蚕喂食感染绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌，以喂生理盐水为对照，利用半定量RTPCR方法，检测感染不同时间（1，2，4，8，16，24 h）后中肠和脂肪体中6种抗菌肽基因表达的变化。【结果】喂食绿脓杆菌1，2 h后，中肠中抗菌肽Gloverin2、Lebocin、CecropinB6、CecropinD和Moricin的相对表达量显著上调；喂食金黄色葡萄球菌1，2，4 ...
关键词：
家蚕 细菌 抗菌肽基因 半定量RTPCR
[期刊] 西南农业学报
[作者]
唐聘芳 赵晓清 梁橘 陈厚忠
“防消灵”是四川省蚕研所复配的新型、广谱、高效、安全、无腐蚀性及化学性能稳定的液粉兼用消毒剂。本试验以含１％有效氯漂白粉药物作对照，用“防消灵”对家蚕微粒子孢子虫、家蚕病毒多角体消毒，经口接种添食家蚕的方法对防消灵作了试验。结果表明，其消毒防病效果达９８％～９９．７％，经用电镜扫描观察，病原物出现变形、粘连、裂孔、药物内渗、溶解和形态结构破坏而灭活。经农村小试、中试，其消毒防治效果与漂白粉对照比较相当或略佳。
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
夏春胜 周性恒
本文利用现代分析手段,分析了褐刺蛾质型多角体病毒多角体蛋白组成与含量,发现其由16种氨基酸组成,富含谷氨酸和天冬氨酸,不含脯氨酸,碱性氨基酸与酸性氨基酸的比值为0.54。
关键词：
昆虫病毒 褐刺蛾 多角体 蛋白质
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆改 程廷才 蒋亮 金盛凯 林平 胡翠美 夏庆友
【目的】克隆和鉴定1个家蚕中肠特异启动子,为研究家蚕的免疫应答和应用研究提供新的工具。【方法】从家蚕品种大造中提取基因组总DNA,用PCR方法克隆家蚕中肠特异表达基因BmAPN(GenBank登录号:BAA33715.1)的上游调控序列。利用此序列构建以EGFP为报告基因的转基因表达载体pBac[BmAPN-EGFP-SV40,3×P3-DsRed],通过显微注射获得转基因家蚕,在个体水平上检测启动子的活性。【结果】所克隆的BmAPN启动子长度为1 598 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕中肠特异表达,与内源基因BmAPN的表达特征一致。该启动子在家蚕幼虫时期活性相对较高,且在起蚕期的活性...
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家蚕 中肠特异 启动子 转基因
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