[目的]本试验旨在探讨宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation, IUGR)对猪胎盘细胞增殖、凋亡及抗氧化基因和蛋白表达的影响。[方法]从刚分娩的母猪中选择正常初生重(normal birth weight, NBW)和IUGR仔猪对应的胎盘各5个,分为对照组和宫内发育迟缓组。采用免疫组化法检测胎盘细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡,采用荧光定量PCR检测胎盘NRF2、HO-1、NQO1、SOD1、SOD2、GCLC和GCLM基因的表达,用Westen blot(WB)检测胎盘抗氧化蛋白NRF2和HO-1的表达。[结果]对照组可以观察到较强的PCNA染色,宫内发育迟缓组PCNA染色较弱。IUGR组和对照组凋亡细胞指数分别为19.63%与12.56%,IUGR组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05)。WB结果显示,对照组与宫内发育迟缓组NRF2和HO-1蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。[结论]IUGR会降低猪胎盘细胞增殖,增加猪胎盘细胞凋亡且降低猪胎盘抗氧化基因的表达。

【目的】研究大豆卵磷脂(soya lecithine,SL)对子宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)猪肠道生长、黏膜氧化应激(oxidative stress,OS)和热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)表达的影响。【方法】试验共选用12头7 d IUGR仔猪和6头正常体重(NBW)仔猪,所有IUGR仔猪随机分成两组(n=6),分别饲喂基础人工乳(IUGR组)和添加1.5%SL的人工乳(IUGR+SL组),所有NBW仔猪饲喂基础人工乳(NBW组,n=6),试验期7 d。【结果】IUGR显著降低14 d仔猪空肠及其...

[目的]本文旨在研究精氨酸对子宫内发育迟缓(IUGR)仔猪抗氧化功能和精氨酸代谢的影响。[方法]选择6头胎次和体况相近的妊娠母猪,分娩后,分别从每头母猪所产仔猪中挑选1头正常初生体质量(NBM)新生仔猪和2头IUGR新生仔猪,即6头NBM新生仔猪和12头IUGR新生仔猪。所有IUGR仔猪随机分成2组,分别饲喂基础人工乳(IUGR组,n=6)和添加6 g·L-1精氨酸(Arg)的基础人工乳(IUGR+Arg组,n=6),所有NBM仔猪饲喂基础人工乳(NBM组,n=6),试验期7 d。[结果]与IUGR组相比

[目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后DKK2基因的表达量,筛选干扰效率最高的1条siRNA。用该siRNA转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h,利用Caspase3活性和Annexin-V FITC/PI双染法检测干扰DKK2基因对细胞凋亡的影响;用CCK8细胞计数法检测

【目的】研究鹿茸对小鼠脑组织抗氧化指标和凋亡相关蛋白表达的影响,为鹿茸的抗氧化和抗凋亡作用研究提供资料。【方法】选用48只6周龄雌性昆明小鼠,随机分为正常组(灌胃生理盐水,n=12)和高、中、低剂量鹿茸冻干粉组(分别灌胃鹿茸冻干粉1,3和5g/kg,n=12)。各组分别灌胃63d,第64天处死小鼠并取材。用试剂盒检测小鼠脑组织匀浆液中单胺氧化酶(Monoamine oxidase,MAO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的...

【目的】探究苦参碱对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）增殖、凋亡及抗氧化能力的影响。【方法】利用含0（A组），25（B组），50（C组），75（D组）和100 μg/mL（E组）苦参碱的培养基培养奶牛乳腺上皮细胞。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测BMECs活性，采用流式细胞仪（AnnexinV/PI双染法）检测苦参碱对BMECs凋亡的影响，并检测苦参碱对BMECs抗氧化酶活性及丙二醛（MDA）含量的影响，采用real-time PCR对BMECs中Caspase-3、p53、STAT1和SOCS3

[目的]本文旨在研究日粮添加二甲基甘氨酸钠(DMG-Na)对宫内发育迟缓(IUGR)断奶仔猪器官指数、肝脏抗氧化能力和血清免疫指标的调节作用。[方法]分别选择正常初生体质量(NBW)仔猪和IUGR仔猪各16头,21日龄断奶,饲喂基础日粮或补充1 g·kg~(-1)DMG-Na的试验日粮至49日龄。共分成4个处理组,即NC(NBW+基础日粮)组、ND(NBW+DMGNa日粮)组、IC(IUGR+基础日粮)组、ID(IUGR+DMG-Na日粮)组,每组8头猪。[结果]与NBW仔猪相比,IUGR仔猪肾脏指数显著降低(P<0.05),肝脏谷胱甘肽(GSH)含量减少(P<0.05),抑制羟自由基能力显著降低(P<0.05),血清补体3(C3)水平下降(P<0.05),血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量显著升高(P<0.05),肝中GST活力显著增强(P<0.05),血清C3水平和白细胞介素10(IL-10)含量显著提高(P

为探讨酪蛋白酶解物对宫内生长迟缓仔猪小肠生长发育的影响,选择胎儿在母体内发育迟缓(IUGR)初生仔猪15头,分为新生对照组(N)、酪蛋白组(C)和酪蛋白酶解物组(CH),以牛乳为基础日粮,C组用1.5%酪蛋白溶液取代10%(体积分数)的牛乳,CH组用1.5%酪蛋白酶解液取代10%(体积分数)的牛乳,人工饲喂3 d后宰杀取样。结果表明:CH组仔猪小肠黏膜DNA含量及麦芽糖酶活性较N组显著提高(P0.05)。此外,与N组仔猪相比,C组仔猪小肠各段绒毛高度都有不同程度降低(P>0.05),而CH组仔猪小肠各段绒毛高度与N组仔猪接近,未有明显变化。提示...

【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间,收集细胞及培养液,应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10ng·ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖,且随浓度增加抑制作用加大,呈现剂量依赖性,其中10ng·ml-1TGF-β1组与对照组差异显著(P<0.05);10ng·ml-1TGF-β1作用于乳腺上皮细胞,随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,其中6、12和24...

为了探讨三氯生(TCS)对硬骨鱼类性腺损伤作用的分子机制,通过半静态水体暴露法对斑马鱼(Danio rerio)进行染毒,将斑马鱼暴露在2种不同TCS浓度(0.034 mg/L和0.068 mg/L)溶液中,同时设置空白对照组,42 d后,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,探究TCS对斑马鱼卵巢抗氧化及凋亡相关基因表达的影响。结果发现:与空白对照相比,SOD、CAT和GPx1a基因在0.068 mg/L TCS处理组表达水平显著下调,GPx1和MT-2基因在0.034 mg/L浓度组表达显著上调;Bcl-2基因在0.068 mg/L浓度组表达显著下调,p53基因在0.034 mg/L浓度组表达极显著上调,Bax在TCS处理组中均显著上调。以上研究结果表明:较高浓度TCS显著影响了斑马鱼卵巢抗氧化和凋亡相关基因的表达,从而产生了氧化损伤和加速细胞凋亡的发生。

表皮生长因子受体（EGFR）在许多实体肿瘤中过度表达，建立稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞株，有利于为研究犬或人类肿瘤疾病提供良好的细胞模型和研究基础。首先制备目的片段以构建EGFR基因过表达载体，与慢病毒包装载体共同转染至293T细胞中，48 h后提取上清液经纯化获得EGFR基因过表达慢病毒液。将其转染至MDCK细胞中，经嘌呤霉素筛选和单细胞克隆后观察感染效率，RT-qPCR和Western Blot、间接免疫荧光分别检测基因及蛋白的表达，建立EGFR蛋白过表达MDCK细胞株。使用流式细胞仪分别检测过表达及对照细胞株的细胞凋亡和细胞周期。犬EGFR基因位于18号染色体，由编码跨膜糖蛋白的30个外显子组成。经反应体系，PCR产物交换入线性化表达载体，获得了阳性转化子8个，大小为738 bp。所获EGFR基因过表达慢病毒滴度为3.5×10⁸ TU/mL。转染MDCK细胞后在荧光显微镜下观察荧光效果显著，经检测EGFR基因及其蛋白在细胞中的表达量显著升高。间接免疫荧光试验显示，EGFR在细胞中表达明显增强。过表达细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率显著上升，且在G2/M期发生阻滞。成功建立一株稳定的犬EGFR过表达MDCK细胞株，犬EGFR的过表达催化了细胞分裂，使DNA复制加快，同时刺激了细胞凋亡。

以0.1、1.0和10.0μg/mL 3种剂量脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体处理体外培养的3T3-L1前脂肪细胞或经其诱导分化的脂肪细胞,采用四唑盐(MTT)比色法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖能力,以乳酸脱氢酶漏出率为指标观察脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体对脂肪细胞的细胞毒性,用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色分析脂肪细胞凋亡情况以及油红O染色法测定脂肪细胞脂肪含量。结果表明:用不同质量浓度(0.1、1.0和10.0μg/mL)的脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体处理可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,并影响脂肪细胞的脂肪合成(P<0.05),但对脂肪细胞无明显的细胞毒作用;还可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改...

【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率...

【目的】研究粒细胞集落刺激因子(granule cell stimulating factor,GCSF)在羊成纤维细胞体外培养中对其增殖、周期和凋亡的影响,为今后基于羊GCSF为靶标诱导全能干细胞进行分子遗传育种研究提供理论依据。【方法】将羊GCSF真核表达质粒pRTL1-GCSF和对照载体质粒pRTL1分别转染到1×10~5个细胞/mL的羊成纤维细胞中,培养48 h后,利用Trizol法分别提取总RNA并反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR检测羊GCSF在羊成纤维细胞中的瞬时表达水平。通过GCSF依赖型细胞系NFS-60,利用细胞活力检测试剂alamarBlue测定转染48 h后羊成纤维细胞培养上清中分泌表达的GCSF的生物学活性。通过HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,用Ni-NTA凝胶对细胞表达至细胞培养基中的GCSF蛋白进行纯化,并SDS-PAGE检测。加入纯化的30 ng·mL~(-1) GCSF蛋白后在24和48 h时,通过alamarBlue测定羊成纤维细胞的增殖状态,利用流式细胞术检测羊成纤维细胞的细胞周期和凋亡变化。【结果】羊GCSF真核表达质粒转染羊成纤维细胞48 h,检测发现在羊成纤维细胞中GCSF表达量得到显著提高。在羊成纤维细胞中,转染了pRTL1-GCSF质粒的羊GCSF表达量是转染了pRTL1空载对照组的(50 615.92±4 738.83)倍(P<0.01);羊成纤维细胞瞬时分泌表达的含有GCSF蛋白的培养基上清加入到GCSF依赖型细胞系NFS-60后,试验组和阳性对照组中的NFS-60的荧光强度与阴性对照组和空白对照组相比显著升高(P0.05),结果显示羊GCSF能显著刺激NFS-60细胞的增殖,表明在羊成纤维细胞中表达的羊GCSF具有生物学活性。用HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,纯化得到羊GCSF蛋白。在羊成纤维细胞中添加30 ng·mL-1的羊GCSF后,体外培养24和48 h,GCSF试验组与培养基稀释液对照组相比,细胞活力变化差异不显著,而细胞周期的分布出现显著改变。24 h时,与对照组相比试验组的G1期细胞比例由(55.29±1.68)%增加到(69.37±0.24)%,差异极显著(P0.05);G2/M期细胞显著增多(P<0.01);S期细胞比例由(13.45±1.33)%增加为(37.87±2.43)%,差异极显著(P0.05)。表明加入GCSF的羊成纤维细胞在48 h时,处于间期的细胞显著减少,同时DNA复制状态的细胞显著增多。试验组凋亡率和对照组相比,培养24 h时对照组(Ctr)和试验组(GCSF)的凋亡率分别是(7.51±0.38)%和(9.16±0.46)%。48 h时对照组和试验组的凋亡率分别是(5.73±0.29)%和(5.39±0.27)%。72 h时对照组(Ctr)和试验组(GCSF)的凋亡率分别是(8.88±0.45)%和(5.41±0.27)%,24 h和72 h凋亡率差异极显著(P0.05),表明在GCSF添加的24 h内促进了细胞凋亡,随着时间的延长,细胞的凋亡受到抑制。【结论】羊成纤维细胞中可以瞬时过量表达羊GCSF,并具有生物学活性。GCSF不影响羊成纤维细胞的增殖,但可调控其周期,影响细胞凋亡。该结果为今后通过羊成纤维细胞介导GCSF培育具有高免疫力、高抗病性的羊进行分子遗传育种奠定了基础。

[目的]研究添加高胆碱日粮对宫内发育迟缓(IUGR)猪肌肉糖酵解的作用。[方法]从正常分娩的12头母猪中选择正常初生体质量(normal birth weight,NBW)和IUGR新生仔猪各12头,所有仔猪于23日龄断奶。试验采用2×2因子设计,NBW仔猪和IUGR仔猪各分别饲喂基础日粮(正常胆碱水平,NC)与添加胆碱的试验日粮(高胆碱水平,HC),即NBW+NC、NBW+HC、IUGR+NC与IUGR+HC共4组,每组6头猪,饲养至200日龄结束,称体质量后随机选择4头屠宰。[结果]IUGR猪肌糖原含量显著低于正常初生体质量仔猪,其乳酸含量及糖酵解潜值显著升高(P<0.05),乳酸脱氢酶活...