- 年份
- 2024(7515)
- 2023(10972)
- 2022(9795)
- 2021(9365)
- 2020(7848)
- 2019(18418)
- 2018(18503)
- 2017(35411)
- 2016(19683)
- 2015(22301)
- 2014(22243)
- 2013(21921)
- 2012(20293)
- 2011(18183)
- 2010(18220)
- 2009(16524)
- 2008(16249)
- 2007(14131)
- 2006(12284)
- 2005(10695)
- 学科
- 济(75080)
- 经济(74992)
- 管理(55406)
- 业(50551)
- 企(42708)
- 企业(42708)
- 方法(38413)
- 数学(33105)
- 数学方法(32536)
- 学(20888)
- 农(18707)
- 财(18045)
- 中国(17728)
- 业经(16194)
- 地方(14126)
- 理论(14096)
- 和(12787)
- 环境(12764)
- 农业(12636)
- 贸(12486)
- 贸易(12481)
- 制(12368)
- 易(12076)
- 务(11875)
- 财务(11804)
- 技术(11781)
- 财务管理(11779)
- 企业财务(11070)
- 划(11017)
- 融(10534)
- 机构
- 大学(284313)
- 学院(280447)
- 管理(109807)
- 济(100705)
- 经济(98230)
- 理学(95726)
- 理学院(94577)
- 研究(94024)
- 管理学(92430)
- 管理学院(91949)
- 中国(67859)
- 科学(64267)
- 京(61601)
- 农(49808)
- 所(49253)
- 业大(46417)
- 财(45893)
- 研究所(45451)
- 中心(42010)
- 江(40503)
- 农业(39657)
- 北京(38644)
- 范(37914)
- 财经(37668)
- 师范(37447)
- 院(34791)
- 经(34108)
- 州(33209)
- 技术(31500)
- 师范大学(30340)
- 基金
- 项目(198706)
- 科学(154254)
- 基金(143143)
- 研究(139926)
- 家(126783)
- 国家(125776)
- 科学基金(106727)
- 社会(84307)
- 社会科(79764)
- 社会科学(79740)
- 省(78241)
- 基金项目(76179)
- 自然(73094)
- 自然科(71389)
- 自然科学(71372)
- 自然科学基金(70046)
- 划(66729)
- 教育(64343)
- 资助(60676)
- 编号(56588)
- 成果(46174)
- 重点(44468)
- 部(42792)
- 发(41054)
- 创(40503)
- 课题(39396)
- 科研(38984)
- 计划(38271)
- 创新(37831)
- 大学(36532)
- 期刊
- 济(106657)
- 经济(106657)
- 研究(77391)
- 学报(52711)
- 中国(49938)
- 科学(46060)
- 农(44117)
- 管理(39196)
- 大学(38414)
- 学学(36120)
- 财(33470)
- 教育(31536)
- 农业(31247)
- 技术(24506)
- 融(19563)
- 金融(19563)
- 图书(17420)
- 财经(17402)
- 业经(17074)
- 经济研究(16135)
- 业(15504)
- 经(14603)
- 科技(14526)
- 版(14465)
- 理论(14400)
- 业大(14168)
- 问题(13717)
- 实践(13547)
- 践(13547)
- 技术经济(13521)
共检索到396904条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 水产学报
[作者]
李新苍 周俊芳 房文红 董建波 朱磊 王元
为优化当前白斑综合征病毒(WSSV)定量检测方法,实验结合当前WSSV诊断与定量方法应用的实际,试图通过设计两对普通PCR引物来建立一种实用的WSSV绝对定量方法,并利用此方法进一步探明WSSV在脊尾白虾体内的增殖规律及致病性。首先根据WSSV的囊膜蛋白VP28基因序列设计了两对特异引物(F1,R1)和(RF2,RR2),分别用于标准品质粒的构建和扩增子的扩增,以开展SYBR Green染料法定量检测WSSV的研究;随后利用该定量检测方法分析了WSSV在脊尾白虾体内的组织分布及感染规律。研究结果显示:(1)以定量引物RF2和RR2建立的SYBR Green绝对定量检测方法具有敏感度高、特异性强...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱斐 吕梦园 许梓荣
采用投喂感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)对虾肌肉的方式,对养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii)进行人工感染,以确定WSSV对养殖克氏原螯虾的易感性。结果发现,投喂病虾感染组螯虾的死亡率达到90%,而对照组未出现死亡。采用PCR对试验组螯虾的肌肉进行WSSV检测,发现投喂感染组的阳性检出率为100%,对照组的阳性检出率均为0。PCR检测结果发现,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏六种组织的PCR结果均为WSSV阳性,而对照组的各组织检测结果均为阴性。组织切片的光镜观察也证实,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈俊杰 李媛媛 阳瑞雪 古晶晶 汪开毓 耿毅 欧阳萍
为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的
[期刊] 中国水产科学
[作者]
战文斌 邢婧 王远红 铃木信一 福田颖穗
对虾WSSV病是亚洲对虾养殖业中的一个棘手问题。本研究采用Kimura引物 ,用PCR技术对不同生长期的中国对虾 (Penaeuschinensis)进行了WSSV的检测 ,同时也检测了对虾发病时养殖池中多见的野生厚蟹 (Helicesp .)和矛尾刺虎鱼 (Acanthogobiushasta)。检测结果表明 :分别在检测的 5尾亲虾中的 1尾 ,6尾仔虾中的 1尾 ,5尾稚虾中的 3尾及所检测的 5尾病虾和 2只厚蟹中获得到 982bp的PCR扩增产物 ,说明为WSSV感染阳性。在检测的 2尾矛尾刺虎鱼中均未获得PCR扩增产物 ,说明为WSSV感染阴性。在亲虾、虾苗以及虾池内的野生厚蟹...
关键词：
对虾 白斑症病毒 聚合酶链反应
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
屈小玲 毕丁仁
用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ，ＭＧ）种内菌株的特异性ＤＮＡ片段，并用该法对人工感染鸡及野外鸡群进行了ＭＧ感染的分子流行病学调查。结果表明，通过基因扩增及电泳，仅ＭＧ出现特异性扩增条带，最低能检出１８ｐｇＭＧＤＮＡ，说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染６０只鸡，３ｄ后即可用ＰＣＲ查出ＭＧ阳性，６ｄ后１００％为阳性，对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。ＰＣＲ对野外鸡群的ＭＧ检出率为１０．５％～３５％，平均为２０％（１６／７９），与血清学检查结果基本一致；从ＰＣＲ阳性鸡中，有６１．５％（６／１３）能分离到ＭＧ。这说明ＰＣＲ在ＭＧ感染的分...
关键词：
鸡毒霉形体 多聚酶链反应 基因扩增
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赵玉然 谭乐义 刘荭 赵巍 梁成珠 史秀杰 徐彪 朱来华 何俊强 岳志芹
以真鲷虹彩病毒(Red-sea breamiridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Pri mer Express3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.1841gX+40.270,相关系数R2=0.9969。熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃。该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
姜海军 陈琼 孔繁德 李国平 黄印尧 徐淑菲
参照GenBank收录的猪圆环病毒2型(PCV2)基因组全序列选择保守区域设计合成了引物及其探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqM an荧光定量PCR检测方法.用建立的检测方法对临床采集的组织病料进行了检测,并与常规PCR检测方法作比较.结果显示,所建立的方法灵敏度可达3×101拷贝.μL-1,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)没有交叉反应,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于PCV2的流行病学调查和临床诊断.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹伟伟 郭抗抗 许信刚 宁蓬勃 刘伟 程敏 董玲娟 徐磊 高婉俊 任敏
【目的】建立一种能在临床上快速、准确检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)的TaqMan实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中已公布的PCV-2陕西分离株的全基因序列,在PCV-2的ORF2核苷酸序列的保守区域,设计合成1条TaqMan探针和1对特异性引物;利用设计的引物扩增ORF2部分基因并鉴定后,回收PCR扩增产物,连接pMD19-T载体,转化DH5α大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定后提取质粒,作为荧光定量PCR的标准品;以标准品为模板建立检测PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价;用建立的荧光定量...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
童桂香 黎小正 卢小花 廖永志 江林源 韦信贤
罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)是世界动物卫生组织规定必需上报的罗氏沼虾白尾病(whitetail disease,WTD)的主要病原体。为建立快速检测MrNV的套式RT-PCR方法,根据GenBank上发表的MrNV衣壳蛋白基因序列设计2对特异性引物,对PCR条件进行优化后通过特异性试验和敏感性试验检测其特异性和敏感性。结果表明:该方法能特异性地扩增出205 bp的MrNV衣壳蛋白基因片段,最佳引物浓度为0.8μmol/L、退火温度为56℃、Mg2+浓度为2.0 mmol/L,而对其他对虾病毒基因组均没有扩增出条带;检测Mr...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱娜 陈国强 张敬友 范红结
根据GenBank发表的猴痘病毒(AF380138)F3L基因全序列,设计并合成了引物和TaqMan、MGB探针,建立了F3L基因的荧光定量PCR检测方法。应用该方法可从人工合成的猴痘病毒F3L基因片段(48 048～48 509 bp)扩增典型的"S"型曲线,25μL反应体系检测灵敏度可达6.8拷贝,但不能从鸡痘、山羊痘等病毒中扩增出相应的扩增曲线。结论:本方法可快速、敏感、特异地检测猴痘病毒。
关键词：
猴痘病毒 荧光定量PCR 检测
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
万春和 陈翠腾 傅秋玲 程龙飞 傅光华 陈红梅 施少华 黄瑜
【目的】建立禽坦布苏病毒（ＡｖｉＡｎ Ｔｅｍｂｕｓｕ ｖｉｒｕｓ，ＡＴｍｖ）ＴＡｑｍＡｎ实时荧光定量ＰＣｒ检测方法。【方法】根据ＡＴｍｖ非结构蛋白ｎｓ１的基因特征，设计特异性的引物和探针，建立基于ＴＡｑｍＡｎ探针检测ＡＴｍｖ的实时荧光定量ＰＣｒ检测方法，对其特异性、重复性进行检测。用建立的ＴＡｑｍＡｎ实时荧光定量ＰＣｒ检测方法和之前建立的ｒＴ－ＰＣｒ方法同时对临床１５份疑似ＡＴｍｖ感染的病料进行检测，计算其符合率。【结果】成功建立了检测ＡＴｍｖ的实时荧光定量ＰＣｒ检测方法，当ｎｓ１基因含量为（２．６７×１０２）～（２．６７×１０７）拷贝／μＬ时有良好的线性扩增，其扩增相关系数为０．９９８，扩增．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
李鹏 郭军庆 金前跃 李青梅 李清州 万博 王选年 王川庆 张改平
根据PCV2 ORF1设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠReal-time PCR检测方法。该方法灵敏度可达10~100拷贝/μL,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)以及猪细小病毒(PPV)没有交叉反应,利用该方法从50份临床病料中检测出43份阳性PCV2病毒,阳性检出率为94%。与常规PCR比较结果显示,该方法具有较高的灵敏度和特异性,能够快速检测和监控PCV2的感染流行。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘飞 张宝存 张晓华 黄倢
本研究针对养殖对虾6种病毒,包括白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、肝胰腺细小病毒(HPV)、桃拉综合征病毒(TSV)、对虾杆状病毒(BP)和传染性肌肉坏死病毒(IMNV),选择各自的基因分别设计特异性引物和探针,首先进行了单一病毒的PCR验证,在此基础上建立了同时特异性检测6种对虾病毒的多重PCR检测体系。对反应条件进行优化并进行特异性和灵敏度的验证。50μl反应体系,Mg2+的最佳浓度为5mmol/L,ExTaq酶最佳用量为3.75U,反应程序中最佳退火温度为55.5℃。6种病毒之间以及与对虾基因组都存在很好的特异性。最终经试验验证,该系统的检测灵敏度对...
[期刊] 水产学报
[作者]
许跃 钱冬 周素明 王亚军 尹飞 金珊 詹萍萍
2018年7月宁波象山某养殖场内银鲳出现集中死亡现象，累积死亡率高达80%以上，为探究此次疾病爆发的原因，本研究通过对患病银鲳进行组织病理学分析、透射电镜观察及病原的分子生物学检测及分析对其病原进行鉴定以便制定合理的防控措施。患病银鲳临床表现为厌食、身体失衡、脾脏肿大、肝脏颜色异常的病征。组织病理学观察发现患病鱼肝脏、脾脏、肾脏均出现直径10～15μm、细胞质嗜碱性的肿大细胞。进一步的透射电镜观察则在脾肾等组织细胞内发现了病毒包涵体结构以及大量的病毒粒子，直径为140～160 nm。通过虹彩病毒特异性PCR检测发现患病组织样品为虹彩病毒阳性。此外，通过病毒主要衣壳蛋白（MCP）基因序列分析，发现银鲳源病毒与大黄鱼虹彩病毒（Genbank 登录号：AY779031.1）MCP同源性最高为99.76%，认为它们属于虹彩病毒科、肿大细胞病毒属、真鲷虹彩病毒（red sea bream iridovirus, RSIV）类群。本实验首次报道了全人工养殖环境下银鲳感染虹彩病毒的病例，该研究将为养殖银鲳虹彩病毒病的诊断和防治提供了重要的参考依据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
董玲娟 张彦明 何雷 程敏 刘伟 林鸷
【目的】建立一种能检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)含量的荧光定量RT-PCR方法,为猪传染性胃肠炎(TGE)的诊断和防治提供技术支持。【方法】根据TGEV TH98株的N基因序列设计1对特异性引物,扩增出目的片段,连接克隆载体后构建质粒标准品;对荧光定量的循环条件进行优化,建立猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法,对其重复性、特异性进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较,最后应用该方法对采自陕西杨凌周边的30份临床样品进行检测。【结果】成功构建了质粒标准品,建立了检测猪传染性胃肠炎病毒的荧光定量RT-PCR方法,该方法特异性高、重复性好、敏感性比普通PCR检测方法高2个数量级,对...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
