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[期刊] 渔业科学进展  [作者] 张金勇  史宝  柳学周  徐永江  
[期刊] 中国水产科学  [作者] 张金勇  柳学周  史宝  徐永江  李晓妮  常亚青  王滨  
运用同源克隆和RACE方法获得了半滑舌鳎(Cynoglossus sEmilAEvis)孕酮受体膜组分1(PgRmC1)的C DnA全长序列,生物信息学分析显示,半滑舌鳎PgRmC1 C DnA序列全长1335 bP,开放阅读框长546 bP;其编码的蛋白是单次跨膜蛋白,在n端13~35位氨基酸残基处有一个跨膜区域。半滑舌鳎PgRmC1氨基酸序列与青鳉(oRyziAs lAtiPEs)相似性最高,达到了82.9%;与青斑河鲀(tEtRAoDon nigRoviRiDis)相似度为81.2%。系统进化分析表明,半滑舌鳎PgRmC1与鳉形目和鲀形目鱼类PgRmC1聚为一个分支。采用实时荧光定量Rt...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 张金勇  柳学周  史宝  徐永江  
采用qRT-PCR方法分析性成熟半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)不同发育时期卵巢卵母细胞的孕酮受体膜组分1(PGRMC1)mRNA的表达,研究发现,在发育Ⅳ期的卵巢,处于第Ⅳ时相的卵母细胞PGRMC1 mRNA表达量最高(P<0.05),表明PGRMC1主要在卵母细胞成熟阶段发挥作用。PGRMC1对HCG调控作用的正向应答效应预示其参与了卵母细胞成熟调控,为进一步探讨PGRMC1在半滑舌鳎繁殖过程的功能提供重要基础资料。
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 史宝  柳学周  徐涛  李晓妮  徐永江  张金勇  
为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)人工育苗技术的水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like,mPRL)基因的表达特征和作用机制进行了研究。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现半滑舌鳎mPRL mRNA相对表达量的最高值出现在性成熟阶段卵巢的Ⅴ时相卵母细胞。原位杂交分析mPRL mRNA在繁殖相关组织的细胞学定位,发现mPRL mRNA分布在半滑舌鳎性成熟阶段卵巢的卵母细胞膜上;在脑的神经元和垂体内分散的细胞中,mPRL mR
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 李晓妮  柳学周  史宝  徐永江  张金勇  
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 王天姿  王娜  胡乔木  邵长伟  陈松林  
CSW3基因序列来源于半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组测序项目,是经过筛选得到的雌性特异候选基因之一。本研究探索了半滑舌鳎雌性相关基因CSW3的表达与应用,构建了半滑舌鳎雌性特异CSW3基因重组表达载体,通过大肠杆菌进行了体外重组表达,对基因表达产物进行分离纯化,并通过蛋白转染的方法研究了纯化的蛋白对几个性别相关基因的影响。结果显示,雌性特异CSW3重组蛋白注射鱼体后对半滑舌鳎性腺foxl2、sox9a、amh这3种性别相关基因的表达水平具有显著影响,能够引起雌性相关基因foxl2表达上调、雄性相关基因sox9a和amh表达下降。从蛋白水平对雌性相关基因CSW3...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 王天姿  王娜  胡乔木  邵长伟  陈松林  
CSW3基因序列来源于半滑舌鳎(CynogloSSuS SemilaeviS)全基因组测序项目,是经过筛选得到的雌性特异候选基因之一。本研究探索了半滑舌鳎雌性相关基因CSW3的表达与应用,构建了半滑舌鳎雌性特异CSW3基因重组表达载体,通过大肠杆菌进行了体外重组表达,对基因表达产物进行分离纯化,并通过蛋白转染的方法研究了纯化的蛋白对几个性别相关基因的影响。结果显示,雌性特异CSW3重组蛋白注射鱼体后对半滑舌鳎性腺foxl2、Sox9a、amh这3种性别相关基因的表达水平具有显著影响,能够引起雌性相关基因foxl2表达上调、雄性相关基因Sox9a和amh表达下降。从蛋白水平对雌性相关基因CSW3...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 史宝  李晓晓  柳学周  徐永江  王珊珊  刘芝亮  王妍妍  
采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1319bp的半滑舌鳎膜孕激素受体(mPRα)的cDNA序列;将推断的氨基酸序列与其他物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析,发现存在7个跨膜区域。使用MEGA4.0临位相联法和ClustalX方法对mPRα的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为94%、93%和90%;而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达,结果表明,...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 王滨  柳学周  刘权  赵明  徐永江  史宝  
为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长c DNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untransl
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 史宝  柳学周  徐涛  李晓妮  徐永江  张金勇  
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 于孟君  孙璐明  陈亚东  陈学杰  杨光  刘洋  仇雪梅  沙珍霞  
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AP-1家族转录因子c-Jun基因(Jun proto-oncogene)及其在免疫应答中的作用尚无报道。本研究根据半滑舌鳎转录组数据库中预测的c-Jun序列,通过RACE技术和PCR扩增方法获得了半滑舌鳎c-Jun基因c DNA全长2093 bp,CDS区域共981 bp,编码326个氨基酸,5'UTR区域377 bp,3'UTR区域735 bp。SMART分析显示,C-JUN蛋白具有2个结构域:AP-1家族典型结构域Jun,以及高度保守的亮氨酸拉
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 高进  马佳璐  刘洋  邵长伟  贾晓东  陈松林  
Sox(SRY-Related HMG-box)基因家族是在动物体内发现的一类编码转录因子的基因家族,广泛参与了动物生长发育、理化反应,特别是性别决定和分化等过程。本研究采用生物信息学方法,利用Sox基因高度保守的HMG-box区序列作为种子序列,检索半滑舌鳎(CYnoGloSSuS SeMilaeviS)基因组注释的蛋白数据库,共鉴定分离出23个Sox基因。并在全基因组水平对半滑舌鳎Sox基因家族进行了保守结构域序列、进化、基因结构、染色体定位及基因表达模式的系统分析。结果显示,通过保守结构域分析发现了半滑舌鳎Sox基因家族除CSe Sox32外,皆存在一段9个氨基酸残基(RPMnaFMvW...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 邢贺飞  高峰涛  张永珍  董忠典  陈松林  
天然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistaNce-associated macrophage proteiN,Nramp)属于膜整合转运蛋白,具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎(cyNoglossus semilaevis)Nramp基因进行了克隆和表达分析,并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性(siNgle Nucleotide polymorphism,sNp)位点进行了筛选。该基因c dNa序列全长3717 bp,其中开放阅读框(opeN readiNg frame,orf)1677 bp,所编码蛋白含有558个氨基酸,该蛋白具有Nr...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 史学营  柳学周  石莹  徐永江  史宝  王滨  李斌  
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 王凯琳  胡乔木  陈松林  
通过对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)进行全基因组及转录组测序,预测了一个半滑舌鳎性别相关基因CsFR2,目前已对该基因进行了克隆和表达分析。为进一步研究CsFR2基因的功能,本研究从蛋白层面入手,构建了原核表达载体p eT-32a-CsFR2,转化到大肠杆菌e.Coli进行诱导表达,用His TRap进行蛋白纯化,sDs-page电泳检测诱导及纯化产物,并将表达纯化的CsFR2蛋白注射1龄半滑舌鳎精巢。由于CsFR2是一个性别相关基因,因此无法通过免疫反应来直接检测其蛋白活性,本研究通过不同时间点取样检测半滑舌鳎其他性别相关基因Cyp19a和Foxl2的表达量变化,来...
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