【目的】探究姜黄素（Cur）对玉米赤霉烯酮（ZEA）诱导猪肾上皮细胞（PK-15）氧化损伤的保护作用，并基于SIRT1/FOXO1信号通路阐明其作用机制，为姜黄素的兽医临床应用提供依据。【方法】试验分为5组：对照组、ZEA组（36.55μg·mL~(-1) ZEA）、Cur 6.25组（36.55μg·mL~(-1) ZEA+6.25μmol·L~(-1) Cur）、Cur 12.5组（36.55μg·mL~(-1) ZEA+12.5μmol·L~(-1) Cur）、Cur 25组（36.55μg·mL~(-1) ZEA+25μmol·L~(-1) Cur）；通过MTT法测定ZEA的半数抑制浓度和Cur对PK-15细胞的最大安全浓度；使用倒置显微镜观察PK-15细胞的形态变化；采用试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）以及丙二醛（MDA）的水平；qRT-PCR检测细胞SIRT1、FOXO1、CAT、Mn-SOD的mRNA水平；Western Blot检测SIRT1、FOXO1和Acetyl-FOXO1蛋白的表达量。【结果】ZEA的IC_(50)为36.55μg·mL~(-1),Cur的最大安全浓度为25μmol·L~(-1)；与对照组相比，ZEA极显著降低PK-15细胞活力（P<0.01），极显著提高ROS和MDA水平（P<0.01），极显著降低SOD、CAT活性（P<0.01）；与ZEA组对比，不同浓度的Cur(6.25、12.5、25μmol·L~(-1)）显著提高PK-15细胞的存活率（P<0.05），改善细胞形态；极显著（P<0.01）降低ZEA诱导的ROS和MDA水平；极显著升高细胞内SOD和CAT活性（P<0.01）。与ZEA组对比，各Cur组不同程度的升高SIRT1和CAT的mRNA表达量，极显著的降低FOXO1的mRNA表达量（P<0.01）；极显著升高Mn-SOD的mRNA表达量（P<0.05），极显著升高Acetyl-FOXO1蛋白表达（P<0.01）；与ZEA组对比，各Cur组均极显著升高SIRT1蛋白表达（P<0.01），极显著降低Acetyl-FOXO1蛋白表达（P<0.01）。【结论】Cur可以上调SIRT1的表达，降低FOXO1的乙酰化水平，诱导抗氧化酶Mn-SOD和CAT的表达，从而清除ROS，降低MDA水平，减轻ZEA对PK-15细胞的氧化损伤作用。

[目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell, MDCK)为模型，研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene, LYC)对细胞损伤的缓解效应。[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol·L~(-1) OTA)、LYC组(55μmol·L~(-1) LYC)、O+L组(15μmol·L~(-1) OTA+55μmol·L~(-1) LYC),处理36 h,研究OTA对MDCK细胞结构、细胞凋亡、肾功能相关指标、氧化与抗氧化、炎性因子等指标的影响，并探讨LYC在OTA致MDCK损伤中的缓解作用。[结果]OTA作用导致细胞发生明显皱缩，细胞数量骤减；电镜结果显示OTA能够导致细胞膜破裂、细胞器出现不同程度损伤，MDCK中乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)水平与丙二醛(MDA)含量极显著增加(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01);细胞中肾功能相关指标N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾损伤分子1(KIM-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)均极显著升高(P<0.01);同时极显著增加了MDCK的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素6(IL-6)、干扰素18(IL-18)及干扰素1β(IL-1β)的水平(P<0.01);OTA可诱导MDCK凋亡率极显著升高(P<0.01);而LYC能够有效减缓OTA造成的损伤，LYC组与OTA处理组相比形态较饱满，细胞间衔接紧密，细胞凋亡率显著下降；LDH、ROS、MDA水平(含量)降低，SOD、CAT、GSH-Px活性升高，并降低炎性细胞因子的表达。[结论]OTA能够抑制MDCK活性，改变细胞形态，导致肾功能指标、氧化与抗氧化功能与细胞炎性因子异常，加快细胞凋亡；LYC能够显著缓解OTA对MDCK的损伤。

[目的]探究磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路在玉米赤霉烯酮(ZEA)诱导睾丸支持细胞(SC)自噬及影响SC细胞周期分布中的作用,揭示ZEA对雄性生殖毒性的机制。[方法]以Wistar大鼠原代睾丸支持细胞为材料,利用Western blot、流式细胞术和免疫荧光技术等方法检测PI3K/Akt/m TOR信号通路在ZEA对SC自噬及细胞周期分布的影响。[结果]随着ZEA浓度升高,PI3K/Akt/m TOR信号通路关键蛋白磷酸化水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01);加入PI3K抑制剂LY294002后,微管相关蛋白1轻链3(LC3)的荧光信号强度显著增强,荧光聚点更加明显(P<0.05或P<0.05或P<0.05),且细胞周期关键激酶Cdc2的活性显著增加(P

[目的]本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡、氧化损伤及相关基因、蛋白表达的影响。[方法]体外培养奶牛乳腺上皮细胞并用H_2O_2(600μmol·L~(-1),2 h)诱导建立乳腺上皮细胞氧化应激模型;试验分组:空白对照组、H_2O_2组、H_2O_2+APS组(8 mg·mL~(-1)APS)。[结果]与空白对照组相比,H_2O_2组细胞活力显著下降(P<0.05);与H_2O_2组相比,H_2O_2+APS组的细胞凋亡率和细胞中的活性氧(ROS)含量均显著降低(P<0.05),而超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.01),Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且APS降低了H_2O_2诱导细胞凋亡率。[结论]APS能够提高H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化酶活性,并减缓氧化损伤引起的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。

为探究连翘酯苷A（FA）对玉米赤霉烯酮（ZEA）诱导的猪肾上皮细胞（PK-15）凋亡的影响及其可能的保护机制，体外培养PK-15细胞，经36.55 μg·mL~(-1 )ZEA和不同浓度（31.25、62.5、125 μg·mL~(-1)）FA处理24 h，通过噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率；通过Hoechest 33342活细胞染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡情况；利用试剂盒检测细胞上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）活性和活性氧（ROS）水平；利用实时荧光定量PCR测定细胞中的Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的mRNA表达水平。结果表明：浓度在125 μg·mL~(-1)以下的FA可以提高PK-15细胞存活率；FA能显著提高经ZEA处理的PK-15细胞存活率，且能显著降低经ZEA处理的细胞上清液中的LDH活性，抑制ZEA引起的ROS的生成；ZEA能显著升高Bax、Caspase-8、Caspase-3和Caspase-9 mRNA的表达量，Bcl-2 mRNA的表达量显著降低；不同浓度的FA能不同程度地提高Bcl-2 mRNA的表达量，降低Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA的表达量。上述结果说明ZEA会诱导PK-15细胞发生凋亡，但FA可通过抑制内源性凋亡途径和氧化应激反应抑制细胞凋亡，从而起到保护作用。

旨在探索不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEN)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)生长和乳脂合成相关基因表达的影响。首先，用不同剂量ZEN处理MAC-T细胞36 h,血细胞计数板统计细胞数量，染色并分析细胞凋亡与坏死情况，筛选ZEN添加的合适剂量；接着，试剂盒检测ZEN对MAC-T细胞中活性氧(ROS)以及线粒体膜电位的影响；最后，利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术，分析ZEN对MAC-T细胞增殖、凋亡、氧化应激和乳脂合成相关基因表达的影响。结果表明，低剂量ZEN(0.01～1.00μmol/L)有促进MAC-T生长的趋势，而高剂量ZEN(5.00～10.00μmol/L)显著降低MAC-T细胞数量；0.10μmol/L ZEN对MAC-T中ROS和线粒体数量无明显影响，但10.00μmol/L ZEN显著增加了MAC-T中ROS水平，降低了线粒体数量；RT-qPCR结果表明，0.10μmol/L ZEN显著促进增殖基因(CDK1、CCND2)、抗氧化基因(DHODH、GPX4)和抗凋亡基因(BCL-2)表达，但同时提高了凋亡基因(CAS-3、BAX)表达量；10.00μmol/L ZEN显著抑制增殖基因(PCNA、CDK1、CCND2)、抗氧化基因(DHODH、GPX4、AIFM2)和抗凋亡基因(BCL-2)表达，但显著促进凋亡基因(CAS-3、BAX)表达；值得注意的是，0.10μmol/L ZEN显著促进了乳脂合成相关基因(PPARγ、FASN、JAK-2),但10.00μmol/L ZEN显著抑制了这些基因表达。上述结果提示，不同浓度ZEN对MAC-T细胞的作用存在差异：0.10μmol/L ZEN可以促进MAC-T细胞生长和乳脂合成相关基因表达的同时，也会诱导凋亡基因表达；10.00μmol/L ZEN会诱导MAC-T细胞氧化应激、降低线粒体数量，抑制增殖、抗氧化、抗凋亡和乳脂合成相关基因表达，同时促进凋亡基因表达，导致细胞死亡。

为探明茶黄素–3,3'–双没食子酸酯(TFDG)对人晶状体上皮细胞SRA01/04(Human lens epithelial cells,HLECs SRA01/04)的保护作用,采用MTT法建立高浓度葡萄糖(HG)诱导的HLECs损伤模型,同时观察HLECs细胞形态的变化。用不同浓度(4、8、16、64、32、64、128、256、512μmol/L)TFDG处理HLECs损伤细胞,采用化学比色法和硝酸还原法测定HLECs内一氧化氮(NO)的含量和一氧化氮合酶(NOS)的活性。结果表明:高浓度葡萄糖可以抑制人晶状体上皮细胞生长,用于HLECs损伤模型诱导的最佳葡萄糖浓度为50 mmol/L...

用过氧化氢(H2O2)建立体外奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激损伤模型,研究不同质量浓度茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分光光度法检测天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果显示:与H2O2损伤模型组相比,20～100μg.mL-1茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH与Caspase-3相对活性与细胞凋亡率均下降,其中以100μg.mL-1茶多酚处理组效果最显著,说明一定质...

为研究油菜蜂花粉总黄酮(rape bee pollen flavonoids,RBPF)抗心血管疾病的作用机制,以RBPF为研究对象,利用人工建立的血管内皮细胞氧化损伤模型,对RBPF的抗氧化活性进行初步研究,在体外水平探索RBPF对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。采用超声醇提及大孔树脂纯化的方法提取富集RBPF,同时采用过氧化氢叔丁醇(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导细胞氧化损伤,建立人脐静脉内皮融合细胞系EA.hy926的氧化损伤模型,并利用此模型研究RBPF在细胞水平

为了研究陈化对于广陈皮抗氧化活性的影响，以新鲜干燥果皮、贮藏1 a和10 a广陈皮（Pericarpium Citri Reticulatae‘Chachi’,PCR-C）为研究对象，提取纯化得到广陈皮黄酮类化合物提取物（PCR-CF），以叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导HepG2细胞作为氧化应激损伤模型，评价陈皮的抗氧化活性，同时利用qRT-PCR和Western blot技术进一步探究其抗氧化活性作用分子机制。结果显示，广陈皮陈化过程中，橙皮苷含量呈现波动，但总体上是下降趋势；而多甲氧基黄酮及其总含量呈增加趋势，其中PCR-C10F中含量最高，PMFs总含量达到（98.66±0.56）mg/g。而且，不同贮藏年份PCR-CF可明显提高SOD、GSH水平和降低MDA含量，且不同年份间差异显著，PCR-C10F抗氧化活性最强，SOD、GSH、MDA水平分别达到（139.38±17.38）U/mg和（117.81±3.22）μmol/g、（0.39±0.03）nmol/mg。相关性分析表明，川陈皮素的积累是PCR-C10F维持氧化还原平衡的主要活性成分。此外，PCR-C10F显著上调Nrf2 mRNA以及其在胞核蛋白中的表达；从而激活抗氧化酶的mRNA和蛋白表达水平，HO-1的mRNA表达水平和蛋白表达水平显著降低。研究表明，陈皮在陈化过程中，多甲氧基黄酮含量呈现增加趋势，抗氧化活性不断增强，PCR-C10F能够通过调控Nrf2-ARE抗氧化信号通路起到氧化应激抵御保护作用。

α－萜品烯（α－ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ）和对伞花素（１－ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ－４－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ）是土荆芥挥发油的主要成分。采用培养瓶滤纸法，探讨了α－萜品烯和对伞花素在土荆芥挥发油诱导氧化损伤中的作用。结果表明：α－萜品烯、对伞花素、α－萜品烯＋对伞花素和土荆芥挥发油均抑制了蚕豆根尖生长（ｐ＜０．０５），挥发油抑制效应最强；各处理组对蚕豆根尖抗氧化酶系统均有一定的影响。随着处理剂量增加，ｓｏＤ活性升高（ｐ＜０．０５），ｐｏＤ和ＣＡｔ活性则降低（ｐ＜０．０５），挥发油处理组对酶活性的影响大于其他３个处理组。ｒｏｓ含量在各处理组均显著增高（ｐ＜０．０５），其中挥发油处理组ｒｏｓ含量明显高于．．．

本试验旨在研究饲料中姜黄素对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼生长性能的影响和对四氯化碳(CCl_4)诱导鱼体急性肝损伤的保护作用,为筛选治疗鱼类肝脏综合征的绿色药物提供理论依据。在基础饲料中分别添加不同水平(0、15 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg和240 mg/kg)的姜黄素,连续饲喂鱼体8周后进行采样,探讨姜黄素对尼罗罗非鱼生长的影响,并采用CCl_4诱导鱼体急性肝损伤,72 h后采集血液和肝组织,检测相关抗氧化指标以及肝组织切片的变化。结果显示,饲料中添加60 mg/kg和120 mg/kg姜黄素可显著增加鱼体的增重率和特定生长率(P<0.05),而血浆总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷胱甘肽(GSH)、血浆总抗氧化能力(T-AOC)、肝超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力却显著高于对照组(P

【背景】奶牛乳腺炎是奶牛中危害最严重的疾病之一，严重影响乳品质，不仅造成经济损失，甚至危及人类健康。已有研究表明，lncRNAs广泛参与人和动物的炎症和免疫调节。lncRNA RRAS2-AS1是我们在前期研究中新发现的差异表达lncRNA，其表达模式和功能尚不清楚。【目的】通过探究lncRNA RRAS2-AS1在奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells, bMECs）炎症反应中的作用机制，为奶牛乳腺炎的分子调控机制解析和抗乳腺炎分子选育提供理论依据。【方法】利用RT-PCR和RACE等技术进行了lncRNA RRAS2-AS1的克隆，并通过生物信息学方法进行lncRNA RRAS2-AS1的靶基因预测及功能富集分析；利用细胞免疫荧光技术鉴定bMECs，利用细胞核质分离及半定量PCR技术检测了lncRNA RRAS2-AS1的亚细胞定位情况；采用qRT-PCR检测了lncRNA RRAS2-AS1在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导bMECs炎症反应和乳腺炎奶牛乳腺组织中的表达模式；利用LPS诱导bMECs构建了炎症细胞模型，在此基础上，通过lncRNA超表达、qRT-PCR和ELISA等技术研究了lncRNA RRAS2-AS1对炎性bMECs内的促炎细胞因子基因、增殖相关基因和凋亡相关基因在mRNA和（或）蛋白质水平表达的影响，同时采用EdU、CCK-8和流式细胞术进一步验证了lncRNA RRAS2-AS1对bMECs增殖、活力和凋亡的影响。【结果】lncRNA RRAS2-AS1基因的长度为363 bp，主要定位于细胞质中。表达量检测结果表明，与对照组相比，lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导炎症的bMECs和乳腺炎组织中的表达量显著下调（P<0.05）;lncRNA RRAS2-AS1超表达试验结果表明，与对照组相比，lncRNA RRAS2-AS1超表达组的炎症信号通路关键基因（TLR4和NF-κB1）、促炎细胞因子基因（IL-1β、IL-6和IL-8）、促凋亡基因（BAD、CASP3和BAX等）的表达量显著下调（P<0.01），而增殖标志基因（CDK2、CDK4和PCNA）的表达量显著上调（P<0.05）。此外，lncRNA RRAS2-AS1超表达组的细胞活力显著增加（P<0.05），而bMECs的凋亡率极显著降低（P<0.01）。【结论】lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导bMECs的炎症反应和乳腺炎奶牛的乳腺组织中均显著下调；超表达lncRNA RRAS2-AS1可下调促炎细胞因子IL-6、IL-8和IL-1β在mRNA和蛋白质水平的表达，并促进细胞活力和增殖、抑制细胞凋亡，从而减轻LPS诱导的bMECs炎症反应，该结果可为解析奶牛乳腺炎的分子调控网络奠定了基础。

以玉米为材料,运用促分裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MAPKK)抑制剂,研究了MAPK(mitogen-activated protein kinase)在水分胁迫下玉米叶片细胞抗氧化损伤中的作用。结果显示,水分胁迫引起玉米叶片膜脂过氧化和蛋白质氧化程度加重,质膜相对透性增加,并且其诱导的羰基化蛋白质主要分布在相对分子质量为37×103~94×103之间。利用MAPKK抑制剂PD98059(100、200μmol.L-1)和U0126(10、25μmol.L-1)预处理加重了上述水分胁迫下玉米叶片细胞的氧化损伤。上述结果表...