利用脲酶选择性培养基,从奶牛瘤胃微生物BAC文库的15 360个克隆中筛选得到了12个脲酶克隆。利用酚-次氯酸法对脲酶克隆子的酶学性质分析,表明均具有不同的尿素分解能力,酶的活力范围是30~2 466 U/mg。脲酶阳性克隆插入片段大约是60 kb,限制性内切酶HindⅢ酶切图谱表明,各个克隆具有不同DNA片段,其中脲酶Urease 1、Urease 3、Urease 4和Urease 9的最适pH8.0,最适温度为60℃。本研究从奶牛瘤胃微生物BAC文库中筛选到了具有脲酶酶活特性的克隆。

【目的】从奶牛瘤胃微生物BAC文库中筛选含乙酰CoA羧化酶(ACCase)基因的克隆子,并对其全长测序和生物信息学分析。【方法】利用PCR序列驱动筛选法,从瘤胃微生物BAC文库中筛选ACCase基因,鸟枪法测定基因序列后,进行基因注释、比对和系统发育分析。【结果】筛选得到了含ACCase基因的克隆(U12),其插入片段序列(URE12)全长43 358 bp,GC含量为43.75%,经GeneMark程序预测含有38个基因,经Signature程序预测属于变形菌门。ACCase基因(Acc-32)编码159个氨基酸,与Elusimicrobium minutum的ACCase基因具有41%的相...

【目的】研究奶牛瘤胃内参与蛋白质降解过程中二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidasesⅣ,DPP-Ⅳ)的序列特征和酶学性质。【方法】从奶牛瘤胃微生物Fosmid文库中挑选17 664个克隆,利用dpp-Ⅳ简并引物筛选含dpp-Ⅳ的阳性克隆。提取阳性克隆的质粒,用限制性内切酶HindⅢ进行酶切。PCR扩增含dpp-Ⅳ目的片段,并克隆测序。对阳性克隆的Fosmid末端进行测序。提取阳性克隆粗酶液,利用底物Gly-Pro-pNA检测肽酶活性。【结果】筛选后获得10个含有dpp-Ⅳ的阳性克隆(命名为DP1—DP10)。Fosmid末端序列经BLASTX比对后发现78%的序列可以与数据库的已...

选取3头5岁左右的健康雌性德昌水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S rRNA基因克隆文库,分析德昌水牛瘤胃产甲烷菌区系组成。结果表明:试验共获得99个16S rRNA基因序列,RDP分析表明94.2%的序列为甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)16S rRNA序列,按照97%的相似性划分为19个分类操作单元,其中96个序列(17个OTUs)占总序列的97.0%,与已知细菌的16S rRNA序列的相似性≥97%;3个序列(2个OTUs)占总序列的3.0%,与已知细菌16S r...

【目的】利用Fosmid文库功能筛选法,获得山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因并进行原核表达。【方法】利用功能底物筛选法从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选具有蛋白酶活性的克隆子,对其进行Illumina二代测序,对预测到的基因进行功能注释,根据基因丰度结果确定后续研究的功能基因。利用大肠杆菌BL21(DE3)对功能基因进行诱导表达,对表达产物进行酶活性测定。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,将密码子优化后的功能基因分别敲入枯草芽孢杆菌C6基因组ctc位点并进行表达验证。【结果】从Fosmid文库1 700个克隆子中筛选到1个具有蛋白酶活性的阳性克隆Pro4-C5。通过二代测序技术,鉴定出3个潜在的蛋白酶基因gene0833(内肽酶,EC编号:EC3.4.21.53)、gene0196(金属内肽酶,EC编号:EC3.4.24)和gene0585(羧肽酶,EC编号:EC3.4.17.14)以及1个L-天冬酰胺酶基因(gene0683,EC编号:EC3.5.1.1)。以p ET-28a(+)为表达载体,通过大肠杆菌BL21(DE3)原核诱导表达发现,gene0585和gene0196未表达;gene0833表达的蛋白分子质量为87 ku,蛋白酶活性为10.45 U/mL;gene0683表达的蛋白分子质量为37 ku,L-天冬酰胺酶活性为88.52 U/mL,同时发现该蛋白也具有蛋白酶活性,酶活性为5.25 U/mL。将密码子优化后的gene0683和gene0833定点敲入枯草芽孢杆菌C6基因组中表达发现,gene0833未表达,gene0683表达的蛋白酶活性为109.72 U/mL,相比原始菌株(100.97 U/mL)显著提高了8.67%(P<0.01);L-天冬酰胺酶活性为31.63 U/mL,相比原始菌株(22.79 U/mL)显著提高了30.06%(P<0.01)。【结论】从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选和鉴定出了2个具有蛋白酶活性的功能基因(gene0833和gene0683),均来源于微小杆菌属(Exiguobacterium),其中gene0683在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达产物具有较高的蛋白酶和L-天冬酰胺酶酶活性。

分析不同品种牛的瘤胃微生物群落结构的差异,构建了1个鲁西肉牛瘤胃细菌16S rDNA文库,并从公共数据库中搜集来自荷斯坦奶牛、晋南牛、牦牛、黄牛和Hanwoo的9个16S rDNA文库,对序列多样性和文库组成等进行比较分析。结果发现:鲁西肉牛瘤胃细菌16S rDNA文库共有122个克隆,可分为109个操作分类单元。文库中91%的克隆来自未培养细菌,拟杆菌(Bacteroidales)和梭菌(Clostridiales)是其中的优势菌群。文库的定性和定量比较表明饲喂不同日粮的5个荷斯坦奶牛16S rDNA文库组成类似,而与鲁西肉牛等亚洲品种的文库存在显著差异。结果表明,牛的品种是瘤胃细菌群落差异...

牛的瘤胃中富含各种微生物,微生物与瘤胃之间互生互利,对于牛的生长发育具有重要作用。本研究对牛瘤胃中常见的微生物菌群及其变化特征进行了综述,对影响牛瘤胃中微生物菌群变化的因素进行分析,以期为牛的生长发育、疾病防控和质量安全提供科学有效的指导。

瘤胃微生物区系变化与反刍动物的生长发育密切相关,微生物受宿主、环境、营养、管理等因素的影响,瘤胃微生物在反刍动物的生长发育、生产性能以及健康方面起着重要作用。本文综述了4种瘤胃微生物区系的建立过程与机制,以及微生物区系变化对动物代谢的影响,并阐述了瘤胃的调控技术与机理,为瘤胃调控技术应用、生产性能及健康水平提升、环境减排提供参考。

探讨小花棘豆黄酮对绵羊瘤胃微生物数量的影响,为小花棘豆的综合利用提供参考。将12只和田羊随机分为4组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。试验组分别按10,30,50 mg/kg的剂量饲喂小花棘豆黄酮,试验持续35 d。试验前及试验后每隔7 d取瘤胃液,检测瘤胃液中微生物数量的变化。结果显示,与对照相比,试验羊瘤胃液中总细菌数均有不同程度的升高,其中从第21天开始试验Ⅰ组和试验Ⅱ组瘤胃液总细菌数均显著高于对照(P0.05);所有试验羊瘤胃液中厌氧真菌数和瘤胃原虫数均无明显变化,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组瘤胃液纤维素降解菌数量无明显变化,试验Ⅲ组可降低白...

饲料中的脂肪除了供能以外,其生理功能主要体现在多不饱和脂肪酸的营养方面。笔者就反刍动物饲料中脂肪组成,瘤胃内脂肪水解、不饱和脂肪酸在瘤胃内的微生物氢化和脂肪合成等方面的研究进展做一综述。

采用５头装有瘤胃瘘管、十二指肠瘘管的土著种成年空怀母山羊，按自身对照设计，试验期山羊皮下注射孕酮１．２５ｍｇ／ｄ，以研究孕酮对瘤胃微生物氮代谢的调节及其作用机理。结果表明，皮下注射孕酮可进入瘤胃，并影响微生物的代谢活动，使十二指肠食糜微生物氮（ＭＣＰ－Ｎ），尿素氮（ＵＮ），氨氮（ＮＨ３－Ｎ）量极显著增加（Ｐ＜０．０１），但食糜总氮，过瘤胃蛋白氮（ＢＰＮ）或非氨氮（ＮＡＮ）无显著变化（Ｐ＞０．０５）。用放射免疫受体测定法对瘤胃细菌进行测定，发现山羊瘤胃细菌孕酮受体（ＢＰＲ）与孕酮的最大结合容量和Ｋｄ值分别为１０５．０１±１５．３２ｍｏｌ／ｍｇ（蛋白）和９．５４±０．４４×１０－８ｍｏｌ／Ｌ（ｎ＝...

选取36头遗传背景相似的13～15月龄体质量为(332.8±49.9) kg的夏南牛，随机分成4组，每组3个重复，分别饲喂磷质量分数为0.15%、0.18%、0.20%、0.23%的日粮，预试期15 d，试验期60 d，测定夏南牛生长性能和血清生化指标，分析日粮磷水平对瘤胃微生物区系的影响。结果表明：日粮磷水平0.15%组夏南牛日干物质采食量极显著低于其他各组的；0.18%和0.20%组牛平均日增重显著高于0.15%组的；磷水平为0.20%时，夏南牛的平均日增重最高，达0.92 kg。不同磷水平日粮对夏南牛的干物质表观消化率、中性洗涤纤维表观消化率、酸性洗涤纤维表观消化率、粗蛋白表观消化率和钙表观消化率无显著影响，磷的表观消化率随日粮中磷水平的提高呈线性增加。日粮磷水平对夏南牛血清中钙、磷、尿素氮浓度和碱性磷酸酶活性无显著影响。日粮磷水平对夏南牛瘤胃发酵参数无显著影响，拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)为优势菌门。体质量为(332.8±49.9) kg的13～15月龄夏南牛推荐日粮磷水平为0.20%。

选取36头遗传背景相似的13～15月龄体质量为(332.8±49.9) kg的夏南牛，随机分成4组，每组3个重复，分别饲喂磷质量分数为0.15%、0.18%、0.20%、0.23%的日粮，预试期15 d，试验期60 d，测定夏南牛生长性能和血清生化指标，分析日粮磷水平对瘤胃微生物区系的影响。结果表明：日粮磷水平0.15%组夏南牛日干物质采食量极显著低于其他各组的；0.18%和0.20%组牛平均日增重显著高于0.15%组的；磷水平为0.20%时，夏南牛的平均日增重最高，达0.92 kg。不同磷水平日粮对夏南牛的干物质表观消化率、中性洗涤纤维表观消化率、酸性洗涤纤维表观消化率、粗蛋白表观消化率和钙表观消化率无显著影响，磷的表观消化率随日粮中磷水平的提高呈线性增加。日粮磷水平对夏南牛血清中钙、磷、尿素氮浓度和碱性磷酸酶活性无显著影响。日粮磷水平对夏南牛瘤胃发酵参数无显著影响，拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)为优势菌门。体质量为(332.8±49.9) kg的13～15月龄夏南牛推荐日粮磷水平为0.20%。

【目的】蛋氨酸羟基异丙酯（HMBi）作为饲料添加剂广泛用于补充反刍动物日粮中缺乏的蛋氨酸（Met），尽管HMBi拥有过瘤胃特性，但仍有部分在瘤胃中降解。研究拟探究HMBi对犊牛瘤胃发酵和微生物区系的影响。【方法】选取36头体重在（101±10）kg的84日龄断奶后荷斯坦母犊牛并随机分为两个处理组，分别为对照组（PC,0.40%Met）和蛋氨酸扣除组（PCMet,0.28%Met），通过减少PCMet组日粮中HMBi的添加使Met含量较PC组少30%。试验期97 d，其中预饲期7 d，正式试验期90 d。于试验0、90 d测定犊牛体重，正试期每天记录采食量，在试验90 d收集血清样品和瘤胃液样品用于发酵参数和微生物区系的测定。【结果】（1）与PC组相比，PCMet组犊牛生长性能无显著差异（P>0.05），血清Met含量有降低的趋势（0.05

关键词： 蛋氨酸羟基异丙酯  母犊牛  微生物区系  瘤胃发酵参数