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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王炳晓 柴同杰 苏鹏程 吕静 姚美玲 戈胜强 秦梅
【目的】从奶牛瘤胃液中分离出具有分解纤维素能力的兼性厌氧细菌,用于绿色粗饲料微生物添加剂的研发。【方法】从奶牛瘤胃中采取瘤胃液,接种于羧甲基纤维素钠平板,采用严格厌氧结合需氧培养方式进行培养,通过刚果红染色,筛选出分解纤维素能力强的兼性厌氧细菌;采用生化试验结合16S rDNA序列分析方法对细菌进行鉴定,并绘制系统发育树;同时对细菌生长特性及有无致病性进行初步测定。【结果】共分离到63株具有分解纤维素能力的细菌,其中29株有较强的分解纤维素能力,包括24株G-菌,5株G+菌;24株G-细菌中,18株为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,3株为铜绿假单胞杆菌,2株为大肠杆菌,1株为产酸克雷伯氏菌;5株G+细...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
曹阳春 杨红建 沈博通
为获得高产纤维降解酶瘤胃厌氧真菌,从放牧饲养条件下随机选出10头屠宰后的青海大通牦牛瘤胃中采集食糜样本,通过亨盖特滚管技术筛选得到29株厌氧真菌菌株。以小麦秸秆为底物,测定这些菌株第6天培养液中乙酰酯酶、阿魏酸酯酶、木聚糖酶、羧甲基纤维素酶和微晶纤维素酶的活性。29株真菌之间5种酶活性差异显著,阿魏酸酯酶活性最高的菌株比活性最低的菌株活性高出7.9倍,差异最显著;而羧甲基纤维素仅高出2.5倍,差异最不显著。对各菌株5种酶活性进行相关分析,乙酰酯酶、阿魏酸酯酶、木聚糖酶和羧甲基纤维素酶相互之间均存在显著的正相关性(r>0.67,P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈赞明 韩正康
从自由采食青干草的水牛瘤胃分离出4种厌氧真菌,分别属于 Neocallimastix、Piromyces、Orpinyoes 和(?)属。Neocallimastix sp。球形孢子囊着生在多分枝的“主根”上,孢子多鞭毛;Piromyoes (?)孢子囊椭圆形,孢子单鞭毛。此二属均为单中心真菌。Orpinomyces bovis 孢子囊球形,壁较厚,具独特的孢子囊柄复合物,孢子多鞭毛;(?)elegans 孢子囊梭形,顶端具一细突,孢子单鞭毛。此二属均为多中心真菌。其中,以(?) elegans 的羧甲基纤维素酶(CMCasc)活力和降解滤纸纤维的能力为最强。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈赞明 韩正廉
在系列Ⅰ（青草、干草、稻草）和系列Ⅱ（稻草添加精料及非蛋白氮）日粮条件下．分别测定了３头装有永久性瘤胃瘘管的去势公水牛瘤胃真菌孢子数量，体外培养１２０ｈ的混合真菌胞外羧甲基纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ）和滤纸酶（ＦＰａｓｅ）的活力变化。结果表明：青草期瘤胃真菌数量及ＣＭＣａｓｅ和ＦＰａｓｅ活力均显著高于稻草期（Ｐ＜０．０５）；干草期ＣＭＣＢｓｅ和ＦＰａｓｅ活力居中。稻草添加精料日粮时．稻草日粮（！期）添加混合精料（２ｋｇ／ｄ）（Ⅱ期），瘤胃真菌数量无明显变化，但ＦＰａｓｅ活力显著降低（Ｐ＜０．０５）；精料加羟甲基尿素（８０ｇ／ｄ）添加于稻草日粮（Ⅲ期）对瘤胃真菌数量基本无影响，ＣＭＣａｓｅ和ＦＰａｓ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张丽萍 李亚冰 程辉彩 黄亚丽 张宁
从牛瘤胃内容物中筛选出一株兼性厌氧纤维素酶产生菌CR-14,根据形态特征、生理生化特征和16 S rDNA序列分析鉴定为纤维单胞菌(Celloulonmonassp.)。该菌株所产纤维素酶中主要组分酶包括C1酶、CX酶和β-葡萄糖苷酶,其中CX酶酶活最高,C1酶和β-葡萄糖苷酶酶活较低。该酶的最适反应条件为温度50℃、pH6.0;在60℃以下、pH6.0~7.5条件下性能稳定;Mn2+、Fe2+能显著促进该酶的活力,Zn2+、Cu2+、Ca2+、K+对酶活力有抑制作用。
关键词：
牛瘤胃 兼性厌氧 菌种鉴定 纤维单胞菌
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵圣国 王加启 刘开朗 李旦 于萍
利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物PCR扩增并测序,揭示奶牛瘤胃尿素分解菌的多样性。提取本研究室前期鉴定的16个脲酶克隆的质粒,利用脲酶保守序列ureC引物和细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到pMD19-T载体,转化E.coliJM109,挑取阳性克隆测序。利用Blast程序将序列与GenBank和RDP数据库进行比对,并使用Mega 4.0软件构建系统发育树。4个脲酶克隆含有脲酶保守序列ureC,系统发育树分析表明,U1、U5、U13和U15分别属于Firmicutes、ε-Proteobacteria、β-Proteobacteria和A...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
曾燕 孙朋 倪学勤 杨杰 曾东 张洪瑜
为探讨瘤胃细菌多样性,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(Polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术结合共性及特异性条带的克隆测序和聚类分析及主成分分析,对牛体外厌氧条件下瘤胃细菌在CMC、PCS、J、K培养基及37和50℃培养温度下的多样性进行研究。结果表明:1)37℃条件下不同培养基的DGGE图谱差异较大,虽然具有较高的平均条带数,CMC和K培养基样品分别为20和27条,但各样品间的相似性系数较低,J和CMC培养基间的相似性系数为0.84,J和PCS培养基间的相似性系数仅为0....
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
姜茂成 詹康 严康 赵倩明 赵国琦
在体外分离培养奶牛瘤胃上皮细胞,可为奶牛瘤胃生理功能和吸收机制研究和永生化奶牛瘤胃上皮细胞奠定基础。通过胰蛋白酶消化法从奶牛瘤胃组织中分离出瘤胃上皮细胞,并通过免疫细胞化学的方法检测细胞角蛋白,CCK-8检测细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞的衰老以及细胞染色体核型分析来鉴定瘤胃上皮细胞。结果表明:1)利用胰蛋白酶消化法可以稳定的培养出瘤胃上皮细胞并且能够在体外传代大约5代;2)通过在显微镜下进行细胞形态的观察呈单层"岛屿状";3)在荧光显微镜下细胞角蛋白抗原能够发出绿色荧光;4)奶牛瘤胃上皮细胞传
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋文芳 胡国全 徐彦胜
从若尔盖草甸淤泥中获得一株低温厌氧纤维素菌CD-2,分离菌株革兰氏染色阴性,直杆状,严格厌氧,菌体大小为0.3μm×2.8～3.1μm,生长温度范围5～40℃(最适温度20℃);pH范围6.5～8.0(最适pH7);NaCl浓度范围0.1%～0.4%(最适NaCl浓度0.2%)。分离菌株能利用滤纸、纤维素粉MN300、微晶纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、木聚糖等。在菌株CD-2的纤维素酶系中,存在外切-β-1,4-葡聚糖酶(C1酶)、内切-β-1,4-葡聚糖酶(Cx酶)和β-葡萄糖苷酶3种组分,最适温度分别为30、30和25℃。该菌株还存在木聚糖酶,最适温度为30℃。通过16S rDNA序...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘东阳 王蒙蒙 马磊 赵政 邱强 沈其荣
为了从不同生境样品中分离筛选高效纤维素分解菌并评价其纤维素分解能力,以结晶纤维素为唯一碳源,测定其在刚果红平板上水解圈大小和纤维素酶活力,并分析各菌株对小麦秸秆的分解效率。结果表明:4株高效纤维素分解菌在纤维素刚果红培养基上均能形成透明水解圈,并能使滤纸条发生崩解。利用16S rRNA基因序列在GenBank中的同源性比对结果,结合其形态和生理生化特征,确定了各菌株的分类学地位,分别将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)X3,蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)X6、55-3和55-4。接种21 h后菌株X3获得最大滤纸酶活力(0.12 U·mL-1),27 h...
关键词：
堆肥 纤维素 纤维素酶 结晶度 分解
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
毛胜勇 王全军 姚文 朱伟云
在青干草日粮条件下 ,以 3头装有永久性瘤胃瘘管的本地山羊为试验动物 ,研究去除瘤胃厌氧真菌对山羊瘤胃消化代谢的影响。结果表明 :去除瘤胃厌氧真菌后 ,瘤胃中的氨氮浓度显著下降 (P 0 10 )。酶活性测定结果表明 ,瘤胃内羧甲基纤维素酶活力显著下降 (P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚文 陈杰 韩正康
以4头装有永久性瘤胃痿管的海子母水牛为实验动物,研究了稻草日粮条件下添加羟甲基尿素对瘤胃内纤维素消化代谢的影响。实验采用自身对照设计。结果表明:添加羟甲基尿素后,瘤胃内总脱氢酶活力和纤维素酶活力均显著上升;总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度明显提高;纤维素消失率显著增加。可见,稻草日粮条件下添加羟甲基尿素能提高瘤胃微生物的活力,尤其是纤维素分解力,从而对瘤胃内纤维素消化代谢有一定的改善。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
史玉英 沈其荣 娄无忌 刘生浩 崔中利
滤纸平板法结合摇床培养筛选到２个纤维素分解能力较强的混合菌Ｍ１和Ｍ２。在以纤维素为碳源的培养液中，２８℃振荡培养４ｄ，滤纸纤维素失重率分别达５７．５３％和５４．９２％，未经处理的稻草秆纤维素失重率为３８．８２％和３６．２１％。膨化稻草比稻草秆易分解，纤维素降解率可达６８．８３％和６０．０２％。经初步鉴定，Ｍ１由木霉Ｆ１和芽孢杆菌Ｂａ组成，Ｍ２由木霉Ｆ２和芽孢杆菌Ｂａ组成。实验结果表明，由真菌、细菌组成的混合菌分解纤维素的能力明显强于其中任何一个单一菌株。
关键词：
纤维素 分解 筛选 混合菌
[期刊] 草业科学
[作者]
邹爱爱 魏亚琴 杨宇泽 曹磊 孙康永杰 万学瑞 王川
为构建高效表达的内切葡聚糖酶基因工程菌,本研究以牛瘤胃液中微生物全基因组为模板,通过PCR扩增方法得到eg片段,将其克隆至表达载体pMG36e中获得分泌型表达载体pMG36e::eg;将测序正确后的重组质粒电转导到乳酸菌(Lactococcus lactis NZ9000)中,得到L. lactis NZ9000/pMG36e::eg重组菌株,将发酵上清液通过10%三氯乙酸(Trichloroacetic acid, TCA)/丙酮沉淀法浓缩蛋白后,用刚果红染色法和3, 5-二硝基水杨酸(3, 5-Dinitrosalicylic acid, DNS)法检测该蛋白酶活性,使用滤纸酶活力(filter paper enzyme activity, FPA)法检测该蛋白酶的总酶活,并对重组内切葡聚糖酶进行酶学性质研究。结果表明:从牛瘤胃微生物中克隆得到一个基因大小为1 500 bp左右的条带,该酶分子量为50 kDa左右,经刚果红染色有明显水解圈,水解圈直径为2.32 cm;采用DNS法测定该重组蛋白的酶活为12.401 9U·mL~(-1),用FPA法测定总酶活为12.246 9 U·mL~(-1);重组蛋白酶对羧甲基纤维素钠、滤纸、微晶纤维素、脱脂棉均有酶活性;最适反应温度为90℃;最适反应pH为6;其中Cu~(2+)、Mn~(2+)、Ba~(2+)、Zn~(2+)、Co~(2+)等均可以提高重组酶的酶活力,而Fe~(2+)可抑制重组内切葡聚糖酶活力。本试验纤维素酶eg基因在L. lactis NZ9000中的稳定高效表达为提高青贮饲料的营养价值和消化率提供了技术支持。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
沈赞明 韩正康
试验用 3头安装永久性瘤胃瘘管的成年水牛。采用自身对照方式在不同日粮条件下分别测定了瘤胃液内纤维素酶 (CMCase和FPase)活力以及厌氧真菌孢子数量。试验分为 4期 :稻草期 (Ⅰ期 ) ,稻草 +精料期 (Ⅱ期 ) ,稻草、精料 +羟甲基尿素期 (Ⅲ期 )和稻草、精料、羟甲基尿素 +硫酸铵期 (Ⅳ期 ) ,每期 2 0d。Ⅱ期稻草添喂精料 (2kg/d)时CMCase和Fpase平均活力分别下降 39% (P
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