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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘子豪 龚倩梅 李科茫 马慧 吴宗福 姚火春
[目的]本文旨在从患乳房炎的奶牛乳液中分离鉴定病原菌。[方法]收集患乳房炎奶牛的乳液病料后分别接种绵羊血液平板和麦康凯鉴别培养基,置于37℃培养箱过夜。观察获得的单菌落形态并接种含有血清的液体培养基富集培养,然后煮沸法提取细菌纯培养物的基因组,以该基因组为模板通过PCR扩增未知细菌的核糖体RNA序列并对产物进行测序分析。以不同培养时间测定菌液D_(600)并绘制细菌的生长曲线。用倍比稀释法在96孔板上测定细菌对不同药物的最小抑菌浓度。[结果]从病料中分离到一株革兰阴性菌,命名为JS20170427COW。
[期刊] 水产学报
[作者]
邸军 张书环 黄君 杜浩 周勇 危起伟
为了确定中华鲟养殖基地一尾死亡子二代中华鲟的病原,利用传统病原菌分离方法,从濒死的中华鲟肝脏、脾脏和腹水中均分离到一株优势菌EM,采用16S r DNA基因序列分析、构建系统发育树并结合Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,确定菌株EM为脑膜败血伊丽莎白菌。进一步对健康子二代达氏鲟进行人工感染试验确定其致病性;同时通过观察患病子二代中华鲟组织切片分析其病理特征;并对菌株EM进行药敏特性研究以期指导临床用药。结果显示,被感染子二代中华鲟肝脏、脾脏及肾脏组织中铁血黄素沉积、实质性细胞空泡变性,溶血严重。菌株
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李川北 阮陈松杰 吴明波 徐洪森 苏应兵
为查明湖北石首大垸农场养殖的黑斑蛙(Rana nigromaculata)歪头病病原与致病原理，本研究应用微生物分离技术，从病蛙脑、肝、脾和肾脏组织中分离、纯化病菌，采用形态特征、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析进行细菌种类鉴定，通过组织病理学方法分析患病蛙病理损伤，及人工回归感染确定其致病性，并利用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果显示：分离菌(BSH3)与米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)聚为一支，结合该菌的形态学特征和生理生化特征，综合鉴定为米尔伊丽莎白菌。组织病理切片结果表明分离菌(BSH3)会导致蛙脑组织基质水肿，基质中出现空泡和炎性细胞浸润的现象；肝、脾和肾脏组织出现变性、坏死和炎症细胞浸润。人工回归感染试验显示，菌株可使黑斑蛙出现与自然发病蛙相似症状，半数致死浓度为6.3×10~4 CFU/mL。药敏试验结果表明菌株已呈现多重耐药性，仅对少数检测抗生素(米诺环素、氟苯尼考、利福平和万古霉素)敏感，根据药敏试验结果及农业部水产用药规定，推荐使用氟苯尼考治疗该疾病。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张虹 徐进 魏开金 徐滨 王丹
本实验旨在筛选对米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)有抑制作用的拮抗菌，并对其生长特性及其去除氨氮和亚硝酸盐的作用进行分析。实验采用平板对峙法从“稻蛙”养殖稻田土壤中分离到1株对米尔伊丽莎白菌有较强抑制作用的菌株X2。采用形态学特征观察和16s rDNA测序对X2进行鉴定，随后对X2在不同pH、盐度、温度等条件下的生长曲线进行了测定，以评估其环境适应性，并将X2接种于氨氮和亚硝酸盐培养基中，测定去除率以评估其去除氨氮和亚硝酸盐的能力。结合形态学特征及菌株16s rDNA序列分析，X2鉴定为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。结果显示：X2在pH 5～9、盐度5‰～50‰、温度20～40℃之间均能生长，最适pH、盐度、温度分别为7、5‰和35℃。这表明X2对环境的适应性较强，具有较强的耐酸碱性、耐盐性，适温性广等特性。X2在去除氨氮、亚硝酸盐方面也表现出了很强的能力，在X2接种浓度为5.0×10~7 CFU/mL时氨氮的去除率最高，达到74.95%;接种浓度为5.0×10~5 CFU/mL时亚硝酸盐的去除率最高，达到99.89%。结果表明，侧孢短芽孢杆菌X2对米尔伊丽莎白菌具有较强的拮抗作用，其环境适应能力也很强，同时具有较强的去除氨氮和亚硝酸盐的能力，可作为益生菌应用于蛙类养殖中防控米尔伊丽莎白菌感染和水质调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘芳园 胡瑞雪 余芳 侯家昊 于子润 顾泽茂
为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响，以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象，通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA，比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对细胞的黏附能力以及对蛙的致病性差异。结果显示：△ompA的生长能力和抗血清杀伤能力与野生株无显著差异；但与野生株相比，△ompA的生物膜形成能力增加了66%，△ompA对bEnd.3细胞的黏附能力降低了61%；黑斑蛙感染试验显示，△ompA在黑斑蛙血液、脾和脑组织中的载菌量分别为（3.15×10~8±0.09×10~8）、（2.11×10~8±0.07×10~8）和（6.61×10~8±0.16×10~8） copies/g，均显著低于野生株，且△ompA对黑斑蛙的致死率为37%，显著低于野生株的致死率（75%）。上述结果表明，ompA基因缺失不改变米尔伊丽莎白菌的抗血清杀伤能力，但增加了菌株的生物膜形成能力，减弱了菌株的黏附能力，从而降低了该菌对蛙的致病性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
戈胜强 柴同杰 秦梅
【目的】了解引起奶牛乳房炎的最主要病原菌葡萄球菌的耐药性,为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。【方法】于2006~2007年在泰安地区5个规模化奶牛场,采集128份临床乳房炎奶牛乳样,用传统的细菌分离、培养和生化鉴定方法,对其中的葡萄球菌进行了分离,用K-B纸片扩散法对葡萄球菌的耐药性进行了检测调查。【结果】本次调查中共分离到29株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌14株(14/29,47.4%),产色葡萄球菌3株(3/29,10.3%),木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌和人葡萄球菌各2株(2/29,6.9%),头葡萄球菌和模仿葡萄球菌各1株(1/29,3.3%);葡萄球菌对头孢拉...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
华加敏 田雨 何生平 刘小军 向明慧 周天赐 徐晨杰 陈芳慧 蔡亚非
[目的]酮病是高产奶牛常发的代谢性疾病，本试验旨在通过分析奶牛泌乳早期的生产性能DHI(奶牛群体改良)以及外周血的血细胞成分分析数据，阐明酮病发生与以上指标的相关性，及早预警牧场牛群酮病的发展。[方法]连续3年(2018—2020年)追踪江苏省境内某规模化牧场高产奶牛产后前3个月酮病高发期的生产性能数据，筛选出25头健康和20头酮病奶牛，进一步采集2020年产后第1个月的外周血进行血细胞分析；通过二元Logistic回归模型分析各指标对酮病的预警作用，通过受试者工作特征(ROC)分析确定各指标对酮病的预警值。[结果]奶牛生产性能的回归分析结果显示：乳脂率与酮病显著正相关，乳糖率与酮病显著负相关；奶牛血细胞成分分析结果表明：淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞数是与酮病正相关的指标；进一步相关分析发现：鲜牛乳中乳脂率和血液中淋巴细胞数两项联合指标对奶牛酮病具有显著的预警作用，其中乳脂率的最佳分界值为4.21%,淋巴细胞数的最佳分界值为4.815×10~9 L~(-1)。[结论]生鲜奶中的乳脂率和外周血中的淋巴细胞数可作为奶牛产后发生酮病的预警依据，用于指导牧场及时做好调控管理。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王赟 靳亚平 林炜明 利光辉 陈秀荔
应用自奶牛乳房炎检测为阳性的牛乳汁中分离的4种优势G+菌,分别与葡聚糖、油佐剂和FIA3种佐剂制成细菌裂解苗免疫家兔。于免疫后第7天开始,每隔7d采集心脏血,分离血清,以试管凝集试验检测血清中抗体效价,以此评价所分离细菌的免疫原性和所用佐剂的免疫促进作用,筛选适宜的佐剂。结果显示,所分离的优势G+菌刺激家兔机体后可产生高效价的抗体,免疫后第7天,抗体效价开始明显上升,第28天左右达到峰值,并一直持续到试验结束(63d)。比较3种佐剂的免疫促进效果,以FIA效果最好,但3种疫苗间的免疫效果差异不显著,而与对照组相比,差异均达极显著(P<0.01)。
关键词：
乳腺炎 疫苗 免疫 抗体效价
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨钦 王长法 杨宏军 杨少华 高运东 仲跻峰 彭广能
【目的】实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性。【方法】PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应。【结果】测序结果表明,扩增片段含有993bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278HU·mg-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
廖洁丹 李守军 丁焕中 刘文字 余静贤 张嘉慧 刘雅红
【目的】研究乳房炎奶牛单剂量乳房灌注1%恩诺沙星(50ml/头)后乳中药物浓度的变化规律。【方法】采用HPLC法测定乳中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度,用统计矩原理处理药物浓度—时间数据。【结果】在给药区恩诺沙星和代谢产物环丙沙星均于给药后2h左右乳中浓度达到最高值,分别为(13.16±3.10)μg·ml-1和(2.79±0.94)μg·ml-1,然后逐渐下降;12h后检测不到恩诺沙星,24h已检测不到环丙沙星。对于非给药区,恩诺沙星给药后1h左右乳中浓度达到最高值(0.19±0.02)μg·ml-1,然后逐渐下降;6h后检测不到恩诺沙星,而代谢产物环丙沙星于给药后4h乳药浓度可达最高峰...
关键词：
恩诺沙星 代谢物 消除 奶牛 乳房炎
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张春刚 刘光磊 张楠 苏效双 赵国琦 吴聪明 占今舜
为评估氯己定碘溶液对奶牛乳头消毒效果,90头泌乳奶牛被平均分成3个组:Ⅰ组和Ⅱ组奶牛在挤奶前后分别使用氯己定碘溶液和聚维酮碘溶液来对乳头进行药浴消毒,Ⅲ组奶牛不做任何消毒处理。试验持续至12周。结果表明,1)与试验前相比,Ⅰ组和Ⅱ组奶牛日均奶产量和体细胞数(SCC)差异不显著,Ⅲ组奶牛的日均奶产量极显著下降(P<0.01),SCC值极显著升高(P<0.01);2)持续用药12周后,Ⅰ、Ⅱ组奶牛乳房检出菌株数明显减少,头感染率(33.3%、46.7%)和乳区感染率(11.7%、26.7%)均发生极显著或显著
关键词：
奶牛 乳头消毒 氯己定碘 聚维酮碘
[期刊] 林业科学研究
[作者]
冯锦霞 王敏杰 闫伟
本文采用ITS序列分析方法和ITS-RFLP分子标记方法对内蒙古大青山地区分离获得的27个乳牛肝菌属(Suillusspp.)真菌菌株进行了分子鉴定和遗传关系研究。通过ITS序列比对鉴定出SP1、SP2、SP3、SP4、SP5、SP6、SP7、SP8、SP9、SF1、SF2、SF3、P.Lac-1、P.Lac-2、3′、3″、3#菌株属于褐环乳牛肝菌(Suillus luteus)。27株乳牛肝菌属真菌分为3个遗传类型,且每个遗传类型在分类上属于同一个种。樟Ⅱ和1"与其余菌株的遗传距离较大,其原因可能是宿主和生境的影响。序列分析方法能够更准确地分析出遗传差异,但ITS-RFLP方法更简单、实用...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
计红芳 宋瑞清 杨谦
为寻找抑制杨树叶枯病菌生长的活性成分,进行了绒白乳菇发酵液抑菌活性成分的分离纯化研究。结果表明,发酵液提取物经硅胶柱层析粗分离得到5个组分,其中组分4显现出较高的抑菌活性;组分4经TLC得到样品A和样品B,其中样品B能够完全抑制叶枯病菌生长;薄层检测和GC分析判定样品B为单一化合物,纯度为98.805%;综合UV、IR、EI-MS和NMR的检测结果,推断样品B的分子式是C8H9NO,分子量135,化学名为1-(2-吡啶)-2-丙酮,在绒白乳菇发酵液中首次发现该化合物。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭鑫 刘杰 高巧仙 辛国省
在乳制品的开发过程中，乳蛋白是评估牛乳营养价值的重要指标。饲料配方优化是当下实现奶牛生产提质增效的重点工作之一。目前，饲喂过瘤胃氨基酸虽是提高奶牛乳蛋白合成最直接且高效的途径，但多数研究仅限于单一的限制性氨基酸，忽略了对氨基酸营养平衡体系的认识。在奶牛机体内，氨基酸营养作为乳蛋白合成的底物与信号物质，影响着乳腺对血液氨基酸的吸收与利用，但其分子代谢机制尚不明晰。本研究主要从氨基酸对奶牛乳腺蛋白合成的影响及调控两方面进行分析，首先概述了乳蛋白合成的基本途径，必需氨基酸、非必需氨基酸、组合必需氨基酸对乳蛋白产量及浓度的影响；其次详细介绍了必需氨基酸与组合必需氨基酸的供给对奶牛采食量、血液氨基酸浓度、血流量、乳腺细胞的影响，同时在细胞分子角度讨论了乳腺细胞培养所需氨基酸的最优添加剂量，以及必需氨基酸对氨基酸转运载体和信号通路的特异性调节。综上，通过对奶牛乳腺蛋白合成影响因素和分子调控机制的探讨，有助于优化饲料中理想的氨基酸配比与科学的生产模式，为氨基酸营养提高乳蛋白合成的相关研究提供理论参考。
关键词：
奶牛 乳蛋白 氨基酸 乳腺细胞 营养调控
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