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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李萌 李庆章
【目的】探讨瘦素在奶山羊乳腺发育、泌乳和退化各时期的表达与作用。【方法】采用激光共聚焦技术及Western Blot方法,检测瘦素及其受体(OB-Rb)的表达情况;采用乳腺组织体外培养联合免疫组化及毛细管电泳技术,测定瘦素对乳腺结构及泌乳功能的影响。【结果】乳腺整个发育过程中瘦素与瘦素受体的表达呈显著正相关,青春期最高,妊娠期下降,泌乳期维持在低水平,退化期显著升高,在退化21 d恢复到青春晚期水平。妊娠期瘦素处理组乳腺导管分支增多,泌乳期瘦素处理组乳腺组织培养基中β-酪蛋白(β-CN)含量增加;退化期瘦素处理组乳腺组织导管和腺泡结构发生部分解体,乳腺组织中可以检测到较多的凋亡细胞。【结论】瘦...
关键词：
乳腺 瘦素 长型受体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李真 李庆章
【目的】探讨奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体表达规律。【方法】关中奶山羊乳腺发育的4个时期即青春期、妊娠期、泌乳期及退化期用放射性免疫学方法(RIA)测定激素的含量,用免疫荧光法(IF)检测激素受体含量。【结果】在乳腺发育过程中血清中生长激素(GH)变化不显著(P>0.05),而组织中的GH在妊娠5月(P5M)时出现分泌高峰2.599±0.459ng·mL-1(P0.05),到妊娠1月(P1M)时INS含量高达31.664±6.416μIU·mL-1(P<0.01),泌乳高峰过后回到正常水平。组织中的INS在进入妊...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王强 敖长金 嘎尔迪 卢德勋 高民 段斌 冯子琪
【目的】研究阴外动脉灌注不同平衡模式的氨基酸对奶山羊乳腺摄取乳成分前体物(milk components precursors,MCP)的影响规律。【方法】选用2—3周岁,体重、产奶量相近、安装有阴外动脉和腹部皮下静脉血插管的关中奶山羊3只,由阴外动脉灌注不同平衡模式的氨基酸,在灌注前后分别采集动静脉血浆,测定乳蛋白前体物(milk protein precursors,MPP)、乳脂前体物(milk fat precursors,MFP)和乳糖前体物(milk lactose precursors,MLP)的含量和乳腺对其的摄取。【结果】阴外动脉灌注不同平衡模式混合氨基酸改变了乳腺对MPP、...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨雪峰 姜金庆 孙红武 欧阳五庆
【目的】建立奶山羊乳腺上皮细胞体外培养方法,并对原代和传代细胞进行形态观察。【方法】分别采用组织块法和胶原酶消化法培养奶山羊原代乳腺上皮细胞,然后通过胰酶消化法结合反复贴壁法纯化细胞,免疫组化法鉴定细胞,并利用倒置显微镜观察细胞形态。【结果】组织块法和胶原酶消化法均能培养奶山羊原代乳腺上皮细胞;纯化获得的细胞呈卵圆形或多角形,形成典型的鹅卵石或铺路石样,且细胞角蛋白检测呈阳性;多次传代后乳腺上皮细胞出现分化现象,形态多样,增殖仍然旺盛。【结论】成功建立了一种简单易行、经济而实用的奶山羊乳腺上皮细胞体外培养方法。
关键词：
奶山羊 乳腺上皮细胞 细胞培养
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
苗晋锋 马海田 邹思湘 陈伟华
8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0...
关键词：
山羊 内毒素 酶 细胞因子 乳腺炎
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王月影 范光丽 杨国宇 王艳玲 张永德
为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董宝霞 杨玉莹 张勤文 魏青 荆海霞
[目的]本文旨在了解瘦素(LEP)对牦牛乳腺上皮细胞(YMEC)中细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)蛋白表达的作用特点及催乳素(PRL)对LEP功能发挥可能产生的影响。[方法]以牦牛乳腺上皮细胞为载体，以添加和不添加催乳素(500 ng·mL~(-1))为前提，用不同剂量瘦素(0、50、100、200、400、800 ng·mL~(-1))作用YMEC 48 h以及添加JAK2/JAK3信号通路阻滞剂AG490作用48 h,采用Western blot技术检测SOCS3和STAT3蛋白的相对表达水平及STAT3蛋白磷酸化水平。[结果]无催乳素时，除50 ng·mL~(-1)瘦素外，其余各剂量均抑制SOCS3蛋白的表达，而各浓度LEP均抑制STAT3蛋白的表达，STAT3蛋白磷酸化水平高于蛋白表达水平。有催乳素时，SOCS3蛋白除了在100 ng·mL~(-1) LEP下被抑制之外，其余各剂量均有促进作用；800 ng·mL~(-1) LEP对STAT3蛋白表达有显著抑制作用，STAT3磷酸化水平除100 ng·mL~(-1)组外，均有所升高。添加AG490之后，SOCS3与STAT3都主要是通过JAK2激活诱导。[结论]高浓度瘦素会抑制SOCS3及STAT3蛋白的表达，瘦素主要通过JAK2/STAT3通路发挥生理功能，而SOCS3是JAK2/STAT3通路的负反馈调节因子；PRL能够缓解高浓度LEP导致的瘦素抵抗作用，并且能促进SOCS3和STAT3蛋白的表达。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郑月茂 彭新荣 徐永平 石玉强 张涌
通过有效的细胞培养方法获得山羊乳腺上皮细胞系,对这些细胞形态进行光镜观察,结果发现,细胞可形成闭合型和开放型细胞群,闭合型细胞群边界清晰,细胞之间结合紧密;开放型细胞群边界不清,细胞相互分散存在于一局限的范围内。乳腺上皮细胞与成纤维细胞混生时分区生长,界线明显;细胞之间形成许多腔状结构。纯化的乳腺上皮细胞通过单细胞悬浮后传代,部分细胞形成岛屿状聚集,部分细胞以贴壁的自由单个细胞散在形式存在。上皮细胞增殖可形成圆顶型结构,呈乳头状(称之为乳球体);乳腺上皮细胞可产生并分泌乳汁,分泌到细胞外的乳汁流动形成网状结构。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,大多数上皮细胞呈短梭形或多角形,细胞之间紧密相靠...
关键词：
体外培养 山羊 乳腺上皮细胞 细胞形态
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
欧阳五庆 钱菊汾
为研究乳腺上皮细胞增殖和分化特性及其基因表达的分子机制 ,建立了山羊乳腺上皮细胞培养体系。用无菌手术法从健康第二胎泌乳期山羊乳腺取得组织块 ,在体外条件下用组织块法进行原代培养。基础培养液用 RPMI1 6 4 0 ,含胎牛血清 1 5 0 m L/ L,添加 EGF(1 0 μg/ L)、胰岛素 (0 .1 m g/ L)、E2 (1 μg/ L)、氢化可的松 (0 .1mg/ L)、孕酮 (1 m g/ L)、青霉素 (0 .1 g/ L)及链霉素 (0 .0 5 g/ L) ,在铺有胶原的塑料培养板上培养。从细胞接种存活率、细胞群体倍增时间、细胞生长曲线和细胞分裂指数 4个方面考察了乳腺...
关键词：
山羊 乳腺上皮细胞 培养体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
马小军 陈富强 张小丽 李发弟 唐然 张晨 宋晓育 张欣
Ｔｏｌｌ样受体能够识别细菌等病原微生物及介导炎症反应信号通路，在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。为了解Ｔｏｌｌ样受体２（ＴｌＲ２）在小尾寒羊正常乳腺组织及由金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎乳腺组织中的表达情况，探讨ＴｌＲ２在金黄色葡萄球菌乳腺炎致病过程中的作用机制及乳腺上皮细胞在乳腺免疫防御中所起的作用，采用ｑＲＴ－ＰＣＲ技术和免疫组织化学染色（ＩＨＣ）法检测了正常小尾寒羊及金黄色葡萄球菌乳腺炎病理模型小尾寒羊乳腺组织中ＴｌＲ２基因ｍＲＮＡ及其蛋白的表达情况。结果显示，小尾寒羊正常乳腺组织、金黄色葡萄球菌感染乳腺组织均有ＴｌＲ２ ｍＲＮＡ及其蛋白表达；但金黄色葡萄球菌感染后乳腺组织中ＴｌＲ２基．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙苏军 安志兴 彭新荣 张涌
采用快速冷冻方法冻存山羊乳腺组织块,比较不同大小组织块、不同冻前预处理和每管冻存不同块数对冻存效果的影响。结果表明,冻前预处理0,6和12h,直径<0.3mm的组织块冻前预处理6h,山羊乳腺组织块的保存效果较好。
关键词：
山羊 乳腺 冷冻保存
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王月影 范光丽 杨国宇 王艳玲 张永德
为了探讨大鼠乳腺中孕酮受体(PR)的变化规律,试验采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的孕酮受体表达进行了半定量研究。结果表明,妊娠18 d的PR表达水平明显低于处女期和妊娠6,12 d (P0．05)。表明PR可能参与了乳腺细胞的发育和泌乳。
关键词：
孕酮受体 乳腺 RT-PCR法 大鼠
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李恒蕊 谢洋洋 葛丽岩 张潇 田博文 罗军 史怀平 李杰 胡建红 张迎锐
【目的】探究奶山羊不同泌乳时期乳房类型的变化规律及其对泌乳性能的影响。【方法】以99只健康、产奶期相近的初产泌乳西农萨能奶山羊为试验对象,对其5个泌乳时间点(14,70,126,182和211 d)的乳房类型(乳房外形分为方圆形、长条形和宽扁形,乳房基部分为半球形和柚子形)和日产奶量进行记录,同时采集乳样对乳成分(脂肪率、蛋白率、乳糖率、总固体和非脂率)和体细胞数进行检测,并利用SPSS软件对试数据进行分析。【结果】随着泌乳时间的增加,方圆-半球型(Sh)乳房数量占比呈下降趋势,长条-柚子型(Lg)乳房数量占比呈上升趋势;乳房外形由方圆形(S)和宽扁形(W)趋向长条形(L)转变,乳房基部由半球形(h)趋向柚子形(g)转变; 5种乳房类型整体趋向长条-柚子型(Lg)乳房变化。泌乳70 d时,方圆-半球型(Sh)乳房和长条-半球型(Lh)乳房的奶山羊产奶量显著高于长条-柚子型(Lg)乳房和宽扁-柚子型(Wg)乳房(P0.05)。【结论】奶山羊的乳房类型随着泌乳时间的推移而发生变化,泌乳70 d时,方圆-半球型(Sh)乳房和长条-半球型(Lh)乳房奶山羊的产奶量高。
关键词：
奶山羊 乳房类型 泌乳性能 奶山羊选育
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
夏荣欣 李悦 刘婷婷 孙宣 钟黄欣 郭文晴 曾诚 张国敏
[目的]本实验旨在探究神经介素B（neuromedin B， NMB）及其受体[神经介素B受体（neuromedin B receptor， NMBR）、胃泌素释放肽受体（gastrin releasing peptide receptor， GRPR）和蛙皮素受体（bombesin receptor subtype 3， BRS3）]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达，为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节的机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只（3和9月龄，各6只）进行阉割并采集睾丸组织，在NMB及其受体基因克隆与序列分析的基础上，采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位，利用RT-qPCR和western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近，NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上，结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于七次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达，其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比，9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低（P<0.05），而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增高（P<0.05）。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节，丰富了家畜生殖生理学的研究。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾诚 夏荣欣 李悦 刘婷婷 孙宣 钟黄欣 郭文晴 张国敏
[目的]本试验旨在探究神经介素B(NMB)及其受体NMBR[还包括胃泌素释放肽受体(GRPR)和蛙皮素受体(BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达，为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只(3月龄和9月龄，各6只)进行阉割并采集睾丸组织，在克隆NMB及其受体基因与分析序列的基础上，采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位，利用RT-qPCR和Western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近，NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上，结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于7次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达，其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比，9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05),而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节。
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