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[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 侯哲  陆秀君  张晓林  梅梅  魏俊  李昂  
试验以天女木兰叶芽、幼叶、成熟叶、花芽、花瓣、种子为材料,分别采用Trizol法、改良Trizol法、CTAB-异丙醇法、CTAB-NA AC和无水乙醇法、CTAB-li Cl法、天根试剂盒法对其各器官进行总rNA的提取。总rNA的完整性、纯度和浓度等提取效果分别通过琼脂糖凝胶电泳和酶标仪进行检测。结果表明:叶芽的总rNA最适合用改良Trizol法进行提取,花瓣和花芽的总rNA最适合用改良的CTAB法提取,幼叶的总rNA可选择试剂盒法,Trizol可用于成龄叶片的提取,而天根试剂盒最适合天女木兰种子总rNA的提取。通过不同提取方法获得的高质量总rNA经rT-PCr检测表明:可以直接用于后续分子...
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 方婷  徐倩  金爱武  邓莹  骆争荣  朱强根  
【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总RNA提取的最优方法,获得高质量RNA样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的RNA,通过NanoDrop2000微量分光光度计检测浓度、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带,采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析。【结果】4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总RNA,其中SDS法提取的RNA浓度较高,但提取时间过长且步骤繁琐,RNA容易发生降解,其质量不适合用于后续的分子生物学试验;柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷,除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外,其余组织的RNA纯度和质量都可以满足后续的试验开展;改良CTAB法适用于各组织,包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子,缺点是DNA残留明显。除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外,其余3种RNA抽提方法对样品总RNA浓度无统计学差异,且各组织RNA反转录为cDNA,以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增,均可在目标位置获得明亮单一条带,约为150 bp。【结论】改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的RNA提取,柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总RNA的提取。
[期刊] 华北农学报  [作者] 任杰  徐秀红  张素丽  冷平  
为了提高植物不同组织提取质量和效率,降低成本,在热硼酸法的基础上探索出一种适于植物不同组织总RNA提取方法。利用该方法从植物根、茎、叶、不同成熟期果实、不同成熟期种子和不同成熟期果柄中提取的总RNA经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性。所得RNA的A260/A230大于2.3,A260/A280为1.8~2.0,并且RNA产量高,可以满足RT-PCR和Real time RT-PCR的实验需要。该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物不同组织总RNA提取方法。
[期刊] 淡水渔业  [作者] 吴旭东  侯玉霞  张文吉  
从组织提取RNA的完整性对于分子生物学研究是至关重要的。RNA提取方法有多种。采取异硫氰酸胍法从黄河鲶肌肉、血液、全鱼、肾脏、肝脏、卵巢中提取出完整RNA,结果表明,通过该方法所提取RNA质量高,效果好,可以用于进一步的分子生物学研究。
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 荣健  周韬  王平  孙吉康  彭昕  
蚬壳花椒种子中富含油脂、多糖和多酚类等成分复杂的次生代谢物质,影响其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或者总RNA降解严重。本实验采用改良CTAB法、TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳,核酸蛋白检测仪检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行比较与分析。结果表明:TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法未能从蚬壳花椒种子中提取到总RNA,改良CTAB法能提取完整性较好、纯度较高的RNA,28S及18S条带清晰整齐,D260/D280值为2.07,提取的总RN
[期刊] 西南农业学报  [作者] 叶开玉  卢美英  于萍  陈殿余  
针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明,两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S 3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260/A280均介于1.8~2.0之间,A260/A230均大于2.0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足后续分子生物学研究的要求。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 李大志  邓子牛  熊兴耀  谢丙炎  
从RNA的完整性、纯度和产量等方面比较了TRIzol,RNAplant,TRIpure等3种RNA提取试剂对番茄不同组织部位总RNA的提取效果.结果表明,RNAplant能从成熟组织中获得较高质量和产量的总RNA,用该方法提取的番茄老化组织总RNA经RT-PCR能成功进行内参检测.
[期刊] 西南农业学报  [作者] 杨文鹏  王伟  王明春  王秀影  
为了比较Ptotein Assay和2-D Quant Kit两种方法测定玉米蛋白质浓度的差异,用Plant Total Protein Extraction试剂盒提取8个玉米高赖氨酸近等基因系的苗期心叶、抽雄期旗叶,授粉后10、20、30和40 d籽粒的总蛋白质,用Ptotein Assay和2-D Quant Kit2种方法测定其浓度。结果表明:籽粒中高于叶片中的总蛋白浓度,且籽粒发育越成熟提取的总蛋白质浓度越高。两种方法测定中,在不同组织提取的总蛋白质间的变化趋势相同,但授粉后10、20、30和40 d籽粒提取的总蛋白浓度间存在极显著差异;苗期心叶提取的总蛋白浓度间存在显著差异;抽雄期旗...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 孟晓庆  侯智霞  张兰  朴蕾  
【目的】探讨榛子总RNA提取的有效方法,为今后开展榛子的分子生物学等研究奠定基础。【方法】以榛子的成龄叶片、幼嫩叶片和雄花芽为试材,采用植物RNA提取试剂盒、Trizol法、改良的CTAB法Ⅰ、改良的CTAB法Ⅱ、CTAB法和改良的SDS法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和PCR检测所提取总RNA样品的品质。【结果】除了Trizol法,其他5种方法都能提取到总RNA,但是改良的CTAB法Ⅰ更适合榛子幼嫩叶片、成龄叶片和雄花芽总RNA的提取,此方法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28SrRNA亮度约是18SrRNA的2倍,且无降解现象。经RT-PCR验证,以改良的CT...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 陆秀君  王妮妮  李天来  韩玉芬  杨洁  
【目的】对天女木兰种子进行不同浸种和催芽处理试验,探讨快速解除种子休眠的机理和促进种子萌发的技术。【方法】将天女木兰种子分别用100,200,300 mg/L GA3和清水浸种48 h,然后在室内进行低温层积((4±1)℃、150 d)和人工控制变温层积((4±1)℃5、0 d→(17±1)℃2、5 d→(4±1)℃、50 d→(17±1)℃2、5 d)催芽处理,并在层积过程中定期取样测定天女木兰种子的胚长占种子长的比例、呼吸速率、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和蛋白酶活性。【结果】用GA3浸种后进行变温层积催芽的天女木兰种子,胚发育优于相应的低温层积催芽,并随着GA3质量浓度的提高催芽效果越好...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 于秀梅  康振生  崔素萍  赵杰  
采用4种方法分别对小麦幼叶、幼茎、幼根及乳熟期籽粒的总RNA进行了提取和分析。结果表明,4种方法所提取的总RNA均能满足一般的下游操作,其中TR Izo l法提取的总RNA产量最高,用该法提取的小麦叶片总RNA产量为其他方法的2~4倍;天为时代试剂盒提取时间短,可在常温下操作;而醋酸钠/乙醇沉淀法具有提取步骤少、操作时间短、可用于大量样品提取且价格便宜等优点,适于小麦不同器官的总RNA提取;经紫外分光光度计检测,各样品总RNA的A260/A280均在1.88~2.09,表明所提取的总RNA中没有蛋白质及其他有机溶剂的污染,且A260/A230在1.89~2.41,表明盐类小分子的污染也较少,所...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 尹慧  陈莉  李晓艳  陈秋明  义鸣放  
为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 孙思  陈洁玲  舒灿伟  王军  王新荣  周而勋  
分别采用Trizol法、CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法和Omega试剂盒法从短枝木麻黄小枝中提取总RNA。结果表明:用Trizol法和异硫氰酸胍法没有提取到木麻黄总RNA;用CTAB法提取的RNA发生了降解;只有SDS法和Omega试剂盒法成功提取到木麻黄小枝RNA,但质量均没有达到试验要求。对提取效果相对较好的SDS法进行改进,主要是加入去除次生代谢物质的步骤。经检测,改进后的SDS法提取的木麻黄小枝总RNA纯度高、完整性好,能够满足RT-PCR分析等分子生物学研究的要求。
[期刊] 华北农学报  [作者] 段西飞  王静华  崔江慧  薛薇  李霄  常金华  
介绍一种高粱总RNA的提取方法。该方法以CTAB为主要提取试剂,成功地提取出了高粱叶片的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280在1.8~2.0。这些结果表明提取的总RNA质量好,完整性好,可用于cDNA文库的构建、差异表达等工作。
[期刊] 北京林业大学学报  [作者] 陆秀君  刘月洋  陈晓旭  李天来  
为了解天女木兰种子后熟期间生理生化变化,探讨解除种子休眠机理及寻找种子快速催芽技术提供参考和依据,将天女木兰种子分别用250mg/L赤霉素(GA3)溶液和清水浸种48h,然后进行室外自然低温层积、室内低温层积(5℃)和室内人工控制变温层积(5℃、20d和10~15℃、10d交替变换)催芽处理。在层积过程中定期取样测定天女木兰种子的胚长占种子长的比例、呼吸速率、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性、可溶性糖含量等指标。结果表明:采用GA3浸种变温(10~15℃和5℃)层积处理有利于种胚的生长发育;GA3浸种变温处理能提高种子内过氧化氢酶、过氧化物酶的活性,促进种子中可溶性糖含量升高,并能促使形态后熟提...
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