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[期刊] 水产学报
[作者]
魏祖运 王珊 李婉茹 王胜蓝 陈玉红 母尹楠 陈新华
自噬是维持真核细胞稳态的重要过程，在细胞分化、发育、免疫等生理过程中发挥作用。目前，人们对于自噬相关基因（autophagy related gene，ATG）在鱼类免疫应答中的功能仍知之甚少。本研究从大黄鱼中克隆得到了自噬相关基因ATG5（LcATG5），其开放阅读框（ORF）全长828个核苷酸，编码275个氨基酸的蛋白质，预测的分子量为32.3 ku，等电点为5.7。氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示，LcATG5与其他物种ATG5之间的序列一致性较高，含有1个高度保守的APG5结构域，并且与棘头梅童鱼ATG5的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果表明，LcATG5在所检测的11个组织或器官中均有表达，在血液中表达量最高，在脾脏中表达量最低；LcATG5在来源于大黄鱼头肾组织的原代粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞以及细胞系LYCK细胞中也均有表达，在原代粒细胞中表达量相对较高，而在巨噬细胞中相对较低；病毒类似物poly(I:C)刺激后，这4种免疫细胞中LcATG5的表达水平都显著上调，其在LYCK细胞中变化最为显著，刺激后12 h上调了3.93倍。过表达LcATG5的鲤上皮瘤（Epithelioma papulosum cyprinid， EPC）细胞受鲤春病毒血症病毒（Spring Viremia of Carp Virus， SVCV）感染48 h后，细胞病变效应（Cytopathic effects， CPE）明显高于对照组，细胞培养上清中SVCV的滴度为10~(13.82 )TCID_(50)/Ml，高于对照组10~(9.27 )TCID_(50)/mL，同时细胞内SVCV标志基因SVCV-G、SVCV-M和SVCV-P的表达量分别上调了13.77倍、15.72倍和11.39倍，表明LcATG5过表达促进了EPC细胞中SVCV病毒增殖，这些结果为深入研究自噬和自噬相关基因在鱼类病毒感染过程中的作用及机制奠定了基础。
关键词：
大黄鱼 ATG5 免疫细胞 病毒增殖
[期刊] 水产学报
[作者]
魏祖运 王珊 李婉茹 王胜蓝 陈玉红 母尹楠 陈新华
自噬是维持真核细胞稳态的重要过程，在细胞分化、发育、免疫等生理过程中发挥作用。目前，人们对于自噬相关基因（autophagy related gene，ATG）在鱼类免疫应答中的功能仍知之甚少。本研究从大黄鱼中克隆得到了自噬相关基因ATG5（LcATG5），其开放阅读框（ORF）全长828个核苷酸，编码275个氨基酸的蛋白质，预测的分子量为32.3 ku，等电点为5.7。氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示，LcATG5与其他物种ATG5之间的序列一致性较高，含有1个高度保守的APG5结构域，并且与棘头梅童鱼ATG5的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果表明，LcATG5在所检测的11个组织或器官中均有表达，在血液中表达量最高，在脾脏中表达量最低；LcATG5在来源于大黄鱼头肾组织的原代粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞以及细胞系LYCK细胞中也均有表达，在原代粒细胞中表达量相对较高，而在巨噬细胞中相对较低；病毒类似物poly(I:C)刺激后，这4种免疫细胞中LcATG5的表达水平都显著上调，其在LYCK细胞中变化最为显著，刺激后12 h上调了3.93倍。过表达LcATG5的鲤上皮瘤（Epithelioma papulosum cyprinid， EPC）细胞受鲤春病毒血症病毒（Spring Viremia of Carp Virus， SVCV）感染48 h后，细胞病变效应（Cytopathic effects， CPE）明显高于对照组，细胞培养上清中SVCV的滴度为10~(13.82 )TCID_(50)/Ml，高于对照组10~(9.27 )TCID_(50)/mL，同时细胞内SVCV标志基因SVCV-G、SVCV-M和SVCV-P的表达量分别上调了13.77倍、15.72倍和11.39倍，表明LcATG5过表达促进了EPC细胞中SVCV病毒增殖，这些结果为深入研究自噬和自噬相关基因在鱼类病毒感染过程中的作用及机制奠定了基础。
关键词：
大黄鱼 ATG5 免疫细胞 病毒增殖
[期刊] 水产学报
[作者]
施慧 谢建军 汪玮 王庚申 何杰 许文军
运用组织病理学、电镜观察及PCR扩增等方法对近年来网箱养殖大黄鱼暴发的"白鳃病"进行了研究,以探讨引起养殖大黄鱼"白鳃"关联病毒的致病机理。临床解剖观察显示:患"白鳃病"的鱼表现出极度的贫血症状、鳃丝苍白色、血液稀薄且血细胞数显著减少;内脏组织病理观察结果显示:鱼的肝、脾、肾脏内脏组织发生严重的病理变化,组织内红细胞发生明显的退行性变化,同时鱼体的红细胞数量显著减少;采用针对真鲷虹彩病毒(red sea bream iridoviral virus,RSIV)的引物对病鱼内脏组织核酸样本进行PCR检测,结
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
林捷敏 高滢 高超 高健
采用贝恩的市场结构分类法,对宁德地区养殖产地的市场结构类型、产业市场集中度和产业进入壁垒进行了分析,确定了宁德地区大黄鱼养殖产业的市场结构。研究结果表明:宁德农户养殖的市场集中度指标CR4约为0.87%,市场集中程度很低,处于Ⅵ原子型——不存在集中现象;20余家较大规模养殖企业的CR4约为12.55%,也为Ⅵ原子型;市场竞争性强,接近完全竞争市场;产业进入壁垒较低。得出的基本结论是:产地市场的养殖产业内部集中度较低(Ⅵ原子型),应提高产业内部的集中度;竞争性强,接近完全竞争市场,应控制过度竞争以提高环境资源的配置效率;进入壁垒弱是导致集中度低和完全竞争市场结构的主要原因。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
郭茜茜 付小哲 梁红茹 林强 刘礼辉 牛银杰 李宁求
为探究鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus, SCRV)复制增殖与谷氨酰胺还原性代谢(reductive glutamine metabolism, RGM)途径的相互作用关系,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cells, CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒拷贝数和RGM途径关键酶mRNA表达水平变化,并通过蛋白免疫印迹方法检测RGM途径关键酶蛋白表达水平变化。结果发现,当培养基缺失谷氨酰胺时SCRV拷贝数降低了99.5%,表明谷氨酰胺是SCRV增殖所必需;而SCRV感染上调CPB细胞RGM途径关键酶的表达,其中异柠檬酸脱氢酶2(isocitratedehy drogenase2,IDH2)上调倍数最大,表明SCRV感染上调了细胞RGM途径中关键酶基因的表达;同时,抑制细胞RGM途径关键酶的表达导致SCRV病毒产量显著下降,表明RGM途径有利于SCRV复制增殖;进一步敲降细胞IDH2基因表达可显著抑制SCRV N蛋白表达,而过表达细胞IDH2基因可显著促进SCRV N蛋白表达,表明IDH2在病毒增殖中具有重要作用。综上所述, SCRV感染可调控CPB细胞RGM通路以满足其自身增殖,其结果可为阐明鳜弹状病毒病致病机制和抗病毒治疗策略提供新的思路。
[期刊] 水产学报
[作者]
季艳 周旋 于永耀 刘晓丹 张驰 林强
为了研究miR-130c-5p在乌鳢水泡病毒(snakehead vesiculovirus, SHVV)感染中潜在靶基因g的靶向关系以及对病毒复制的影响，本研究以斑点叉尾鮰卵巢(channel catfish ovary, CCO)为实验材料，通过实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术测定SHVV不同感染时间和感染剂量条件下，病毒基因水平和蛋白水平以及miR-130c-5p变化情况。此外，将SHVV的g基因上miR-130c-5p对应的靶序列克隆到质粒pmirGLO，构建质粒pmirGLO-G用于双荧光素酶报告实验进行靶基因验证。结果显示，随着SHVV感染时间及剂量的不断增加，miR-130c-5p和g基因的表达水平都显著上调。进一步实验证明，miR-130c-5p类似物和pmirGLO-G质粒共转染可显著抑制荧光素酶活性强度，而转染miR-130c-5p抑制剂则明显上调了pmirGLO-G报告载体的荧光信号。此外，miR-130c-5p的过表达显著降低了病毒g基因的mRNA及蛋白表达，而抑制miR-130c-5p的表达则上调了g基因的mRNA及蛋白的表达水平。研究结果表明，miR-130c-5p通过靶向SHVV的g基因，引起G蛋白的降解，从而抑制SHVV的增殖。本研究结果为理解microRNA调控SHVV的致病机制提供了重要基础，为抗SHVV疫苗等药物的研发提供了理论支持。
[期刊] 水产学报
[作者]
杨西西 池洪树 郑在予 刘晓东 罗潘潘 许斌福 陈秀霞 龚晖
为建立大黄鱼肿大细胞病毒的培养方法，明确其分类地位，用肿大细胞病毒检测呈阳性的大黄鱼幼鱼病料（FD201807和SA201808）肾组织匀浆液感染鳜仔鱼细胞系（mandarin fish fry cell line-1，MFF-1）并连续传代，从病料组织匀浆液和细胞冻融液中提取病毒DNA，克隆病毒主要衣壳蛋白基因（mcp），测序后与NCBI Genebank中的虹彩病毒科肿大细胞病毒属病毒mcp以及2018—2020年所检出的15株大黄鱼肿大细胞病毒mcp进行比对分析。结果显示，病毒传至第4代才可引起MFF-1细胞病变，细胞病变的主要特征为细胞脱壁、变圆、折光度增强；感染时间越长脱壁细胞越多，同时培养液中的颗粒增加；透射电镜下可见感染细胞的细胞质散在大小为130～150 nm的六边形病毒粒子和空壳。感染细胞的病变周期随传代代次的增加而缩短，第15代次的FD201807株感染细胞80%细胞病变的时间为3 d，第15代次的SA201808株感染细胞80%细胞病变的时间为7～8 d。mcp序列比对和聚类分析发现SA201808株和FD201807株为虹彩病毒科、肿大细胞病毒属的不同病毒，SA201808株与FD201807株的mcp序列存在21个碱基差异，二者的mcp序列分别与大黄鱼虹彩病毒(Large yellow croaker iridovirus， LYCIV)LYCIV-Zhoushan（GenBank: MW139932.1）和花鲈虹彩病毒（Lateolabrax maculatus iridovirus， LMIV）（GenBank: MH577517.1）相近。15株从大黄鱼病料检出的病毒中，12株的mcp序列与SA201808株聚类；3株与FD201807聚类。本研究首次利用MFF-1细胞系分离培养了大黄鱼肿大细胞病毒，揭示了大黄鱼肿大细胞病毒存在差异，为更好地了解大黄鱼肿大细胞病毒提供了数据参考。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
郭全友 许钟 杨宪时
对养殖大黄鱼5℃冷藏过程中品质变化特征及新鲜鱼、货架期终点时细菌相进行了定性和定量分析,用Gompertz方程定量描述了冷藏大黄鱼(Pseudosciaena crocea)细菌生长情况。新鲜大黄鱼菌落总数(TVC)为(5.52±0.41)log10cfu/g,挥发性盐基氮(TVBN)为(10.65±0.41)mg/100g,细菌相比较复杂,革兰氏阴性菌占84.3%,主要包括气单胞菌属(Aeromonasspp.)7.1%,不动杆菌属(Acinetobacterspp.)15.7%,弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)10.0%,假单胞菌属(Pseudomonasspp....
[期刊] 水产学报
[作者]
冯建军 姚志刚 张子平 钟恩惠 庄道华 林鹏 郭松林 关瑞章 王艺磊
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)是一种广泛分布的单脂磷酸水解酶,是动物生物代谢过程中重要的调控酶。实验首次克隆了大黄鱼ALP基因cDNA全序列,命名为LcALP,其全长为2 345 bp,开放阅读框为1 629 bp,编码543个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现,LcALP在大黄鱼雌雄各组织中均有表达,其中在眼和头肾的表达量最高,雌性鳃和脑中LcALP表达量显著高于雄性,而在性腺和脾脏中的表达量则显著低于雄性;胚胎发育过程中,多细胞期、囊胚期和原肠期LcALP基因表达水平相对较低,在卵黄栓形成期明显提高,至孵出期达到峰值,而初孵仔鱼期则显著下调;大黄鱼肌肉细胞系...
关键词：
大黄鱼 碱性磷酸酶 脂多糖 胚胎发育
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 陈萍 杜念兴
基因重组痘苗病毒在鸡胚中的增殖与表达徐文忠，陈萍，杜念兴（南京农业大学动物医学系，南京２１００９５）ＡＭＰＬＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＶＡＣＣＩＮＩＡＶＩＲＵＳＩＮＣＨＩＣＫＥＮＥＭＢＲＹＯ￥ＸｕＷｅｎｚｈ...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
王映 柯巧珍 刘家富 陈佳 JEERAWAT Thammaratsuntorn 赵金良 翁华松 韩坤煌
为研究大黄鱼（Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ ｃｒｏｃｅａ）养殖群体与野生群体的鉴别特征，比较分析了大黄鱼养殖群体和野生群体的形态性状、鳞片与矢耳石轮纹特征差异。形态性状比较结果表明，养殖群体的肥满度（Ｆａｔｎｅｓｓ）、体高（Ｂｈ）／体长（ＢＬ）、体厚（Ｂｔ）／体长（ＢＬ）和尾柄高（ｃＰｈ）／尾长（ｔＬ）比值显著大于野生群体（Ｐ＜０．０５），养殖群体在体型上出现偏短、粗现象。养殖群体与野生群体在鳞片轮纹特征上无显著差异，部分个体鳞片上观察到有年轮和副轮分布。野生群体耳石轮纹较为致密，明暗带间隔不均，耳石中心核及周围区域为深黄色，年．．．
[期刊] 海洋渔业
[作者]
周龙龙 平仙隐 李磊 沈盎绿
铜围网养殖是近年新兴的一种水产养殖模式,为了探究铜围网养殖对海洋生态环境的影响,于2016年7月-2017年5月对浙江省台州市大陈岛铜围网养殖大黄鱼(Pseudosciaena crocea)附近海域的浮游植物以及营养盐进行了周年调查。调查海域共鉴定出浮游植物2门39属80种,硅藻68种,甲藻12种,上大陈岛铜围网养殖附近海域浮游植物种类数量(51种)低于下大陈岛铜围网养殖附近海域的浮游植物种类数量(70种),浮游植物优势种18种,其中上大陈岛调查海域鉴定出浮游植物优势种14种,下大陈岛调查海域鉴定出浮游植物优势种15种;调查海域浮游植物年平均丰度为8.40×10~5个·m~(-3),下大陈岛铜围网养殖附近海域浮游植物年均丰度(1.25×10~6个·m~(-3))高于上大陈岛铜围网养殖附近海域(4.30×10~5个·m~(-3)),但两者相差不显著(P>0.05);调查海域浮游植物四季平均单纯度指数(C)、多样性指数(H’)、均匀度指数(J’)和丰富度指数(d)分别为0.41、2.05、0.56、0.75,上、下大陈岛铜围网养殖附近海域浮游植物群落四季平均单纯度指数(C)、多样性指数(H’)、均匀度指数(J’)和丰富度指数(d)分别为0.40、2.03、0.55、0.78和0.41、2.08、0.57、0.73,两者差异不明显(P>0.05)。各项浮游植物群落结构指数显示大陈岛铜围网养殖附近海域秋季和冬季水质状况最好,春季次之,夏季最差。通过对上下大陈岛铜围网养殖附近海域浮游植物群落结构分析比较,说明铜围网养殖对所在海域环境污染有加重趋势,但与传统网箱养殖相比,铜围网养殖是一种可持续、且更具有发展前景的养殖模式。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄伟强 纪炜炜 付婧 马增岭 周进
为了解三沙湾大黄鱼(Larimichthys crocea)网箱养殖衍生有机物(AOM)的沉降特征,采用原位实验方法,收集区域内使用颗粒饲料和冰鲜饵料两种典型饲喂方式下距离网箱200 m范围内AOM样品,分析其沉降量、营养物质[颗粒有机物(POM)、颗粒有机碳(POC)、颗粒态氮(PN)、总磷(TP)]沉降通量和扩散特点。研究结果表明,饲喂颗粒饲料状态下AOM沉降量显著高于投喂冰鲜饵料,两者均值分别为(563.66±119.18) g/(m~2·d)和(266.07±139.15) g/(m~2·d)。POM、POC、PN和TP沉降通量在两种饲喂方式下的差异与之相似,饲喂颗粒饲料时各参数均值分别为(27.25±2.43) g/(m~2·d)、(6.03±0.58) g/(m~2·d)、(0.66±0.06) g/(m~2·d)和(0.39±0.04) g/(m~2·d);饲喂冰鲜饵料时各参数均值分别为(13.04±1.62) g/(m~2·d),(3.57±0.45) g/(m~2·d)、(0.51±0.06) g/(m~2·d)和(0.22±0.04) g/(m~2·d)。沿近底层海流主导流向距离养殖网箱100 m的空间范围内,AOM沉降量和营养物质沉降通量均呈现自网箱处递减的变化特征,下降程度在饲喂冰鲜饵料时尤为显著。AOM中POC、PN和TP含量在饲喂冰鲜饵料时较高,在距离养殖网箱50 m范围内呈现递减趋势。综上,在三沙湾大黄鱼网箱养殖过程中,投喂颗粒饲料引发的环境污染程度高于冰鲜饵料,两种情形下的AOM沉降影响主要限于距离养殖网箱50～100 m的空间范围。三沙湾内饲喂颗粒饲料引发较高营养物质沉降通量源于较大的AOM沉降量,此现象说明养殖过程中可能存在颗粒饲料过度投喂、饵料利用效率较低等问题,围绕此类问题的针对性研究对于减缓区域内养殖活动的环境影响具有重要意义。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜平 陈溥言 何琴娟 朱琴亚
用鸭源新城疫病毒（ＮＤ）Ｄ１０株和减蛋综合征（ＥＤＳ—７６）病毒ＧＣ２株同时在同一鸭胚中复制增殖．结果表明：（１）两种病毒同时感染同一鸭胚后，鸭胚平均死亡时间（ＭＤＴ）７３．６ｈ，死亡率８８．２％（１５／１７）．胚体皮肤出血、淤血，绒毛尿囊膜水肿、增厚，尿囊液能凝集人和鸡红细胞．（２）尿囊液感染鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞，致细胞病变（ＣＰＥ），证实尿囊液中存在ＮＤＶ．用间接法Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ—７６病毒抗原，结果为阳性．（３）电镜观察经提纯浓缩后的尿囊液，可见到两种病毒粒子：ＮＤＶ形态不一，多数直径约１２０～１３０ｎｍ或更大．有囊膜；ＥＤＳ—７６病毒呈圆形，直径约７０ｎｍ，有囊膜．（４...
关键词：
新城疫病毒 减蛋综合征 鸭胚 同时接种
[期刊] 水产学报
[作者]
张萌 罗云江 姚翠鸾
为研究大黄鱼肿瘤抑制因子cylindromatosis（CYLD）在免疫反应中的作用，本实验克隆了大黄鱼CYLD的全长cDNA（命名为LcCYLD）并对其进行序列分析；采用qPCR（技术简写）的方法对大黄鱼各组织及免疫刺激后的大黄鱼肾细胞系中的LcCYLD表达变化进行检测；构建了重组表达载体pTurboGFP-CYLD及pcDNA3.1-CYLD，分别用于亚细胞定位实验及过表达实验；在HEK293T细胞系中过表达LcCYLD后采用双荧光素酶报告系统检测了NF-κB、TNF-α及IL-1β启动子活性的变化。结果显示，LcCYLD的ORF包含2 754 bp，编码917个氨基酸，推测具有保守的3个N端的CAP-GLY结构域，1个磷酸化区域和1个C端的UCH结构域，多序列比对结果显示各物种CYLD间高度保守；系统进化分析显示，LcCYLD与来源于其他硬骨鱼的CYLD聚为一支，其中与条纹鲈的CYLD关系最近；转录水平表达分析发现LcCYLD在大黄鱼各组织均有表达，其中在脑中表达量最高；LPS及poly I:C刺激能够显著诱导LcCYLD的表达；亚细胞定位实验表明LcCYLD在细胞质及细胞核中均有表达；过表达LcCYLD能够显著抑制NF-κB及促炎细胞因子TNF-α及IL-1β的转录激活。以上研究结果表明大黄鱼CYLD能够抑制NF-κB的转录激活，为深入了解LcCYLD在大黄鱼先天免疫信号转导中的作用奠定基础。
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