采用盆栽结瘤实验法对从 6省市采集的 18份土样中分离的 16 0株大豆根瘤菌进行了结瘤与共生固氮效率的比较测定 ,从中筛选出固氮效率较高的菌株ZX2 0和SMH12。通过测定 2株菌的竞争结瘤能力 ,确认其可以进入小区田间试验。

为了进一步研究发掘新的根瘤菌资源库,采用平板划线分离的方法从大豆根瘤中分离纯化根瘤菌,并且将获得的菌株进行盆栽回接试验,结果表明,分离获得的大豆根瘤菌菌株均可在大豆和苜蓿上结瘤,具有结瘤能力。根据已公布大豆根瘤菌共同结瘤基因nod A、nif H、16S r DNA保守区域设计引物,并且对nod A、nif H、16S r DNA序列进行扩增分析和系统发育分析,由此鉴定分离的根瘤菌为费式中华根瘤菌,从而在分子水平上实现了对大豆根瘤菌的快速鉴定。

以自东北地区分离的 8株大豆慢生根瘤菌为供试菌用交叉凝集反应比较了它们与目前国内外已报道的 15株大豆慢生根瘤菌标准血清型菌株之间的血清学关系。研究结果表明 :(1)菌株 93H10F5和HJ15不与供试标准血清型菌株发生交叉凝集反应 ,分别命名为O14 和O15血清型。 (2 )菌株HJ19、HJ2 8、93F42与标准血清型菌株USDA94有交叉凝集反应 ,进一步的抗原吸收试验结果表明 :HJ19和HJ2 8的抗原组成完全相同 ,命名为O3bcd血清亚型 ;USDA94仅与HJ19有交叉反应 ,命名为O3ab血清亚型 ;93F42也与HJ19有部分共同抗原 ,命名为O3de血清亚型。 (3...

为研究不同氮素水平下接种大豆根瘤菌对大豆生长和结瘤固氮的影响，以大豆品种Williams 82为试验材料，采用蛭石法种植，设置无氮、低氮和高氮3种浓度的硝酸盐处理，接种USDA110大豆根瘤菌，研究不同氮素水平对大豆结瘤及氮含量的影响。结果表明，不同施氮水平对根瘤数目、根瘤干质量和根干质量都有不同程度的影响，施加高氮营养液会抑制大豆结瘤，而无氮处理则促进了大豆结瘤；根干质量呈现相反的变化趋势，无氮处理的根干质量最小，高氮处理的根干质量最大。不同施氮水平下，大豆不同器官氮含量在接菌和不接菌间表现出不同的变化趋势；高氮处理下的氮素含量显著高于低氮、无氮处理，不同器官氮含量整体表现出叶>根>茎的现象；不同氮水平条件下，不同叶位叶绿素值(SPAD值)在接菌与不接菌间无明显差异。叶形态指标的测定结果显示，高氮处理下叶面积、叶周长、叶长和叶宽均显著高于无氮处理；无氮接菌后叶面积和叶周长显著大于无氮不接菌处理，表明接菌不仅促进了根生长，还刺激了叶片增大。由此可知，不同氮素水平下，接种根瘤菌对大豆幼苗的结瘤固氮和生长发育的变化规律不同，适当增施氮素营养、配合根瘤菌剂的使用可促进大豆生长发育及氮素利用吸收。

【目的】大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）是微生物肥料重要的功能菌种之一，可通过生物固氮为大豆生长提供氮素，实现节本增效，菌株5873作为其典型代表，已广泛应用于农业生产。筛选并鉴定其特异引物，建立大豆根瘤菌5873菌株水平的快速检测方法，对微生物肥料生产菌种鉴定、产品质量检测和功能评价至关重要。【方法】以商业化菌株大豆根瘤菌5873为供试材料，基于其全基因组序列和NCBI数据库中大豆根瘤菌种内参比菌株相关序列，以及与其高度同源（基因组ANI值大于99.95%）的大豆根瘤菌USDA 6T差异片段，通过多重序列比对，进行特异引物设计和筛选，获得特异性引物对，并通过对PCR反应条件/体系优化、特异性及灵敏度检测，建立大豆根瘤菌5873的快速检测方法。然后，采用盆栽试验，将大豆根瘤菌5873与其他根瘤菌菌株混合接种于大豆根际，应用上述方法对大豆根瘤菌5873竞争结瘤能力进行评价和方法验证。【结果】筛选获得了一组特异引物4-4和Q1(4-4-F 5′-GATAAGGCCACGGGTGAACA-3′/4-4-R 5′-CACTCGATAAGCTCCGCTGT-3′和Q1-F 5′-CCGGTCGTGACTGGAATGAT-3′/Q1-R 5′-TCGAGGCCTACAAGAACGTC-3′)，优化并建立了PCR快速检测方法，即反应体系：Premix Taq~(TM) 12.5μL，引物各1.0μL，基因组DNA 15 ng左右，加ddH2O补足至25μL；反应条件：95℃预热5 min,94℃变性45 s,61℃退火45 s,72℃延伸60 s,30个循环，再72℃延伸10 min。通过凝胶电泳检测目的条带的有无（355和218 bp），即可实现大豆根瘤菌5873的快速检测，该方法检出灵敏度为1 850 CFU/μL。此外，借助该方法可以成功地评价大豆根瘤菌5873竞争结瘤能力，与传统BOX-PCR评价结果一致。【结论】大豆根瘤菌5873快速鉴定方法的建立实现了以菌体发酵液或根瘤破碎提取液为模板，直接进行PCR扩增的鉴定操作，省去了根瘤的分离、根瘤菌分离纯化、培养、DNA提取及测序鉴定等繁琐的环节，大大减少了工作量，只需短短几个小时便可准确检测大豆根瘤菌5873，为微生物肥料中根瘤菌菌剂的产品质量检测和竞争结瘤能力评价提供了参考。

对海南、福建、广州、清新分离的根瘤菌和实验室保存的部分根瘤菌进行了解磷能力的研究,从200多株根瘤菌中筛选出40株具有解磷能力的菌株,通过测定根瘤菌在固体培养基和液体培养基中溶解无机磷和有机磷的能力,筛选出2株解磷能力较强的菌株G7-3和菌株DH001。菌株G7-3在无机磷和有机磷培养基中的解磷量分别是4.142、9.944μg.mL-1,与其它菌株有明显的差异;在无机磷液体培养基中,菌株DH001微克菌体解磷量为0.0867μg,和其它菌株有显著差异。对筛选出的菌株进行了16SrDNA测序分析,确定筛选出的菌株除H1-1-1和H2-1-2外,其它菌株均为根瘤菌。

【目的】花榈木Ormosia henryi是我国特有的珍贵用材树种，但存在种子繁殖过程中幼苗移栽存活率低，生长缓慢，结瘤率低等问题。研制高效根瘤菌剂是解决这一难题的有效途径。结合湖南土壤有效磷含量低的特点，筛选同时具有固氮作用和解磷能力的花榈木根瘤菌，可增加根瘤菌的应用功能和范围，为开发兼具固氮、解磷作用的多功能高效根瘤菌剂提供优良菌株。【方法】采用Vincent JM分离方法，从花榈木根系中分离根瘤菌；利用透明圈法及钼锑抗比色方法测定根瘤菌的解磷能力；通过回接试验研究接种根瘤菌对花榈木幼苗生长的影响。【结果】从花榈木根系中分离到根瘤菌20株，具有解无机磷能力的菌株8株，具有解有机磷能力的菌株14株，菌株XT202016解无机磷和有机磷的透明圈直径均最大，无机磷溶磷量和有机磷溶磷量最高，分别为31.1±0.3、71.2±0.6 mg·L~(-1)。回接解磷根瘤菌后花榈木结瘤数量为8～39个之间，固氮酶活为0.04±0.02～2.54±0.06μmol·g~(-1)·h~(-1)之间。与对照相比，接种了解磷根瘤菌的花榈木幼苗株高、地径、植株干质量、叶绿素含量和氮含量分别增加了2.5%～92.5%、1.7%～22.5%、14.3%～35.0%、4.7%～40%、9.5%～53.3%。接种菌株XT202016的花榈木幼苗结瘤数量、固氮酶活、株高、地径、植株干质量和氮含量均最高。【结论】解磷根瘤菌XT202016具有较强的解磷能力，同时可明显提高花榈木苗木结瘤率、促进幼苗生长，具有进一步制作高效根瘤菌剂的潜力。

目的研究光合和氮素互作对大豆生长和光合作用的影响。方法以大豆黑农37为供试材料,采用接种根瘤菌和遮光相结合的手段,测定了接根瘤菌大豆在非遮光、遮光和复光条件下的生长及光合指标。结果非遮光条件下,接种根瘤菌显著提高了大豆的生物量、叶绿素含量和光合能力;遮光条件下,根瘤菌发挥不出其优越性,受气孔导度和非气孔因素的影响,接菌大豆的光合速率比不接菌的对照低;恢复光照后,接种根瘤菌大豆的光合作用恢复程度也不如不接菌对照。结论大豆与根瘤菌的共生固氮需要在合适光照条件下才能发挥其促进生长和促进光合作用的正效应。

从湖北省洪湖市土壤中分离纯化了９２株快生型大豆根瘤菌。用来自８个取样地点的１２个快生型典型菌株和１个慢生型菌株的抗血清检测了该快生型大豆根瘤菌群体的抗原构成。其中６５株菌归入１５个血清型，２０．７％属于ＵＳＤＡ２０５型，１５．２％为Ａｄ３０１（１）型。有２７株不与已知抗血清反应，为未知的血清型。对供试菌株质粒进行的快速检测结果表明，各菌株均含有２～６个质粒，其中最大的质粒在５００Ｍｄ左右。含４个质粒的菌株最多，含５～６个质粒的菌株较少。根据质粒图谱分析，洪湖快生型大豆根瘤菌可分为１１个质粒型．菌株的质粒型与血清型之间无明显相关性。

利用大肠杆菌S17-1与根瘤菌进行两亲本接合转移,将苜蓿中华根瘤菌Sm1021中的ACC脱氨酶基因导入大豆快生根瘤菌HH103,在苜蓿中华根瘤菌Sm1021中过表达ACC脱氨酶基因,探讨ACC脱氨酶对根瘤菌共生固氮及竞争结瘤的影响。结果显示:接种过表达ACC脱氨酶的重组根瘤菌Sm1021,宿主植物地上部分鲜质量与结瘤数量有所增加;接种外源导入ACC脱氨酶的重组根瘤菌HH103,能够增加结瘤数,提高植物地上部分干质量且竞争结瘤能力增强。但是,接种2种重组根瘤菌后,宿主植物的根瘤鲜质量和根瘤固氮酶酶活性无明显变化。

为探索丛枝菌根真菌（abuscular mycorrhiza fungi, AMF）和大豆根瘤菌单双接种效果及其与不同品系大豆的匹配性，采用蛭石混土作为基质进行在光照培养室（26℃，16 h光照/8 h暗期，相对湿度75%）进行盆栽试验，探究根瘤菌与AMF单接种和双接种对我国大部分区域种植的10种不同品系大豆生长的影响。结果显示，根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA110和菌根真菌Rhizophagus irregularis均能侵染10种品系大豆植株，形成共生结构。单接种根瘤菌和菌根真菌均能显著提高大豆地上部鲜质量，其中单接种根瘤菌能使品系大豆119、851、921植株地上部鲜质量增加102%～429%，单接种菌根真菌也能使大部分品系大豆地上部鲜质量增加39%～255%。根瘤菌和菌根真菌双接种条件下，菌根真菌的侵染共生表现出共生定殖延迟的现象；菌根真菌存在时，品系大豆985、851、115根系的单个根瘤体积增大，固氮酶活性增强。因此，相同接种方式对不同品系大豆影响不同，相同品系大豆经过不同接种方式处理，长势存在差异；985、115品系大豆采用双接种方式最佳，167、509、921、187品系大豆采用单接种根瘤菌方式效果最佳，119、909、045则可采用单接种根瘤菌或菌根真菌来提升产量。

【目的】胶质类芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)和慢生大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)作为微生物肥料的生产菌种,凭借其良好的解钾溶磷促生效果及共生固氮功能,广泛应用于农业生产,目前对其单一菌种促生或固氮效果及机理已有较多报道。本研究旨在开展胶质类芽孢杆菌与慢生大豆根瘤菌复合接种研究,评价其接种效果,并对作用机理初探,为开发功能复合型微生物菌剂,丰富微生物肥料产品提供技术支持。【方法】田间小区试验在山东省泰安市农业科学院邱家店科研基地进行。设T1(空白对照),T2(胶质类芽孢杆菌3016单接种),T3(慢生大豆根瘤菌5136单接种),...

通过三亲本杂交,分别将紫云英根瘤菌7635R的基因文库和慢生型大豆根瘤菌22-10的基因文库引入到慢生型大豆根瘤菌22-10中,获得了大量的含有外源DNA片段的转移接合子。以结瘤试验作选择标准,从中筛选到3株具有较高固氮效率的基因工程菌株HN5-1、HN5-2和HN22-2。采用反向杂交,将接合子HN5-2中的外源重组质粒转回到大肠杆菌中,提取质粒作EcoRI酶切。表明pLAFR1质粒载体上携带有大约20 kb大小的DNA片段。实验还证明,在含有从根瘤菌转移而来的pLAFR1质粒的大肠杆菌细胞中,常伴随有辅助性质粒pRK2013的存在,用四环素和卡那霉素两种选择性抗性可淘汰其中的pRK2013...

以胶质芽孢杆菌L-k和大豆根瘤菌HH103为试验用菌株,在混合培养条件下采用摇瓶发酵法,探讨接种顺序、接种比例、初始pH值、装液量等因素对L-k芽孢生成量的影响。进一步对各单因素进行不同正交试验,得到了各因素的较好组合为:混合接种比例为1:1,初始pH值为6.5,装液量为250mL三角瓶装30mL培养液,接种顺序为先接种L-k之后4h接种HH103,这个组合下芽孢生成量达到2.43×108cfu·mL-1,比对照提高16.3%。

对分离自海南尖峰岭自然保护区木本豆科植物的2个根瘤菌菌株RIF200835和RIF200845进行了鉴定。这两个菌株的16S r DNA序列同模式菌株Rhizobium miluonense CCUAU 41251T的相似度分别为98.28%和98.51%。对这两个菌株进行全细胞脂肪酸组分和全细胞醌组分的分析结果表明,菌株RIF200835和RIF200845在组分上与模式菌株较为一致,但在含量上稍有差异。RIF200835和RIF200845这两个菌株的DNA G+C mol%含量分别为63.68%和60.56%,介于根瘤菌G+Cmol%含量范围(57%65%)之内。这两个菌株的看家基因at...