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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄磊 彭英传 韩召军
[目的]本研究旨在通过克隆大螟的乙酰胆碱酯酶基因ace,进行多态性分析,以便寻找抗药性相关的突变位点,为建立高通量药剂筛选方法和适宜的抗药性分子检测方法提供新途径。[方法]利用PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆大螟的ace全长序列,通过分子特征和构建系统发育树对其进行验证。通过序列比对,分析不同地理种群大螟ace基因的多态性,寻找经典抗药性突变位点,同时测定相应种群的三唑磷抗性,联合分析相关的抗药性突变位点。[结果]克隆获得了大螟2个ace基因的全长cDNA,分别将其命名为Sinace1和Sinace2(GenBank登录号分别为MK641586和MK641585)。它们均含有乙酰胆碱酯酶家族的保守结构特征,系统发育树分析表明它们和鳞翅目近缘种的ace基因亲缘关系最近。关键靶标基因Sinace1在4个地理种群的97条基因序列中共发现了比率不同的107种核苷酸多态性位点和21种氨基酸突变类型,但未发现经典抗药性位点的突变。生物测定结果表明:不同地理种群的大螟对三唑磷的敏感性相差较小(1～5倍),对比分析也没有发现种群之间突变比率与抗性水平一致的突变位点。[结论]大螟ace1基因尚未产生可测定的抗药性突变,但本研究率先克隆报道了大螟的2个ace基因全长序列,并揭示了大螟不同地理种群ace1基因的主要多态性位点。
关键词：
大螟 乙酰胆碱酯酶 基因克隆 多态性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
熊玉芬 王暄 梁中伟 李红梅
利用RT-PCR和RACE技术克隆了一个松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)乙酰胆碱酯酶基因Bx-ace-2,该基因cDNA全长为2010bp,有1878bp的开放阅读框(ORF),推测其编码的蛋白有625个氨基酸;Bx-ace-2基因组克隆长为2192bp,含有7个内含子。氨基酸序列比对和同源性分析显示:松材线虫Bx-ace-2编码的乙酰胆碱酯酶与已报道的秀丽小杆线虫ACE-1、ACE-3和ACE-4型乙酰胆碱酯酶的相似性为28%～31%,而与秀丽小杆线虫ACE-2及甘薯茎线虫、南方根结线虫、大豆胞囊线虫、马铃薯白线虫和胎生网尾线虫的ACE-2型乙酰胆碱酯酶的氨基...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
丁中 彭德良 高必达 何琪
利用反转录聚合酶链式反应,结合快速扩增cDNA末端(RACE)技术,克隆了甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因cDNA Dd-ace-1.该cDNA序列5′端存在反式剪接引导序列SL1,全长2196bp,包含1个1908bp的开放阅读框(GenBank登录号EF583059);在推导出的635个氨基酸残基的前体蛋白中,N端的前24个氨基酸残基为信号肽,随后的611个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的相对分子质量为70144.12.在一级结构中,形成催化活性中心的3个氨基酸残基(Ser223、Glu360和His483)、胆碱结合位点Trp(106)以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守;...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈茂华 韩召军
采用RT-PCR技术,设计简并上、下游引物,从禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi(L innaeus))和麦长管蚜(Sito-bion avenae(Fabric ius))中均克隆出2种不同乙酰胆碱酯酶的cDNA片段,分别命名为Rp.ace1、Rp.ace2和Sa.ace1、Sa.ace2。同源性分析结果表明,Rp.ace1、Sa.ace1与棉蚜(Aphis gossypii)和桃蚜(Myzus persicae)的Ⅰ型乙酰胆碱酯酶(Ace1)基因序列具有96%以上的相似性,Rp.ace2和Sa.ace2与棉蚜和桃蚜的Ⅱ型乙酰胆碱酯酶(Ace2)以及从麦二叉蚜(Schizaph...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
何永盛 陈舒迟 王弘 韩双艳 杨琼 刘细霞 董洁娴 杨武英 孙远明
【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶(BmAChE)的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmA...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
任晓霞 韩召军 王荫长
用久效磷对采集于山东聊城抗性地区的棉铃虫Helicoverpaarmigera (H櫣ｂｎｅｒ)进行抗性品系选育。经过 10代的室内选育 ,抗性倍数达 2 11 88倍 ,为选育前的 6 6 7倍。同时发现筛选后对氰戊菊酯、氯氰菊酯和灭多威的抗性分别下降了8 13,7 44和 13 36倍 ,对甲基对硫磷和辛硫磷的抗性基本保持不变。这说明久效磷与其他 5种被试药剂之间没有明显的交互抗性。还对抗、感棉铃虫体内AChE进行了研究 ,对久效磷抑制粗酶液的实验表明 ,抗性品系棉铃虫体内AChE的I50 是敏感品系的 3 18倍。酶液纯化使抗、感品系AChE的I50 分别下降 6 6 9和 3 49...
关键词：
棉铃虫 久效磷 乙酰胆碱酯酶 抗药性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘虹伶 李凤良 金剑雪 刘雅琴 刘旭
本文报道小菜蛾抗溴氰菊酯、抗杀虫双品系的正、反杂交后代的羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性,并与其亲本及敏感品系的酶活力进行比较。结果表明:后代正反杂交各代羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶之间没有显著差异;抗溴氰菊酯亲本的乙酰胆碱酯酶的活性略低于正反杂交后代的活性,而羧酸酯酶的活性略高于各正反杂交后代的活性。
关键词：
小菜蛾 抗药性 羧酸酯酶 乙酰胆碱酯酶
[期刊] 西南农业学报
[作者]
金剑雪 李凤良 程英
为明确羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶与七星瓢虫抗药性的关系,对用吡虫啉处理的七星瓢虫品系体内的羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶2种酶活性进行测定。结果表明:抗性品系体内的羧酸酯酶酶源蛋白含量稍高于敏感品系,比值为1.0858,二者间有显著差异。羧酸酯酶比活力的比值为1.0219,无显著差异;抗性七星瓢虫乙酰胆碱酯酶酶源蛋白含量与敏感品系的比值为1.2314,无显著差异,乙酰胆碱酯酶比活力的比值为0.7693,差异不显著。说明,七星瓢虫对吡虫啉产生抗性后,其羧酸酯酶的量有显著增加,羧酸酯酶可能参与七星瓢虫抗性的产生;而抗性七星瓢虫乙酰胆碱酯酶活力无明显的变化,酶源蛋白量的变化不显著,初步推断,这可能与七星瓢虫抗性...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱新平 刘家照 夏仕玲 张跃 林礼堂
本文分析和比较了对照鲮鱼和在受精卵时期显微注射了鲤鱼总ＤＮＡ的鲮鱼以及鲤鱼在不同温度下的脑乙酰胆碱酯酶活力，发现实验鲮鱼的酶活力介于对照鲮鱼和鲤鱼之间，也即外源ＤＮＡ对鲮鱼的脑乙酰胆碱酯酶活力有一定的影响。对外源ＤＮＡ的作用本文作了进一步的讨论。
[期刊] 林业科学
[作者]
刘立宏 王峰 马玲 王步勇 陈俏丽 刘晓晗 董婉莹 薛羿
【目的】为提高苦参碱的杀虫效果,对松材线虫的药剂防治靶标乙酰胆碱酯酶1基因(Bx ACE1)进行研究。【方法】松材线虫采集自广东省内马尾松,贝曼漏斗法分离,灰葡萄孢菌苔上25℃避光培养扩繁线虫。克隆Bx ACE1基因全长并进行序列分析,通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断该基因功能,研究苦参碱的杀虫效果,并应用Q-PCR技术鉴定RNAi效果。【结果】5'和3'序列拼接得到基因全长2 145 bp,命名为Bx ACE1。同源序列多序列比对表明线虫ACE的进化速度与线虫进化速度一致。蛋白质三维结构分析表明,Bx ACE1由14个α螺旋包围着13个β折叠,鉴于氢键数量越多结合越稳定,利用docking...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
解林杰 李莎 姜卫华
[目的]烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)在昆虫中枢神经系统兴奋性神经递质突触传导过程中起重要作用,也是新烟碱类杀虫剂的作用靶标。马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)是重要的检疫性马铃薯食叶害虫。根据报道已鉴定得到该虫10个nAChR亚基,本研究的目的是进一步完善该虫nAChR亚基的组成和其表达模式。[方法]依据马铃薯甲虫基因组数据,利用PCR和RACE技术对马铃薯甲虫的nAChR亚基基因进行克隆,通过相似性和系统发育树分析验证该基因的亲缘关系。利用实时定量PCR技术检测该基因在
[期刊] 林业科学研究
[作者]
夏春胜 朱正昌
以两种对称型有机磷杀虫剂倍硫磷和敌敌畏为对照，利用Ｅｌｌｍａｎ法测定了不对称有机磷杀虫剂丙硫磷（Ｐｒｏｔｈｉｏｆｏｓ）对体外乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）的抑制能力，并对褐刺蛾（Ｓｅｔｏｒａｐｏｓｔｏｒ－ｎａｔａＨａｍｐｓｏｎ）进行了３种杀虫剂的触杀毒力测定和野外药效试验。结果表明，丙硫磷为弱的ＡｃｈＥ体外抑制剂，酶抑制能力与毒力和药效间无相关性，抑制能力最差的丙硫磷对褐刺蛾幼虫毒力最强，野外药效也最好。说明丙硫磷的三元不对称结构和特殊的毒效基团与其高效低毒的特点之间可能有着密切的联系。
关键词：
丙硫磷,乙酰胆碱酯酶,毒力,药效,褐刺蛾
[期刊] 淡水渔业
[作者]
黄亮亮 吴志强 胡茂林
研究了乙酰甲胺磷对鲫24 h、48 h、72 h的半致死浓度(LC50)和不同乙酰甲胺磷浓度梯度下鲫脑乙酰胆碱酯酶(AChE)活力。结果:在18～21℃下,乙酰甲胺磷对鲫的24 h、48 h、72 h的半致死浓度(LC50)分别为59.3 mg/L、47.4 mg/L、40.3 mg/L。鲫在几组低浓度乙酰甲胺磷下暴露5 d,在同一检测时间内,脑AChE活力随浓度升高而下降;在同一浓度下检测,脑AChE活力随暴露时间的延长而升高。在乙酰甲胺磷暴露浓度为28.4 mg/L时,24 h取样检测,乙酰甲胺磷对鲫脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用极显著(P≤0.01),72 h、120 h取样检测,抑制作用减弱...
[期刊] 华北农学报
[作者]
周琳
雷公藤生物碱是雷公藤Tripterygium wilfordii Hook中的主要杀虫活性物质。为进一步阐明雷公藤总生物碱的杀虫活性及杀虫作用机理提供线索和依据,研究采用载毒叶片法测定了雷公藤总生物碱对粘虫(Mythimna separata(Walker))三龄幼虫的胃毒毒力,观察了粘虫五龄幼虫的中毒症状,并测定了其对不同中毒阶段粘虫五龄幼虫头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性和乙酰胆碱(ACh)含量的影响。结果表明,雷公藤总生物碱对粘虫三龄幼虫48,72,96,120 h的胃毒LC50分别为306.39,216.12,157.18,129.92 mg/L;试虫中毒后行动迟缓,停止取食,继而软瘫...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李飞 韩召军 吴智锋
以棉花、木槿和南瓜 3种寄主作物隔离饲养不同抗性程度的棉蚜 (171B、RR1和RR2 ) ,取食不同寄主后棉蚜羧酸酯酶的米氏常数 (Km)值无显著差异 ,而各品系之间酶的最大反应速度 (Vmax)差异显著。与取食棉花的棉蚜各品系相比 ,取食木槿的各品系乙酰胆碱酯酶对甲胺磷的敏感性均有所下降 ;取食南瓜的各品系以其抗性不同有所差异 ,抗性最高的RR2 品系的敏感性上升 ,而RR1品系的敏感性有所下降 ,171B品系的敏感性无显著性变化。在不同处理之间 ,棉蚜AChE的酶学特性 (Km 值和Vmax)也发生了不同程度的改变 ,文中对可能导致这种变化的原因进行了讨论分析。
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