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[期刊] 海洋水产研究
[作者]
季士治 王伟继 雷霁霖 孔杰
本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的EcoRI端与MseI端选择性扩增引物比和20μl选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在大菱鲆相关研究中的应用奠定了基础。
关键词：
AFLP 大菱鲆 反应体系
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
祝军 王涛 李光晨 赵玉军 张文 周爱琴
以 12个苹果砧木基因型为试材 ,建立了扩增酶切片段长度多态性 (AFL P)分析体系。对其分析过程中 DNA提取、双酶切、连接、预扩增、标记和选择性扩增的效果进行了检测。用 P32 M6 4引物构建了供试苹果砧木基因型的 AFL P指纹图谱。该指纹图谱拥有扩增条带 10 5条 ,多态性带 6 7条 (占 6 3.8% ) ,条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。讨论了 AFL P分析的影响因素
关键词：
AFLP分析 DNA指纹图谱 苹果
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李升康 熊远著 邓昌彦
以大白等 6个猪品种为试验材料 ,建立了家猪扩增酶切片段长度多态性 (AFLP)分析体系 ,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了检测。用E39M 4 8引物组合构建了供试猪的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。
关键词：
AFLP DNA指纹 猪
[期刊] 华北农学报
[作者]
王惠哲 李淑菊 霍振荣 管炜
对影响黄瓜枯萎病菌AFLP技术体系的多种因素作了探讨,得到了1种适合于黄瓜枯萎病菌AFLP分析的优化体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以100 ng(25μL体系)为宜,预扩增产物的稀释倍数以20倍为宜。采用优化好的体系,以21个不同地区的黄瓜枯萎病菌菌株为试材,引物组合E15/M65在21个菌株中共扩增出稳定清晰的带纹452条,各菌株扩增带分布较均匀,扩增带最少的为13条,最多的32条。
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙涌栋 李贞霞 张兴国 陈碧华 李新峥
以黄瓜为研究材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜黄瓜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明,适用于黄瓜dscDNA的酶切组合为TaqI和VspI,dscDNA酶切用量为300 ng,用作预扩增模板的连接产物稀释倍数为1倍,作为选择性扩增模板的预扩增反应产物的适宜稀释倍数为30倍。
关键词：
黄瓜 cDNA-AFLP 分析体系
[期刊] 西南农业学报
[作者]
东金华 樊新忠 董辉 乔西波 孙宗国 吴红超 徐凯勇
以法国伊普吕肉兔的6个品系、新西兰、加利福尼亚兔共8个种群为试材,建立了肉兔扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了确立。由72种引物组合中筛选出了15种引物组合,建立了肉兔的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨,扩增信号强,无背景干扰。
关键词：
肉兔 AFLP 分析体系 建立与优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
焦浈 孙营 李娜 秦广雍
以禾本科作物小麦为出发材料,通过优化AFLP选择性扩增步骤的4个限制性因素:Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和预扩产物稀释倍数,确立AFLP最佳反应体系为:预扩增产物稀释20倍吸取2μL做为选择性扩增模板,混合1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,0.4μmol/L选扩引物1、U Ex Taq进行选择性扩增。应用该体系分析水稻和玉米两大类禾本科作物基因组DNA样品,同样取得理想结果,扩增出清晰可辨且适量的电泳条带。该技术体系为AFLP分子标记技术在禾本科作物遗传分析中的广泛应用奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王大玮 李煜 周玮 李周岐
【目的】建立并优化适合杜仲的AFLP技术体系,为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组DNA提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析,并对适合杜仲AFLP分析的引物组合进行筛选。【结果】模板DNA的提取采用改进的CTAB法,酶切模板DNA用量500 ng,酶切时间6 h,连接反应时间6 h,预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出E-AAG+M-CAA,E-AAG+M-CAT,E-AAG+M-CTA,E-AAG+M-CTG,E-ACA+M-CAA,E-ACA+M-CTA,E-ACC+M-CTG共7对适合杜仲AFLP分析的引物组合。【结...
关键词：
杜仲 AFLP 体系优化 引物筛选
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
蒋燕锋 斯金平 黄华宏 程龙军
以厚朴Magnolia officinalis为材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的酶切模板用量、扩增条件等几个方面进行优化,建立了较为理想的厚朴AFLP反应体系。结果表明:①采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)硅珠法提取的DNA质量较好,适用于AFLP分析。②酶切的基因组DNA以400ng为宜;预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜;20.00μL选扩反应体系中Mg2+最佳浓度为2.00mmol·L-1,三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)最佳浓度为0.225mmol·L-1,Taq DNA聚合酶最佳用量为16.67nkat时,扩增带清晰且稳定,扩增效果较好。旨在为研究厚朴天然种群的遗...
关键词：
中草药 厚朴 扩增片段长度多态性 中药材
[期刊] 华北农学报
[作者]
武峻新 畅志坚
以南瓜矮生和蔓生的自交系为材料,通过对影响南瓜AFLP反应体系中的关键因素(如DNA的提取方法、酶切和连接反应时间、预扩增产物稀释倍数和银染检测方法等)进行研究,结果表明,采用加入PVP和β-巯基乙醇后的改良CTAB提取法获得的南瓜嫩叶基因组DNA质量较好;5.5 h可以满足酶切和连接反应;酶切连接产物稀释5倍,预扩增产物稀释30倍,可以满足试验要求。应用该体系,对96对引物进行筛选,在南瓜矮生和蔓生自交系间获得的引物扩增出了重复性好、清晰的南瓜矮生和蔓生的自交系多态性条带。为进一步进行南瓜矮生基因定位奠定了良好的基础。
关键词：
南瓜 矮生 AFLP体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
张桂华 杜胜利 鞠秀芝 韩毅科 马德华 王鸣
以24个不同类型的黄瓜高代自交系为试材,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行优化,建立了适合于黄瓜的AFLP反应体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以300 ng为宜,预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜,选择性扩增引物的选择性碱基的数目以“2+3”组合为宜。采用优化好的体系,引物组合P12M12在供试材料中共扩增出稳定清晰的带纹35条,其中多态性带4条。
关键词：
黄瓜 扩增片断长度多态性 DNA指纹图谱
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
郭金剑 池伟 赵鑫珠 王丽 曾燕如 张秋月
以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料,利用改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法与CTAB裂解-硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP(扩增片段长度多态性)分析体系进行了摸索。结果表明:"!改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;#"采用EcoR I/MseⅠ酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;&%适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT+M-CAT,E-ACT+M-CTG,E-ACG+M-CAT,E-ACG+M-CTG。扩增产物经60 g.L-1变性聚丙...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 连森阳 傅星源 王光瑛 李昂
以番鸭脑垂体为材料,用Trizol法提取总RNA,用Superscipt II-RT合成第一链cDNA,RNase H和DNA Polymerase合成第二链cDNA,最后用EcoRⅠ/MseⅠ分步酶切cDNA各2 h,经T4连接酶合成双链cDNA,预扩增反应后产物稀释40倍进行选择性扩增反应.经1%琼脂糖电泳及6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的结果显示,番鸭脑垂体总RNA的提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好.番鸭cDNA-AFLP反应体系的建立为番鸭就巢的分子机理研究奠定了基础.
关键词：
番鸭 cDNA-AFLP 体系建立
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
周生财 黄华宏 童再康 吴小林
采用核酸电泳缓冲液(TNE)结合十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸(DNA)可满足扩增片段长度多态性(AFLP)分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3μL缓冲液4,0.3μL牛血清白蛋白(100×BSA),50nkat EcoRΙ,25 nkat MseΙ,双蒸水加至30.0μL放置37℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应(PCR)仪上65℃15min;连接反应20.0μL酶切产物,2.5μL T4缓冲液,666.8 nkat T4连接酶,5...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
江成 林二培 黄华宏 童再康
为了挖掘光皮桦材性相关基因,本研究以光皮桦木质部为材料,通过对RNA的提取、cDNA的反转录及纯化的对比分析,以及选扩体系优化等,建立了相应的cDNA-AFLP体系。结果表明:采用CTAB和RNAiso试剂相结合的方法得到的RNA质量较好,cDNA经纯化后选扩效果明显变好。选扩体系为:4.0μL预扩产物(稀释40倍)、1.6μL的引物(10.0μmol/L)、0.2μL的dNTP(2.5 mmol/L)、0.4μL的Mg2+(25.0 mmol/L),以及0.2μL的Taq DNA聚合酶(5 U/μL)。进一步以来自不同木质化茎段的cDNA为模板,筛选出31对扩增效果较好的引物组合,同时分离出...
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