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[期刊] 中国水产科学
[作者]
张伟妮 周丽 邢婧 战文斌
用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)抽提结合超速离心的方法提取了一株大菱鲆致病性溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)SR1和其他7株弧菌的外膜蛋白。通过SDS-PAGE图谱分析比较了这8株弧菌外膜蛋白的组成,结果表明,8株弧菌的外膜蛋白电泳一般可得到6-12条条带,其分子量多集中在65-106 kD和28-48 kD,其中36 kD的蛋白带为8株弧菌所共有。用兔抗SR1全菌血清进行Western-blot印迹显示,菌株SR1的外膜蛋白条带中有6条发生了阳性反应,其分子量分别为73 kD、48 kD4、5 kD3、9 kD、36 kD和32 kD。而其他7株弧菌的外膜蛋白与兔抗...
关键词：
溶藻弧菌 外膜蛋白 抗原性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
程顺峰 邓灯 张毅 姜有声
采用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)和苯甲基磺酰氟(PMSF)2种方法提取秦皇岛弧菌HQ010712-1(Vibrio qinhuangdaora sp.nov.)外膜蛋白,结果显示Sarkosyl法提取效果较好,且所提取的主要外膜蛋白分子量为102kD、45kD、39kD、36kD、30kD、28kD、24kD、22kD;为比较该菌株与弧菌属其他细菌外膜蛋白组分及抗原性异同,以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻胶弧菌(Vibrio alginolyticus)为对照,电泳图谱显示4种弧菌外膜蛋白的分子量主要集...
关键词：
秦皇岛弧菌 外膜蛋白 抗原性
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘祥
对溶藻弧菌外膜蛋白ＯｍｐＵ进行分子克隆构建，抗原性生物信息学分析，为疫苗的开发奠定了基础。通过分子克隆获得ＯｍｐＵ蛋白的原核表达菌株，重组表达后利用切胶纯化获得ＯｍｐＵ蛋白，免疫小鼠制备抗血清，Ｗｅｓｔｅｒｎ ＢｌＯｔｔｉｎｇ检测发现ＯｍｐＵ蛋白具有很好的抗原性。采用在线软件预测ＯｍｐＵ为亲水的分泌型蛋白；存在多个酶切位点。采用ｔｍＨｍｍ ｓｅｒｖｅｒ ｖ．２．０程序预测ＯｍｐＵ无跨膜结构并定位于细胞膜外。通过ｓｉｇｎａｌ ｐ ４．１软件分析发现ＯｍｐＵ的１～２１位氨基酸为信号肽序列。ｓＯｐｍａ服务器预测ＯｍｐＵ的二级结构含无规则卷曲２７．９４％，α－螺旋为３３．２４％，β－转角为１０．２９％．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
廖紫超 张伟妮 黄小红 石妹妹
用十二烷基肌氨酸钠抽提结合超速离心的方法提取一株日本鳗鲡致病性嗜水气单胞菌322A和其他4株气单胞菌标准菌株的外膜蛋白(Omp);通过SDS-PAGE分析比较这5株气单胞菌Omp的组成.结果表明,5株气单胞菌的Omp电泳可得到5-13条条带,其分子质量主要集中在20-50 ku之间,且28 ku的Omp为5株气单胞菌所共有.用罗非鱼感染322A全菌后的恢复期血清进行蛋白质印迹试验的结果显示,322A的Omp条带中有4条发生阳性反应,其分子质量分别为28、37、43和45 ku.用兔抗322A Omp的血清进行蛋白质印迹试验的结果显示,322A的Omp条带中有5条发生阳性反应,其分子质量分别为2...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨智慧 李宁求 白俊杰 石存斌 潘厚军 叶星 劳海华 吴淑勤
从哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)克隆、测定了共19株海水鱼类致病性弧菌外膜蛋白OmpK基因序列,探讨其作为海水鱼类致病性弧菌共同抗原的分子基础。根据已知的弧菌外膜蛋白OmpK序列设计1对简并引物,利用聚合酶链式反应(PCR)方法从19株弧菌总DNA中分别扩增得到约800 bp外膜蛋白OmpK的基因片段,将其克隆到pDM18-T Vector载体筛选阳性重组子进行序列测定。结果显示,OmpK基因分别含有786 bp~849 bp的开放读码框,编码261~282个氨基酸,其核苷酸序列之间的相...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
公衍军 陈吉祥 杜萌 李爱娟 李筠 张晓华
对已分离的1株致病性鳗弧菌W1外膜蛋白图谱进行SDS-PAGE分析,并与8株不同血清型的鳗弧菌外膜蛋白进行比较。结果表明,鳗弧菌W1主要外膜蛋白分别为24 kD,38 kD,42 kD和47 kD,主要外膜蛋白图谱与鳗弧菌O1血清型标准菌株VIB1相似。抗生素药敏试验表明该菌对氨苄青霉素、强力霉素、磺胺嘧啶等14种常用药物产生了抗性,只对新生霉素、呋喃妥因、利福平、新霉素等9种药物敏感。研究不同浓度的氨苄青霉素、强力霉素、磺胺嘧啶和庆大霉素对鳗弧菌外膜蛋白表达的影响。结果表明,氨苄青霉素、强力霉素和磺胺嘧啶明显地抑制鳗弧菌42 kD的主要外膜蛋白的表达,随着抗菌素浓度的增加,该外膜蛋白的表达量...
关键词：
鳗弧菌 耐药性 外膜蛋白 表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
荣娜 康超 孙薇 简思杰 伍娜娜 刘祥
【目的】本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础。【方法】采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L_9(3~4)正交实验确定其最佳诱导表达条件,通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化OmpK蛋白;Western blot检测抗血清特异性与效价,ELISA检测OmpK蛋白抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;Western blot分析OmpK蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结果】OmpK为亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构呈桶状,在气单胞菌属间同源性较高,进化相对保守;成功构建OmpK表达菌株,并获得较高纯度的OmpK蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD_(600)=1.0,IPTG浓度为0.5 mmol/L,28℃诱导8 h; Western blot验证OmpK蛋白抗血清特异性较好,且效价达到1∶1600,ELISA显示OmpK蛋白抗血清与嗜水气单胞菌存在体外相互作用;Western blot发现OmpK蛋白可通过表达下调实现抵抗鱼血浆的杀菌作用。【结论】原核表达的OmpK蛋白,可刺激机体产生特异性抗体,与嗜水气单胞菌存在体外相互作用。此外,OmpK蛋白可有效抵抗鱼血浆对嗜水气单胞菌的杀菌作用。本研究为嗜水气单胞菌OmpK蛋白的免疫作用研究与疫苗的开发奠定基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
黄志坚 何建国
利用初步制备的溶藻弧菌外膜蛋白(outer membrane protein ofVibrio alginolyticus,Va-OMP)、溶藻弧菌蛋白分子量58kD外膜蛋白(Va-OMP58)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus,Va)灭活菌苗、溶藻弧菌脂多糖(lipopolysaccharides ofVibrio alginolyticus,Va-LPS)菌苗等进行主动保护性和被动保护性的实验比较,Va-OMP、Va-OMP58免疫组小鼠免疫后用活菌攻击,免疫保护率为62.5%~86.7%,而Va-LPS组和Va灭活菌苗组的免疫保护率为50%~62.5%,对照组的免疫保护...
关键词：
溶藻弧菌 外膜蛋白 免疫原性 免疫保护性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周丽 刘洪明 战文斌 宋微波
分别用SDS、Sarkosyl及PMSF法分离制备鳗弧菌(Vibrioanguillarum)、溶藻胶弧菌(Vibrioalginolyticus)主要外膜蛋白(MOMP),通过SDS-PAGE分析比较2种弧菌主要外膜蛋白的组成结构。结果表明,SDS、Sarkosyl和PMSF法分离提取的鳗弧菌和溶藻胶弧菌外膜蛋白中,SDS PAGE电泳图谱不同,鳗弧菌外膜蛋白分子量为27～138kD;溶藻胶弧菌外膜蛋白分子量为27～104kD,其中,45kD、30kD和27kD外膜蛋白为鳗弧菌和溶藻胶弧菌所共有。经比较,Sarkosyl法对2种弧菌外膜蛋白的提取效果较好。对3种方法提取的2种弧菌的主要外膜蛋...
关键词：
鳗弧菌 溶藻胶弧菌 外膜蛋白
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
段世宇 杨阳 令狐远凤 杨琦 周碧君
为探究沙门菌外膜蛋白基因fadL、ompN、ybfM以及sRNA RybB和伴侣蛋白Hfq缺失对该菌致病性的影响，构建了鼠伤寒沙门菌基因缺失菌株，并测定了基因缺失菌株的生长曲线，同时通过小鼠腹腔注射测定了基因缺失菌株的毒力及其在小鼠脾脏和肝脏上的定殖能力.结果显示，与鼠伤寒沙门菌亲本野生型菌株LT2相比，基因缺失菌株的生长能力变化不大.LT2对小鼠的LD_(50)为3.97×10~7 CFU;外膜蛋白基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL和ΔybfM的LD_(50)分别为1.58×10~5、6.29×10~5、9.97×10~5 CFU,毒性明显增强；sRNA敲除菌株(ΔrybB)的LD_(50)为9.97×10~7 CFU,毒性有所下降；伴侣蛋白Hfq敲除组(Δhfq)及rybB&hfq双敲除组的小鼠死亡数未超过50%,毒性明显下降.感染48 h后，与对照组(LT2)相比，所有基因缺失菌株处理组的脾脏指数均极显著性升高；ΔrybB&Δhfq、Δhfq处理组的脾脏载菌量显著降低，其余菌株处理组的载菌量与LT2差异不显著；ΔrybB、ΔrybB&Δhfq、ΔfadL、ΔybfM处理组的肝脏指数均显著下降，而Δhfq、ΔompN处理组的肝脏指数变化不显著；ΔrybB、ΔfadL处理组肝脏载菌量变化不显著，Δhfq、ΔrybB&Δhfq处理组的肝脏载菌量显著下降，而ΔompN、ΔybfM处理组的载菌量显著上升.总的来说，hfq、rybB缺失降低了鼠伤寒沙门菌的致病力，而fadL、ompN、ybfM的缺失提高了鼠伤寒沙门菌的致病力.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘芳园 胡瑞雪 余芳 侯家昊 于子润 顾泽茂
为探究外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)对米尔伊丽莎白菌致病作用的影响，以蛙源米尔伊丽莎白菌FL160902为研究对象，通过同源重组法构建OmpA缺失株△ompA，比较缺失株和野生株的生长特性、生物膜形成能力、抗血清杀伤能力、对细胞的黏附能力以及对蛙的致病性差异。结果显示：△ompA的生长能力和抗血清杀伤能力与野生株无显著差异；但与野生株相比，△ompA的生物膜形成能力增加了66%，△ompA对bEnd.3细胞的黏附能力降低了61%；黑斑蛙感染试验显示，△ompA在黑斑蛙血液、脾和脑组织中的载菌量分别为（3.15×10~8±0.09×10~8）、（2.11×10~8±0.07×10~8）和（6.61×10~8±0.16×10~8） copies/g，均显著低于野生株，且△ompA对黑斑蛙的致死率为37%，显著低于野生株的致死率（75%）。上述结果表明，ompA基因缺失不改变米尔伊丽莎白菌的抗血清杀伤能力，但增加了菌株的生物膜形成能力，减弱了菌株的黏附能力，从而降低了该菌对蛙的致病性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘祥
溶藻弧菌附着定植因子ＡＣＦＡ蛋白具有很好的免疫原性，在疫苗上有应用前景。本试验通过分子克隆获得ＡＣＦＡ蛋白的表达菌株，利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ切胶纯化与尿素浓度梯度复性获得ＡＣＦＡ蛋白，免疫小鼠制备抗血清，ＷＥＳｔＥｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎＧ检测发现ＡＣＦＡ蛋白具有很好的抗原性。利用在线软件预测ＡＣＦＡ蛋白为亲水的分泌型蛋白，存在多个酶切位点；采用ｔＭＨＭＭ ＳＥｒｖＥｒ ｖ．２．０程序预测ＡＣＦＡ无跨膜结构并定位于细胞膜外；ＳｏＰＭＡ服务器预测ＡＣＦＡ二级结构中含无规则卷曲３２．５６％，Ａ－螺旋２５．５８％，β－转角６．０５％，β－片层３５．８１％。通过ＳｉＧｎＡｌ Ｐ ４．１软件分析显示，ＡＣＦＡ．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
汪笑宇 战文斌 邢婧 绳秀珍
分别用热酸抽提法、碱抽提法和胃蛋白酶消化法分离豚链球菌NUF849的类M蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blotting印迹法分析比较三种方法所提类M蛋白的组成和抗原性差异。结果表明,热酸抽提法分离制备的类M蛋白得率和纯度都较其它两种方法高,蛋白的抗原性保持较好。采用热酸抽提法提取5株豚链球菌NUF633、NUF693、NUF701、NUF812、NUF849和2株停乳链球菌SD和L2的类M蛋白,其SDS-PAGE图谱明显不同,种间差异明显,豚链球菌主要类M蛋白的分子量分别为60、48、37、30、27、24和15ku,停乳链球菌主要类M蛋白的分子量分别为68、48、42、37、2...
关键词：
豚链球菌 停乳链球菌 类M蛋白 抗原性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
程顺峰 战文斌 绳秀珍
病鱼为威海水产养殖场感染淋巴囊肿病的牙鲆(Paralichthys olivaceus),收集病鱼的囊肿组织,匀浆破碎,采用差速离心和蔗糖密度梯度离心方法,分离纯化淋巴囊肿病毒粒子。负染后,电镜观察证实获得的病毒纯度高,杂质极少,病毒粒子呈近似于圆形的多角形,结构完整。纯化的淋巴囊肿病毒粒子经SDS-PAGE,硝酸银染色后,电泳图谱清晰显示病毒结构蛋白带共有22条,且分子量主要集中在123~26 kD。应用Western blotting法分析病毒结构蛋白的抗原性,结果显示,分子量分别为123.55 kD、65.292 kD和54.438 kD的3条蛋白带发生了免疫反应,其中分子量为65.29...
关键词：
淋巴囊肿病毒 结构蛋白 抗原性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈春琳 刘祥 俱雄
【目的】构建溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核表达载体,优化OmpK蛋白的诱导表达条件,制备OmpK蛋白小鼠多克隆抗体。【方法】通过PCR扩增获得ompK基因,连接pET-32a质粒构建OmpK-pET32a载体,将其转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达。利用切胶纯化获得OmpK蛋白后,免疫小鼠制备OmpK蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价,Western-Blotting法检测抗血清特异性。通过正交试验,获得OmpK菌株的最佳诱导表达条件与培养条件。【结果】PCR扩增获得了长816bp的ompK基因;成功构建了OmpK-pET32a载体,其诱导表达产物分子质量为30ku,与预期结果一致。E...
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