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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
崔忠凯 王倩 刘新富 孟振 陈松林
本研究将100~300 pg含有肌肉特异表达启动子和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的重组质粒(smyd1:gfp)显微注射到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵动物极细胞中,通过细心培育,成功孵化出鱼苗约120尾。统计分析显示,显微注射后,大菱鲆胚胎存活率为4.8%。利用荧光显微镜观察大菱鲆胚胎及仔鱼,只在注射smyd1:gfp质粒的胚胎及仔鱼的肌肉中发现有绿色荧光。通过进一步PCR扩增检测,在注射的大菱鲆胚胎及仔鱼DNA中扩增出了GFP特异片段,大小约为340 bp。研究表明,本研究成功建立了大菱鲆显微注射技术,可为大菱鲆基因功能研究和遗传育种奠定基础。
关键词：
大菱鲆 受精卵 显微注射 GFP
[期刊] 中国水产科学
[作者]
丁浩 田永胜 武鹏飞 刘洋 陈松林
在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用。本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存。研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为:乙二醇(EG)、甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2丙二醇(PG)、PM21(PG∶MeOH=2∶1);对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选。实验结果显示,注射600pL(1pL=10-6mL)抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎(P<0.05),成活率为(64.04±2...
关键词：
牙鲆 胚胎 显微注射 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
沙珍霞 陈松林 刘洋 徐美瑜 叶寒青
以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。
关键词：
显微注射 细胞移植 转基因 鱼类
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史洪才 玛依拉 黄俊成 刘明军 李建华 郭志勤
研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 % (P
关键词：
显微注射 转基因小鼠 受精卵移植
[期刊] 淡水渔业
[作者]
戴贤君 邵庆均 徐旭江 刘秋伟
通过对匙吻鲟孵化率、成活率以及生长情况的统计 ,探讨水中溶氧、温度、pH值、饲养密度对匙吻鲟受精卵孵化和仔幼鱼培育的影响 ,初步得出了受精卵孵化和仔幼鱼培育的适宜条件 :温度 18～ 2 0℃、pH值为 7 0～ 8 0 ,匙吻鲟体长在 1～ 4cm时 ,适宜饲养密度为 80 0～ 10 0 0尾 /m3 ,4～ 6cm时 ,适宜密度为 4 0 0～ 5 0 0尾 /m3 。
关键词：
匙吻鲟 孵化 培育
[期刊] 水产学报
[作者]
牛雪莹 任志明 吴佳颖 母昌考 王春琳
为了探究三疣梭子蟹受精卵的离体孵化技术及效果，本研究先后开展了受精卵块最适分离液种类及作用条件的筛选、分离液处理不同发育期受精卵离体孵化的差异、分离液处理对受精卵卵膜的结构影响，及分离液处理受精卵对孵化后幼体活力的影响实验。结果显示，木瓜蛋白酶是一种较为理想的分离液，在浓度为0.09 g/mL，分离时间30 min时，分离率可达到99%以上；经过分离液处理后的各期受精卵均能孵化出幼体，卵内溞状幼体期离体胚胎孵化率最高，为89.0%±3.3%，未经处理的对照组为70.0%±4.8%；卵裂期离体胚胎孵化率最低，为58.0%±3.9%，对照组为31.0%±2.3%，与对照组相比，处理组的孵化率明显提高。透射电镜结果显示，经过分离液处理的受精卵卵膜结构疏松，且厚度降低，符合处理组孵化率增加这一现象，干露、福尔马林溶液胁迫和行为学测试对不同处理组的幼体进行质量评价的结果显示，处理组和对照组幼体活力无显著差异。研究表明，实验所获得的分离液可以有效提高三疣梭子蟹受精卵的分离率和孵化率，且不影响幼体质量，可为三疣梭子蟹及其他甲壳动物受精卵的离体孵化提供参考。本研究可为三疣梭子蟹的苗种繁育提供新的技术手段，也将为基因编辑辅助育种等技术的实施奠定基础。
关键词：
三疣梭子蟹 离体孵化 孵化率 幼体活力
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵晓娥 武浩 王勇胜 刘凤军 鲁进 张涌
探讨了显微操作条件的改善对山羊卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)的影响。结果表明,将精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度从10%(10g/L)降低到8%和5%后,ICSI胚的卵裂率差异不显著,但正常卵裂率、桑葚胚率和囊胚率随PVP浓度的下降而上升;PVP浓度为5%和10%时,正常卵裂率分别为69.6%和58.5%(P<0.05),桑葚胚率分别为45.6%和35.2%(P<0.05),囊胚率分别为26.9%和16.9%(P<0.05),表明含5%PVP的精子操作液更有利于ICSI胚的发育。显微注射时将卵母细胞第一极体置于相当于时钟6点的位置与12点位置相比,ICSI胚的分裂率没有差异,而正...
[期刊] 水产学报
[作者]
卞晓东 万瑞景 金显仕 张秀梅 马骞
黄、渤海区分布的硬骨鱼类鱼卵几乎涵盖了所有鱼卵生态类型。本研究借助扫描电镜观察技术对近年来黄、渤海渔业资源监测调查期间采集的１５种不同生态类型鱼卵卵膜和受精孔区亚显微形态特征进行观察，以阐明其亚显微结构并总结提炼可用于鱼卵形态分类的特征，同时将相应鱼种产卵场环境因子引入到卵膜形态特征的认识中，以揭示其生境适应性。结果显示不同生态类型或不同鱼种卵膜形态不尽相同，浮性鱼卵和口含鱼卵卵膜较薄，沉性鱼卵和具卵膜丝鱼卵卵膜较厚；浮性鱼卵卵膜表面壁孔密度、卵膜外表面呈现的蚀刻或特殊结构以及受精孔形状类型，沉性鱼卵卵膜黏膜层表面结构、受精孔形状类型，具卵膜丝鱼卵卵膜丝数量、着生位置及受精孔形状类型，口含鱼卵．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
祝东梅 吴志新 冯雪 王艳 庞素风 周金敏 王树云 陈孝煊
对草鱼受精卵及所处水体的好氧及兼性厌氧菌的数量和组成进行了研究。结果表明:草鱼受精卵菌群的数量随受精卵的发育呈递增趋势,刚受精时每个受精卵的细菌数量为1.24×101cfu,出膜前增加到1.41×105cfu。水体中细菌的数量相对稳定,为1.05×104~3.85×104cfu/mL,只在受精卵出膜前的阶段急剧增加,为1.32×106cfu/mL。随受精卵的发育,受精卵的优势菌群先为气单胞菌属(Aeromonas)、肠杆菌科(Enterobac-teriaceae)、微球菌属(Micrococcus)和棒杆菌属(Corynebacterium),后为莫拉氏菌属(Moraxella)和不动杆菌属...
关键词：
草鱼受精卵 水体 细菌
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李宁 芮荣 周冬梅 剧世强 林鹏飞 郝元斌
用猪冷冻精子进行体外受精和单精子胞浆内注射(ICSI),并研究添加L-半胱氨酸及不同成熟培养法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明:用猪冷冻精子生产的ICSI胚胎卵裂率及囊胚发育率分别为68.3%和11.4%,均低于用冷冻精子进行体外受精(IVF)所获得的卵裂率和囊胚发育率(分别为76.9%和19.2%,P0.05);采用含0.4%BSA的NCSU-23培养液进行猪卵母细胞成熟培养,ICSI胚胎卵裂率虽明显高,但各组所获胚胎发育率均无显著差异(P...
关键词：
猪 冷冻精子 体外受精 单精子胞浆内注射
[期刊] 水产学报
[作者]
杨泽琴 李荣华 母昌考 宋微微 王春琳
为了研究管角螺受精卵在受精和早期卵裂过程中的核相变化以及保育卵的形成，实验通过ＨｏｅｃＨｓｔ ３３２５８染色、荧光显微观察方法，对管角螺受精和早期卵裂过程中核行为的细胞学变化进行了详细观察，并对其胚胎发育过程中的数量变化进行统计分析。结果显示，管角螺的成熟未受精卵呈卵圆形，平均卵径（０．３３±０．０３）ｍｍ，核相处于第一次成熟分裂中期，在水温为（２６±２）°ｃ条件下，１ Ｈ精子入卵，２～３ Ｈ受精卵先后排出第１、第２极体，完成第一次和第二次成熟分裂，６ Ｈ雌、雄性原核形成，靠近融合，第一次卵裂形成２细胞，１２～２４ Ｈ时２细胞继续分裂生成４细胞。研究表明，管角螺受精卵在成熟分裂和卵裂过程中表现．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋天增 冯静 曾宪垠 杨剑波 杨华 韩猛立 杨井泉 黄新 张红琳 陈永耀 贾斌 石国庆
本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5~0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR和Southern杂交检测转基因新生仔兔阳性率。结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测结果分别为...
关键词：
打点注射 卵巢 转基因兔
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马保华 王建华 史志诚 严兴荣 冯若鹏 冉林武 王志东
采用腹腔注射染毒法研究了Aroclor1254对公鼠精子受精能力及受精卵发育的毒性。将体重(18±3)g的性成熟期公鼠随机分为1/10LD50,1/50LD50,1/250LD50和1/1250LD504个染毒组及稀释剂对照组,染毒组公鼠于试验的第0,3,6天,按照0.01mL/g的注射量,分别注射用灭菌花生油稀释的20,4,0.8,0.16mg/mLAroclor1254溶液,稀释剂对照组注射灭菌花生油。试验开始40d后,用各组公鼠对未染毒的超排母鼠配种。结果表明,用高剂量Aroclor1254染毒公鼠对超排的正常母鼠进行配种时,会显著降低受精卵比例(P<0.01)和受精卵的卵裂率(P<0....
关键词：
受精力 胚胎发育 毒性 多氯联苯 小鼠
[期刊] 淡水渔业
[作者]
于信勇 田希文 王云山 陈海涛 苗玉琴
史氏鲟受精卵、仔鱼和幼鱼的运输试验于信勇，田希文，王云山，陈海涛，苗玉琴（黑龙江省特产鱼类研究所，佳木斯１５４００２）史氏鲟（ＡｃｉｐｅｎｓｅｒｓｃｈｒｅｎｋｉＢｒａｎｄｔ）是黑龙江特产鱼类之一，由于它的经济价值高和自然资源的下降，近年来就其人工繁殖...
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