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[期刊] 华北农学报
[作者]
王涛 王超楠 张红 温娟娟 张斌
快速高效的DNA提取是作物大规模分子育种的关键一步。旨为构建一种快速提取大白菜基因组DNA的方法,以大白菜叶片为试验材料,比较了CTAB法、二步CTAB法以及4种碱裂解法提取DNA的质量,分析了不同方法提取的DNA为模板的PCR扩增效果,还对不同方法提取的基因组DNA的保存时间和保存条件进行了比较,选择最优的方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中进行了应用。结果表明,CTAB法和3种碱裂解法提取的基因组DNA作为模板的PCR扩增产物,都可以通过8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带。其中碱裂解法Ⅲ,
关键词：
大白菜 基因组DNA 快速提取
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
汪影 张昌伟 吕善武 侯喜林
[目的]本文旨在研究大白菜环核苷酸门控离子通道基因(BrCNGC)的进化关系、结构特征、染色体定位及其表达模式。[方法]通过生物信息技术对大白菜BrCNGC进行分子进化分析、功能结构分析、染色体定位分析、保守结构域分析,并且通过荧光定量PCR分析该基因家族在脱落酸(ABA)+芜菁花叶病毒(TuMV)、水杨酸(SA)+TuMV、茉莉酸甲酯(MeJA)+TuMV和抗坏血酸(AsA)+TuMV处理下的表达差异。[结果]大白菜BrCNGC家族有26个成员,可分为4个组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),其中第Ⅳ组又可以分为2个亚组(Ⅳa和Ⅳb)。它们分布在9条染色体上,1号染色体上BrCNGC数量最多(有5个),5号染色体上只有1个BrCNGC基因,而8号染色体上没有BrCNGC基因分布。基因结构分析表明:该家族基因中共鉴定出10种motif,其中有14个BrCNGC蛋白都包含这10种motif,同组成员之间的motif组成相似。荧光定量PCR结果表明:在植物生长调节剂与TuMV相互作用下,大部分BrCNGC的表达量上调,少数BrCNGC的表达量下调。[结论]大白菜BrCNGC结构高度保守,其在大白菜抵御TuMV侵染过程中发挥一定的作用,该发现为以后进一步研究BrCNGC的功能奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李振兴 张德双 司龙亭 于拴仓 张凤兰 余阳俊 赵岫云 汪维红
介绍了一种快速、大量提取大白菜线粒体DNA的方法。以大白菜黄化苗为试验材料,通过加入一定量的DNaseⅠ和RNase A酶,充分消除核基因组DNA和RNA的污染。通过加入蛋白酶K和SDS,并经2步变温处理,即先在50℃条件下温育1 h,接着在37℃条件下温育1 h,有效地提高了mtDNA产出率。经凝胶电泳和PCR等检测,结果表明:mtDNA电泳条带清晰,OD260与OD280比值为1.8左右,纯度较高;利用细胞核看家基因Actin设计引物,扩增mtDNA,没有获得扩增产物,表明mtDNA中没有核基因组污染;利用大白菜CMS96胞质不育系基因orf222设计引物,扩增不育系和保持系mtDNA,仅...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王洁 吴晓宇 杨柳 段巧红 黄家保
【目的】通过对大白菜ACA(Ca~(2+)-ATPase)基因家族鉴定与表达分析,研究其家族基因间的共性与特性,为进一步揭示ACA家族进化关系提供数据支撑,为深入解析BraACAs在低温胁迫、盐胁迫以及自交不亲和方面的功能研究奠定基础。【方法】根据已报道的拟南芥ACA基因家族,同源比对出大白菜ACA基因家族,利用在线软件Expasy预测其分子量、理论等电点等理化性质;采用MEGA 5.0软件构建系统进化树;运用在线软件GSDS 2.0绘制基因结构图谱;TBtools对其染色体定位;McscanX软件进行拟南芥与大白菜ACA家族基因共线性分析;利用在线软件PlantCARE预测大白菜ACA基因家族启动子元件;通过在线工具Pfam和MEME进行蛋白保守结构域分析;利用qRT-PCR技术检测BraACAs在不同组织、非生物胁迫和自交异交授粉后的表达量。【结果】大白菜ACA基因家族有18个基因成员,分布在大白菜10条染色体上;根据进化树关系分成4组,分别包含3、4、4和7个成员;蛋白结构域分析显示,有13个成员包含N端自抑结构域。qRT-PCR结果表明,BraACAs主要在花与果荚中高表达;低温胁迫下,Bra002762与Bra035649表达量总体上调;盐胁迫下,Bra031701表达量显著上调;自交和异交授粉中,Bra003276和Bra024117差异性表达。对Bra002762、Bra035649、Bra031701、Bra003276和Bra024117亚细胞定位分析,发现这些基因均定位在细胞质膜上。【结论】大白菜ACA家族基因蛋白结构均含有4个ACA基因特有的高度保守结构域。该家族在大白菜不同组织中表达模式不同,5个ACA家族基因成员编码蛋白定位于细胞膜上,其中Bra002762、Bra035649、Bra031701与低温和盐胁迫响应有关;Bra003276和Bra024117与自交不亲和性相关。
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘遵春 包东娥 廖明安
通过添加Vc对传统的CTAB法进行改进,结果表明:在磨样时,1 g鲜样中添加0.10 g的Vc提取的DNA质量最高;最佳提取材料是嫩芽,其次是新梢和成熟叶片。
关键词：
金花梨 基因组DNA 提取
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
莫玉楠 张鲁刚 王国芳
【目的】以橙色叶球大白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis(Lour.)Olsson)为试材,研究类胡萝卜素的提取条件及其含量和组分的测定方法。【方法】通过单因素试验和L12(43)正交试验,筛选有机溶剂提取类胡萝卜素的最佳提取条件,利用分光光度法对类胡萝卜素的总量进行测定;建立类胡萝卜素成分的RP-HPLC测定体系,并利用RP-HPLC法对类胡萝卜素的主要成分叶黄素、番茄红素、β-胡萝卜素进行分析。【结果】橙色叶球大白菜类胡萝卜素提取的最佳工艺为:以乙醇-丙酮溶液(V(乙醇)∶V(丙酮)=1∶1)为溶剂,料(g)液(mL)比为1∶20,在60℃下浸提50m...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘必谦 周湘池 王亚军 俞小燕
利用两种市售的DNA提取试剂盒对几种紫菜进行基因组DNA提取。该方法需要的组织量少 ,需时短 ,获得的基因组DNA纯度高 ,可被AFLP内切酶 ,特别是EcoRⅠ完全酶切 ,完全满足AFLP研究的需要。不同的DNA提取方法及提取出的基因组DNA的质量对酶切效果及以后的实验结果有影响。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张德双 王国臣 张凤兰 王永健 方智远 余阳俊 赵岫云 徐家炳
提取高质量线粒体DNA(mtDNA)是研究大白菜细胞质雄性不育系不育分子特性的前提。以大白菜绿色叶片为试验材料,应用一种省时、简便、操作步骤少的方法,快速获得3组11份大白菜的mtDNA(包括保持系、Ogu CMS、Pol CMS和CMS96细胞质雄性不育系)。试验中不需要加入DNase I酶消化核DNA,提取的mtDNA质量较好;同时,采用RAPD技术,对11份大白菜mtDNA进行多态性分析,获得了与大白菜Ogu CMS和CMS96不育系相关的差异片段10条,与大白菜Ogu CMS不育系相关的差异片段3条。初步证实:大白菜CMS96和大白菜Ogu CMS不育系既有相似性又存在差异性。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
黄建安 黄意欢 罗军武 王坤波 周李华
为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组 DNA,对 4种植物 DNA提取方法进行改良后 ,以茶树春梢为材料 ,对提取效果进行了比较 ,并首次采用 CTAB区室法提取茶树基因组DNA.结果表明 ,用该 4种方法提取的 DNA,其 OD2 6 0 / OD2 80 都在 1.8以上 ,相对分子质量均大于 2 1kb,能完全被Eco R 酶切消化 ,也能获得清晰的 PCR扩增图谱 .因此 ,只要操作合理 ,4种方法均能提取出高质量的 DNA.
关键词：
脱氧核糖核酸 茶树 提取方法
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
谢一青 李志真 黄儒珠 肖祥希 王志洁
为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera嫩叶中获得高质量DNA,设计了5种先提核再提DNA的CTAB法Ⅰ,CTAB法Ⅱ,CTAB法Ⅲ,CTAB法Ⅳ及改进的SDS法,并以常规CTAB法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA进行了提取,采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280值测定、限制性内切酶处理和PCR扩增等方法对所提的DNA进行了比较分析。结果表明:实验设计的5种改进方法提取的DNA质量要比常规法的好,但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA的最佳方法;PCR扩增结果表明,不同的DNA提取方法会影响PCR带型的变化。图3表1参13
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘昔辉 宋焕忠 张革民 张荣华 方位宽 区惠平 陆建勋 梁强 唐红琴
利用珠磨器和不锈钢珠,以甘蔗及其近缘属割手密、斑茅和河八王为材料提取基因组DNA,并对得到的DNA进行电泳检测、含量测定和SSR分析。结果表明,该方法能高效快速提取基因组DNA,所提取DNA中蛋白质、多糖类物质等去除较彻底,DNA纯度较高,完整性好;SSR分析条带清晰,多态性较丰富,能扩增出特异性谱带。该方法无需液氮研磨,简单、快速、高效,经济成本低、PCR扩增效果好,适用于大规模的样品检测,可用于甘蔗育种遗传多样性分析、种质鉴定及指纹图谱构建等。
关键词：
甘蔗 DNA提取 SSR
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
高玉峰 张攀 郝晓敏 严建兵 李建生 杨小红
快速高效的DNA提取方法是玉米大规模分子育种的第一步,因此,需要发展一种快速提取玉米基因组DNA的方法,以满足我国中小型实验室的需要。本研究介绍了一种可用于玉米大规模基因组DNA提取的方法:先利用改良碱煮法提取玉米籽粒小块胚乳的DNA,进行基因型鉴定,对大群体进行筛选,再利用电钻磨样及简化的CTAB法快速提取玉米苗期叶片的DNA,进行后期的研究。这种方法使得玉米大群体的筛选和研究简单化、快速化、常规化,可广泛应用于玉米分子育种。
关键词：
玉米 大群体 胚乳 碱煮法 快速提取
[期刊] 华北农学报
[作者]
雷开荣 石春焱 李明顺 李晓辉 李新海
在玉米分子标记辅助育种工作中,需要对大量群体的个体样本进行分子标记分析,其中DNA的高效快速提取是关键的技术环节。以异硫氰酸胍为主要提取试剂,结合使用组织研磨器(Qiagen Tissuelyser),建立了一种玉米叶片基因组DNA的快速提取新方法。利用此方法提取玉米叶片基因组DNA,具有使用药品少、操作步骤简单、快速、成本低、DNA质量稳定等优点,通常情况下每人每个工作日可以提取300个DNA样品。此DNA提取方法可有效地用于玉米分子标记分析。
关键词：
玉米 DNA提取 异硫氰酸胍 分子标记
[期刊] 淡水渔业
[作者]
吴旭东 张奇 侯玉霞 张文吉
从鲶肌肉、肝、肾、血中提取基因组DNA。经过0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,DNA带型整齐。紫外分光光度仪测定基因组DNA的D260 nm/D280 nm达1.77~1.82,证明所提取基因组DNA质量较好,可用作聚合酶链式反应(PCR)的模板所需。
关键词：
鲶 基因组DNA 提取方法
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
田晔林 张党权 宋志丹 王文和 谷振军
干苔藓植物标本、多年保存苔藓植物标本等的基因组DNA提取是制约苔藓分子生物学研究的难题。本论文采用常规CTAB、高盐CTAB、改良CTAB、试剂盒、SDS法和快速提取法这6种方法来提取保存多年的苔藓标本干样的基因组DNA。结果表明,改良CTAB法是适于提取苔藓干样基因组DNA的最佳方法,提取的基因组DNA总量较多且杂质较少。进一步的ISSR分子标记实验结果表明,基于改良CTAB法所提取的苔藓标本基因组DNA能有效用于ISSR分子遗传学研究。
关键词：
苔藓 标本 DNA提取 基因组DNA
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