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[期刊] 中国水产科学
[作者]
马冬梅 邓国成 白俊杰 李胜杰 江小燕 杨小静
为了查明2009年10月广东省佛山地区养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)中暴发的传染性疾病的病原,对病鱼的肝脏、脾脏和腹隔膜进行切片电镜观察,发现细胞质中有大量病毒颗粒,切面为六角形,直径约145~150 nm,病毒为二十面体对称结构、无囊膜、似虹彩病毒的病毒粒子。用除菌的病鱼组织滤液感染健康大口黑鲈,被感染鱼死亡率达90%以上。根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因序列设计特异引物,提取人工感染发病鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织的DNA进行PCR扩增,将扩增片段进行序列测定与分析,结果表明该序列与已报道的鳜(Siniperca chuatsi)传染性脾肾坏死病毒(Inf...
[期刊] 水产学报
[作者]
王国良 金珊 陈惠群
首次报道了鲈脾肿大症的发病情况。病鱼以脾脏肿大为主要症状,死亡率高达50%以上。对病鱼进行显微镜检查和细菌分离培养,未见寄生虫和病原菌。经电镜检查,在脾、肝等组织中发现大量病毒颗粒。该病毒颗粒为六边形,没有囊膜,衣壳直径180～220nm,认为该病毒属虹彩病毒(Iridoviridae)。细胞病理变化表现为感染细胞肿胀,细胞超微结构破坏,细胞质出现大面积空泡。血细胞中出现大量异形淋巴细胞,占淋巴细胞总数的50%以上。
关键词：
鲈 脾肿大症 病原 超微结构
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
喻文娟 杨先乐 唐俊 郑宗林 张宁
取材大口黑鲈肝脏组织,培养其原代细胞,比较研究了组织块法和酶消化法两种培养方法及不同的培养条件,以确定其最佳培养方法和条件,同时观察了长期培养过程中肝细胞的形态变化。结果表明:组织块方法不适于大口黑鲈肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出。而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果。胰蛋白酶浓度0.25%,消化时间20 min,分步收集肝细胞,经台盼蓝检测和血球计数板计数,平均活力>90%,每克肝重可获得3×106个分离肝细胞。在细胞活力和数量两方面达到最佳平衡。在含20%胎牛血清、10μg/mL胰岛素的M199/L15培养基中,于4%CO2,28℃培养箱中长期培养并传代。
关键词：
大口黑鲈 肝细胞 原代培养
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
林而舒
【目的】为同时检测患病大口黑鲈蛙病毒（Rana）、肿大细胞病毒（Mega）和弹状病毒（Rhab）的感染情况，建立了其三重PCR检测方法。【方法】设计了Rana、Mega和Rhab 3对特异性上、下游引物进行三重PCR检测，Rana、Mega和Rhab扩增片段长度分别为202、360、563 bp,并进行三重PCR反应体系的优化。【结果】建立的三重PCR方法对Rana、Mega和Rhab核酸检出限最低均可达5.3×10-6 μg·mL-1。对临床获得的5份大口黑鲈病料进行三重PCR检测，获得2个Rana、1个Mega和1个Rhab检测阳性结果。【结论】本研究建立的大口黑鲈重要病原三重PCR检测方法，可用于养殖大口黑鲈过程中病毒病快速鉴别诊断和分子流行病学调查。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈乃松 周洁 靳利娜 周恒永 马建忠 仇小洁
运用实时荧光定量PCR技术,研究禁食对体质量为(100±1)g的1龄大口黑鲈(Micropterus salmoides)的生长和肝脏中类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA表达丰度的影响。在为期6周的实验期间,对照组每天表观饱食投喂2次;禁食组禁食3周后恢复投喂3周。实验期间对照组鱼体质量和体长逐渐增加。6周后,对照组鱼体增重率为10.99%,体长增加率为3.07%。禁食组禁食3周期间,鱼体质量下降了5.08%、体长减少了1.79%。同时肝组织IGF-ⅠmRNA表达水平呈下降趋势,禁食结束时仅为对照组的29.93%。恢复投喂2周后肝组织IGF-ⅠmRNA的表达量仍显著低于对照组(P<0....
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王翔凌 杨先乐 林茂 喻文娟 张宁 张书俊
建立了反相高效液相色谱法检测大口黑鲈(Micropterus salmoides)原代肝细胞中恩诺沙星(Enrofloxacin,EF)代谢情况的方法,并通过其代谢产物环丙沙星(Ciprofloxacin,CF)来间接反映恩诺沙星N-脱乙基酶的活性。采用二氯甲烷提取细胞中的药物,正己烷去脂,反相高效液相色谱法测定其中的药物浓度。经测得该方法样品回收率均大于80.28%,日间变异系数小于5.54%。通过EF与大口黑鲈肝细胞进行孵育,发现EF在细胞中的消除方程为C=50e-0.0008t,消除半衰期(T1/2)为86.63 h,消除速率常数(K)为8×10-4/h。对孵育过程中的酶活研究发现最佳孵...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
徐祥泰 陈乃松 刘子科 苟仕潘 尹佳
为了评估饲料中不同淀粉源及水平对大口黑鲈肝脏组织学的影响，采用４种淀粉（蜡质玉米淀粉、高直链玉米淀粉、小麦淀粉和木薯淀粉）各按两水平（５％和１０％）配制成８种等氮和等能的饲料，投喂初始体质量为（２３．４５±０．０８）ｇ的大口黑鲈，经４５ ｄ的饲养后，采集肝脏样本进行肝脏组织的生化测定和切片观察。结果显示，摄食全部５％淀粉饲料和１０％高直链玉米淀粉饲料的实验鱼的肝脏颜色呈正常的鲜红色；而摄食其他１０％淀粉饲料的实验鱼肝脏均显现出发白现象，同时，肝细胞体积、肝体指数和肝糖原含量均显著高于５％淀粉饲料组和１０％高直链玉米淀粉饲料组，肝细胞的细胞核移至细胞边位，出现空泡化现象。在５％和１０％的淀粉水平．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
何晟毓 魏文燕 刘韬 杨倩 谢恒 何琦瑶 汪开毓
2018年4月四川邛崃地区某养殖场大口黑鲈感染致死性结节病,死亡率高达80%。为明确病因,通过常规微生物分离、鉴定,从患病鱼皮肤溃疡灶、鱼鳔腔积液和肝脏组织中分离到同一株优势菌,命名为HSY-NS02。经菌体形态观察、革兰氏染色和抗酸染色镜检、生理生化实验、16S rDNA序列扩增及系统发育分析和特异性PCR扩增,确定该菌为诺卡氏菌。进一步对健康大口黑鲈进行分离菌的人工感染实验以确定其致病性,结果显示,人工感染鱼出现与自然发病相似症状,且从人工感染鱼体中再次分离到相同菌。组织病理学观察显示,皮肤溃疡灶、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和鳃发生不同程度的慢性炎性肉芽肿病变,其中脾脏病变最为严重。对菌株HSY-NS02进行药物敏感性实验,结果显示,该菌对庆大霉素、新霉素和制霉菌素3种药物敏感,对其他18种药物耐受,呈多重耐药性。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
冯兴浪 丁戈野 张秋实 侯金亮 刘智明 陈中元 向建国 肖调义 李军华
从湖南省醴陵市某大口黑鲈工厂化养殖场患烂身病大口黑鲈体表溃疡处分离得到1株病原菌MS315509，经形态学与分子生物学鉴定，该分离菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。人工感染结果显示，MS315509对大口黑鲈鱼苗的半数致死剂量为5.47×10~(7 )cfu/mL；MS315509携带细胞兴奋性肠毒素基因(alt)、细胞毒性肠毒素基因(act)和黏附素基因(aha1) 3种毒力基因。采用12种抗生素与12种中草药对菌株MS315509进行药物敏感性试验，结果表明MS315509对庆大霉素和头孢拉定等抗生素和石榴皮、苏木和五倍子等中草药高度敏感，对四环素、头孢唑啉、卡那霉素、苯唑西林、恩诺沙星、青霉素、强力霉素、链霉素抗生素和黄连、艾叶和熟地黄等中草药耐药。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
冯兴浪 丁戈野 张秋实 侯金亮 刘智明 陈中元 向建国 肖调义 李军华
从湖南省醴陵市某大口黑鲈工厂化养殖场患烂身病大口黑鲈体表溃疡处分离得到1株病原菌MS315509，经形态学与分子生物学鉴定，该分离菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。人工感染结果显示，MS315509对大口黑鲈鱼苗的半数致死剂量为5.47×10~(7 )cfu/mL；MS315509携带细胞兴奋性肠毒素基因(alt)、细胞毒性肠毒素基因(act)和黏附素基因(aha1) 3种毒力基因。采用12种抗生素与12种中草药对菌株MS315509进行药物敏感性试验，结果表明MS315509对庆大霉素和头孢拉定等抗生素和石榴皮、苏木和五倍子等中草药高度敏感，对四环素、头孢唑啉、卡那霉素、苯唑西林、恩诺沙星、青霉素、强力霉素、链霉素抗生素和黄连、艾叶和熟地黄等中草药耐药。
[期刊] 水产学报
[作者]
邓国成 谢骏 李胜杰 白俊杰 陈昆慈 马冬梅 江小燕 劳海华
对广东省佛山地区2008年夏季高温时期暴发的大口黑鲈溃疡病的病原进行分离,从患病鱼的病灶肌肉组织中分离到5株嗜水气单胞菌,人工感染健康大口黑鲈,均未出现溃疡暴发病的典型症状病鱼体表大片溃烂,裸露肌肉坏死并有出血,尾鳍、胸鳍和背鳍基部红肿溃烂。制备病灶肌肉组织的除菌过滤液,背部肌肉注射感染健康大口黑鲈,7 d后出现典型的溃疡病症状。取自然发病鱼和人工感染的患病鱼病灶肌肉组织制作超薄切片,经电镜观察,均发现组织中有大量病毒颗粒,病毒粒子有囊膜,呈六角形,为正20面体对称结构,大小约为145.5 nm。根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因序列设计特异引物,提取人工感染发病鱼病灶肌肉组织的DNA...
关键词：
大口黑鲈 溃疡病 病原 虹彩病毒
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张世龙 胡庆松 厉成新 李功政
大口黑鲈(Micropterus salmonides)作为一种肉食性鱼类,具有较高的经济价值,在人工养殖过程中,需要将其从进食生物饵料转化为人工配合饲料。传统适口性转化方法存在转化率低、互相吞食严重、劳动力使用量大等一系列问题。为解决这些问题,以大口黑鲈食性特点为基础,研发了一套水流式食性驯化装置。该装置通过水流送料的方式,实现均匀性喂料,使鱼苗长势均匀,缓解"大鱼吃小鱼"的种内残食现象。同时,该装置能够实现定时、定点的自动化投喂,利于幼鱼的驯化,并且降低了劳动强度。通过现场试验,与传统食性驯化方法相比,该装置提高了幼鱼生长均匀性和成活率,减少了人工投入,显著提高了经济效益。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
易婉婷 华雪铭 颜克涛 宓水潮 蓝汉冰 杭莹 丛湘明
为比较研究酵母水解物与小肽在饲料中的添加效果，在基础饲料中分别添加1%的酵母水解物与小肽，配制3种实验饲料，对大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼开展为期56 d的饲养实验，考察其生长性能、肝肠健康及抗感染能力。结果显示：1%酵母水解物与小肽对大口黑鲈幼鱼生长性能均不产生显著性影响，酵母组能显著降低中、后肠淀粉酶活性并提升前、后肠脂肪酶活性，小肽组能显著降低前、后肠淀粉酶活性并提升前、中、后肠脂肪酶与中肠蛋白酶活性(P<0.05)；且小肽组的肠道结构更加光滑清楚，刷状缘表面细胞排列紧密，杯状细胞更加清晰可见。血清生化指标中，酵母组与小肽组白蛋白含量显著低于对照组，谷丙转氨酶含量显著高于对照组；小肽组总胆固醇、甘油三酯含量最低(P<0.05)。肝脏总抗氧化能力与过氧化氢酶活性酵母组最强(P<0.05)。头肾溶菌酶活性小肽组最强(P<0.05)，感染嗜水气单胞菌后小肽组累计死亡率最低。结果表明，添加1%小肽与酵母水解物均能改善肝肠健康，提高抗感染能力，但各具优势，小肽在促进大口黑鲈肠道健康、提升鱼体免疫保护能力方面优势显著；酵母水解物在增强肝脏抗氧化能力上更为突出。因此，在大口黑鲈幼鱼养殖阶段，选择性地使用小肽或酵母水解物，将更有效地提升机体健康水平。
[期刊] 水产学报
[作者]
黄嘉 冉旭东 刘欣平 胡伟 唐仁军 郑娟 陈拥军 何远法 林仕梅
为探明胆汁酸与牛磺酸在大口黑鲈饲料中的互作效应，在基础饲料中分别添加0.03%胆汁酸(BA)、0.5%牛磺酸(Tau)和0.03%胆汁酸+0.5%的牛磺酸(BA+Tau)，配制成4种等氮(粗蛋白46%)等脂(粗脂肪10%)的实验饲料，在室内循环系统饲养大口黑鲈(15.33±0.23 g) 8周。结果显示，饲料中单独或联合添加胆汁酸、牛磺酸均显著改善大口黑鲈生长性能，降低血糖(GLU)、血清中甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量及谷丙转氨酶(ALT)与谷草转氨酶(AST)活性。同对照组相比，实验组肝脏抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性显著增加，而丙二醛(MDA)含量显著降低。同时调节肝脏糖代谢基因(gck、pklr、pygl、pck1)以及脂代谢基因(cpt1、 acaca)的mRNA表达水平，降低肝脂和肝糖原含量，明显改善肝脏的组织形态结构。此外，饲料中单独或组合添加胆汁酸、牛磺酸均显著提高肠道抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性；下调肠道促炎细胞因子(il-1β、il-8和tnf-α)的相对表达水平，而二者组合还上调抗炎细胞因子(il-10、tgf-β)的相对表达水平。同时提高肠道紧密连接蛋白基因zo-1的相对表达水平，二者配伍还显著提高基因claudin-1、occludin-1的相对表达水平。而胆汁酸组血清D-乳酸(D-lac)含量和二胺氧化酶(DAO)活性显著低于对照组。研究表明，饲料中胆汁酸、牛磺酸单独或组合添加均能提高肝肠抗氧化能力、调节糖脂代谢和增强免疫功能，改善肝脏和肠道健康，进而促进大口黑鲈生长，且二者还表现出协同效应。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
喻文娟 李聃 王翔凌 张宁 邱军强 杨先乐
体外培养大口黑鲈(Micropterus salmoides)原代肝细胞,观察其在培养过程中的形态变化,同时检测培养上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALb)含量,从而判定肝细胞的增殖和代谢能力,进而应用于CYP450的诱导研究。结果表明:培养5 d后,肝细胞连接成片,分裂增多;培养至7 d,细胞渐至单层;14 d后,细胞停止生长,出现老化迹象。培养至第3~4天的细胞上清液中LDH的渗出量呈上升趋势,在第4天时达到峰值,随着培养时间的延长,肝细胞的酶渗出量逐渐减少。ALb的分泌量在第3~5天呈上升的趋势,第4~8天维持在较高水平,在第5天达到最高,此后随着培养时间的延长,ALb的分泌量呈...
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