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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马菁华 凌宁 宋阳 黄启为 沈其荣
［目的］多黏芽孢杆菌（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ Ｐｏｌｙｍｙｘａ）ｓＱＲ－２１是１株具有高效广谱拮抗作用的生防细菌，通过分析对照与处理组西瓜根系分泌蛋白种类的不同，明确ｓＱＲ－２１菌株对西瓜根系分泌蛋白的影响。［方法］水培条件下设置对照与根部接种ｓＱＲ－２１菌株２和４ ｄ共４个处理，收集西瓜根系分泌蛋白并进行纯化，切取差异蛋白条带进行质谱检测与Ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏＧｙ（Ｇｏ）分析。［结果］与对照相比，ｓＱＲ－２１菌株处理后西瓜根系分泌蛋白的种类发生了明显变化，且随接种时间的延长蛋白多样性增加。采用液质联用仪检测到１２种差异蛋白：对照有３种，包括２种核糖体蛋白和１种酰基载体蛋白；处理组有９种．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马菁华 凌宁 宋阳 黄启为* 沈其荣
[目的]多黏芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）SQR-21 是一株具有高效广谱拮抗作用的生防细菌，通过分析对照与处理组西瓜根系分泌蛋白种类的不同，明确 SQR-21 菌株对西瓜根系分泌蛋白的影响。[方法]水培条件下设置对照与根部接种 SQR-21 菌株 2 和 4 d 共 4 个处理，收集西瓜根系分泌蛋白并进行纯化，切取差异蛋白条带进行质谱检测与 Gene Ontology (GO)分析。[结果]与对照相比，SQR-21 菌株处理后西瓜根系分泌蛋白的种类发生了明显变化，且随接种时间的延长蛋白多样性增加。采用液质联用仪检测到 12 种差异蛋白：对照有 3 种，包括 2 种核...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马菁华 凌宁 宋阳 黄启为 沈其荣
[目的]多黏芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)SQR-21是1株具有高效广谱拮抗作用的生防细菌,通过分析对照与处理组西瓜根系分泌蛋白种类的不同,明确SQR-21菌株对西瓜根系分泌蛋白的影响。[方法]水培条件下设置对照与根部接种SQR-21菌株2和4 d共4个处理,收集西瓜根系分泌蛋白并进行纯化,切取差异蛋白条带进行质谱检测与Gene Ontology(GO)分析。[结果]与对照相比,SQR-21菌株处理后西瓜根系分泌蛋白的种类发生了明显变化,且随接种时间的延长蛋白多样性增加。采用液质联用仪检测到12种差异蛋白:对照有3种,包括2种核糖体蛋白和1种酰基载体蛋白;处理组有9种...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马菁华 凌宁 宋阳 黄启为* 沈其荣
［目的］多黏芽孢杆菌（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ Ｐｏｌｙｍｙｘａ）ｓＱＲ－２１ 是一株具有高效广谱拮抗作用的生防细菌，通过分析对照与处理组西瓜根系分泌蛋白种类的不同，明确 ｓＱＲ－２１ 菌株对西瓜根系分泌蛋白的影响。［方法］水培条件下设置对照与根部接种 ｓＱＲ－２１ 菌株 ２ 和 ４ ｄ 共 ４ 个处理，收集西瓜根系分泌蛋白并进行纯化，切取差异蛋白条带进行质谱检测与 Ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏＧｙ （Ｇｏ）分析。［结果］与对照相比，ｓＱＲ－２１ 菌株处理后西瓜根系分泌蛋白的种类发生了明显变化，且随接种时间的延长蛋白多样性增加。采用液质联用仪检测到 １２ 种差异蛋白：对照有 ３ 种，包括 ２ 种核．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈怡斐 鄂垚瑶 阳芳 张楠 黄启为 沈其荣
[目的]根系分泌物介导的微生物趋化性是植物促生细菌根际定殖及功能发挥的重要前提,深入理解该过程对指导促生菌的合理施用具有重要意义。[方法]通过氨基酸分析仪鉴定西瓜根系分泌物中的主要氨基酸组分,并通过滴定分析法(drop assay)和类毛细管法比较促生多黏类芽孢杆菌SQR-21对不同氨基酸组分的趋化性,最终通过原位试验研究外源添加氨基酸对菌株SQR-21在西瓜根际定殖的影响。[结果]西瓜根系分泌物中包含天冬氨酸、苏氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗兴 冯海超 夏丽明 张瑞福 余光辉 沈其荣 张楠
[目的]本文旨在阐明根系分泌物介导的植物根际促生细菌(plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR)与宿主的互作机制。[方法]利用Illumina高通量测序技术研究促生解淀粉芽胞杆菌SQR9在体外振荡培养条件下对香蕉根系分泌物的转录响应特征,对显著差异表达基因的直系同源基因进行同源蛋白簇(COG)分析。通过Real-time PCR验证部分转录组测序结果,并研究分泌物代表性组分对部分差异基因表达的影响。[结果]香蕉根系分泌物可显著促进菌株SQR9在1/2MSgg培养基中的生长。转录组测序结果表明:根系分泌物处理6 h后菌株SQR9中共有764个基因的表达发生了显著变化,占其基因总数的18.7%,其中上调与下调基因数量分别为485和279。Real-time PCR验证获得的基因表达差异趋势与转录组测序结果一致,证明其结果可信。菌株SQR9中受根系分泌物显著调控的差异基因主要属于碳水化合物转运与代谢、氨基酸转运与代谢、能量产生与转化、转录调控、信号转导和细胞运动等;此外,与促生/生防活性物质合成相关的部分功能基因也被分泌物所诱导。根系分泌物中的葡萄糖、木糖、赤藓糖醇和硬脂酸可诱导SQR9中部分代表性差异基因的表达,但整体的转录组调控现象是分泌物中不同组分共同作用的结果。[结论]香蕉根系分泌物可促进菌株SQR9的生长代谢、信号响应、根际趋化和活性物质合成,这些都有利于SQR9在香蕉根际的存活定殖和促生/生防功能发挥,有助于其与香蕉合作关系的建立。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
陆海 吴薇 曾庆银 李义 蒋湘宁 王沙生
为了研究在大肠杆菌BL2 1(DE3)中重组蛋白的表达特点 ,探讨重组蛋白在大肠杆菌中表达时可溶性蛋白与包涵体出现的特点 ,从表达载体中表达了植物ACC合成酶 .经SDS PAGE电泳与双波长扫描分析 ,确定目的蛋白随表达时间、菌液密度的增加而增加 .但是其最佳表达时间为 2 5h ,菌液密度OD6 0 0 为 0 6 ,IPTG的最佳浓度为 0 6mmol L ,此时目的蛋白含量占全菌蛋白含量之比最高 .植物ACC合成酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在 ,未能检测到可溶性蛋白的表达
关键词：
ACC合成酶 SDSPAGE 包涵体
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨柳 许国洋 牟豪 白运川 余远迪
以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板，用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列，并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析；优化合成059基因编码序列，连接载体pET42a(+)，转化Escherichiacoli BL21(DE3)；用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌，采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白，并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度；将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层，分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育，利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0h的细胞黏附GTPV的量，研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明：成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列，其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域，显示出肝素结合活性；该蛋白羧基端有2个跨膜区，不利于蛋白质的表达，但优化DNA序列构建的重组质粒菌，经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达；免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性；Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06mg/m L；荧光定量PCR检测数据显示，不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同，表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用，能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨柳 许国洋 牟豪 白运川 余远迪
以提取羊口疮痂皮中病毒的DNA为模板，用PCR扩增羊口疮病毒(ORFV)的059基因序列，并进行基因克隆、测序鉴定和生物信息学分析；优化合成059基因编码序列，连接载体pET42a(+)，转化Escherichiacoli BL21(DE3)；用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导阳性克隆菌，采用免疫印迹检测表达的F1L蛋白，并以His柱纯化蛋白、梯度法复性及Bradford法测定蛋白浓度；将BHK21细胞铺于12孔板中培养至单层，分别作F1L蛋白、山羊痘病毒(GTPV)、先蛋白后病毒、蛋白和病毒混液4种方式孵育，利用荧光定量PCR测定孵育至1.0、6.0h的细胞黏附GTPV的量，研究ORFV F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞的影响。结果表明：成功获得了ORFV重庆石柱分离株(ORFV–CQsz)的059基因编码序列，其编码的F1L蛋白包含1个结合细胞表面硫酸乙酰肝素受体的结构域，显示出肝素结合活性；该蛋白羧基端有2个跨膜区，不利于蛋白质的表达，但优化DNA序列构建的重组质粒菌，经IPTG诱导后获得对F1L蛋白的高效表达；免疫印迹显示F1L蛋白对ORFV抗体有较好的反应原性；Bradford法测定的纯化复性的F1L蛋白质量浓度为1.06mg/m L；荧光定量PCR检测数据显示，不同孵育处理下GTPV黏附细胞的拷贝数不同，表明F1L蛋白对GTPV黏附BHK21细胞呈现一定的干扰作用，能降低病毒黏附到细胞的拷贝数。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李达 李强 关西贞 张卫东 田纪春
分析接种小麦白粉菌E09后Pm21近等基因系及其亲本叶片的总蛋白质差异,从蛋白质组调控角度揭示Pm21基因抗白粉病的抗病机理。以Pm21近等基因系及其亲本百农3217为试材,显微观察接种后5 d内的叶片表面细胞与白粉菌孢子表型差异;采用非离子去污剂提取总蛋白质,运用双向电泳、质谱分析与数据库检索技术,比较Pm21近等基因系及其亲本接菌第4天后的叶片总蛋白质差异。超显微和显微观察结果表明,12 h后百农3217叶细胞表面与Pm21近等基因系相比褶皱明显;在接菌第2天后,在Pm21近等基因系白粉菌孢子生长明显慢于其亲本表面孢子,且孢子侵入个数较少,不萌发现象较多;在第4天后Pm21近等基因系被侵染...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
丁举静 何成华 刘俐君 马彦娜 张海彬
为了探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养仓鼠肾细胞(BHK-21)的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,采用细胞培养、流式细胞术、免疫细胞化学染色等方法,研究DON对细胞早期凋亡率、线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果显示:不同浓度的DON均可诱导BHK-21细胞凋亡,各浓度组的凋亡率都显著高于对照组(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王美英 王芳 韩金志 陆兆新 别小妹
［目的］本文旨在提高菌株Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ Ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｊｓａ－９的芽孢产量并研究其芽孢液对黄瓜枯萎病的生物防治作用。［方法］采用单因素试验方法筛选最适于Ｐ．Ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｊｓａ－９产芽孢的碳源、氮源和无机盐，在此基础上采用Ｔａｇｕｃｈｉ试验方法优化各组分的最佳配比；通过田间试验研究Ｐ．Ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｊｓａ－９芽孢液与其他药剂对黄瓜枯萎病的相对防效及对黄瓜幼苗生长的作用。［结果］Ｐ．Ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｊｓａ－９产芽孢各组分的最优配比为麦芽浸粉１５ ｇ·ｌ～（－１）、玉米浆１５ ｇ·ｌ～（－１）、ｃａ ｃｏ＿３５ ｇ·ｌ～（－１）、ｍｇ ｃｌ＿２·６ｈ＿２ｏ ０．５ ｇ·ｌ．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘秋晨 李娟 刘恩 顾艳丽 王岩 王效禹 刘艳 单春乔
[目的]研究表皮生长因子(EGF)对肉鸡肠道菌群的影响。[方法]将72只1日龄AA肉鸡随机分成对照组(CK)、K组、E组和EK组,每组3个重复,每个重复6只鸡。CK组肉鸡饲喂基础饲粮,K组肉鸡饲喂添加250mg/kg盐酸金霉素的饲料,E组肉鸡饲喂添加500 mg/kg EGF的饲料,EK组肉鸡饲喂添加500 mg/kg EGF和250mg/kg盐酸金霉素的饲料。饲喂期21 d。21日龄时采集肉鸡盲肠内容物样本,采用16S rDNA基因分析方法对肉鸡盲肠中的细菌群落进行评价,利用QIIME等测序分析软件对肉鸡盲肠中的菌群进行分类。[结果]1)菌种组成结果表明,无论是OTUs总数还是独有的OTUs数量,E组的菌种数量较CK组、K组高,而与EK组的数量接近。2)优势菌群分布结果表明,在门水平上,厚壁菌门在E组中含量最高,而K组与CK组中变形菌门水平相当;在种水平上,与CK组相比,E组肉鸡肠道中乳酸菌数量显著升高。3) Alpha多样性分析表明,E组中观察到的菌种数、菌种多样性指数和菌种丰富度指数高于CK组和K组,但无显著性差异(P>0.05)。4)功能预测结果表明,CK组肠道微生物在遗传信息处理方面的功能较丰富,EK组在有机体系统、代谢作用和细胞工程方面的功能较丰富,E组各类功能较为均衡,而K组除未分类功能外,主要以环境信息处理功能较为丰富。[结论]喂饲500 mg/kg的EGF有助于提高肉鸡肠道内菌群多样性,并能改善肠道菌群结构,提高以乳酸菌为代表的厚壁菌门菌群丰度,降低以大肠杆菌为代表的变形菌门菌群含量。
关键词：
肉鸡 表皮生长因子 肠道菌群 高通量测序
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