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[期刊] 水产学报
[作者]
胡澄溪 刘伟 毕燕会 周志刚
三酰甘油（TAG）合成缺陷型酿酒酵母突变株H1246常用于其他生物二酰基甘油酰基转移酶（DGAT）的基因功能鉴定。为了解外源DGAT的基因表达对酵母细胞脂质及生长的影响，实验将缺刻缘绿藻1个I型和3个II型的DGAT分别转化H1246菌株，经筛选获得tDGAT1、tDGAT2A、tDGAT2B及tDGAT2C等4株转目的基因酵母。通过显微观察、分光光度法、重量法、棒状色谱分析、气相色谱-质谱分析对酿酒酵母的形态和脂滴、细胞密度、生物量、总脂、总脂肪酸以及TAG含量进行检测。稳定生长期时的显微观察结果显示，这4个外源基因均能使H1246菌株恢复TAG的合成和贮存能力进而在细胞中出现油滴；油脂分析结果表明，tDGAT1菌株的TAG及脂肪酸含量最高，且显著高于野生型Scy62及其他3株转目的基因菌株的水平；生长性能的数据显示，4个外源基因均能使H1246菌株的细胞密度达到Scy62的水平，这可能是由于TAG的合成消耗了游离脂肪酸，以减轻其对细胞产生的伤害而致；但tDGAT1菌株的生长迟滞期明显延长，以致其生长速率最低。本研究结果表明，将缺刻缘绿藻不同类型的外源DGAT转化酿酒酵母后，使后者的生长性能及脂质含量产生不同的变化。该结果为利用基因工程改造酵母菌株以生产人类所需要的目的油脂研究奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘延琳 李华
【目的】进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌SD-2a(Oenococcus oeni SD-2a)的苹果酸-乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation,MLF)同时进行。【方法】克隆Oenococcus oeni SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因mleA,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母整合型质粒YIp5为载体,构建重组表达质粒pYILmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS59,经筛选鉴定获得酵母转化子YS59/pYILmleA。进行转化子的营养缺...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘林丽 王跃进
应用基因重组技术,将从华东葡萄白河-35-1中分离出的长1179 bp芪合酶(stilbene synthase,STS)基因的cDNA片段克隆入大肠杆菌-酵母菌穿梭型诱导表达载体pYES6/CT上,构建重组酵母真核表达质粒pYES6/CT-STS,转化酿酒酵母菌株INVSc1,用Blasticidin(bsd)筛选出阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行5个时间段菌体全蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果发现,诱导4 h后开始有目标带(48 ku)出现,诱导16 h开始大量且稳定表达。证明目的基因片段可以在酿酒酵母中表达,为后续基因功能的验证奠定了基础。
关键词：
芪合酶 酵母表达载体 载体构建 诱导表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘加爱 陈蕾 林元山 张小鹃 邹洪彬 张学文
为了以酿酒酵母S78为宿主菌异源高效表达糖化酶基因,进一步扩大糖化酶基因在工业生产上的应用。运用RT-PCR法从黑曲霉中克隆得到糖化酶基因(glaA)cDNA,去除其信号肽编码区后的序列重组到酵母表达载体pVT102U/αADH1强启动子下游,并与α因子分泌肽信号序列融合。用PEG/LiAc法将构建的重组表达载体转入酿酒酵母S78菌株,筛选出的转化菌点种到可溶性淀粉平板上培养,用碘染法鉴定重组基因的表达情况。鉴定出了典型水解圈的酵母转化子,转化子接种到YPD培养基中摇瓶培养后,取发酵上清液经SDS-PAG
关键词：
黑曲霉 糖化酶 酿酒酵母 异源表达
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵秀 朱小龙 何亚文 梁永恒
[目的]探讨酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响。[方法]通过尼罗红染色观察酵母中磷脂合成相关基因突变后脂滴的形态;用绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞自噬蛋白Atg8后,采用荧光显微镜和免疫印迹试验检测突变体细胞自噬的发生情况,并使用荧光染料FM4-64检测液泡形态;此外,检测相关突变体对吩嗪-1-羧酸(申嗪霉素)的敏感性。[结果]在营养有限条件下,酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变体中脂滴的大小或数量受到不同程度的影响,但细胞自噬在常规检测条件下正常;其中磷脂酸胞苷转移酶编码基因CDS1突变导致液泡形态异常(碎片化),而其他磷脂合成相关基因突变不影响液泡形态;回补CDS1后,c...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
金鑫 张曼 范燕茹 王佩 杨银凤
【目的】探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的调节作用,为在分子水平上揭示益生菌对防御素的调控机理提供一定的理论基础及依据。【方法】首先将新鲜的绵羊瘤胃组织用PBS和抗生素处理后进行瘤胃上皮细胞原代培养,当原代细胞数量长到细胞培养瓶的85%以上时,将细胞传于12孔板用于细胞刺激试验。同时将活化并纯化后的酿酒酵母菌25℃、180 r/min有氧培养48 h后,进行5次平行平板计数试验,根据平板计数的数据处理方法,得到浓度为5.2×108 CFU·m L-1的酿酒酵母菌液,再通过倍比稀释把所得菌液依次稀释成浓度为5.2×...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张梁 石贵阳 王正祥 章克昌
采用基因敲除技术,在工业酿酒酵母染色体DNA上的甘油代谢途径关键酶基因GD P 1中,整合入来源于里氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因bgⅡl,通过提高G 418浓度筛选得到多拷贝整合子。结果表明,整合子利用纤维二糖的能力得到提高,产甘油能力下降,外源基因表达稳定;引入外源基因后,其对酵母增殖能力没有大的影响,仅形态发生变化;在以微晶纤维素为原料,结合纤维素酶发酵时,与亲代工业酿酒酵母相比,发酵液乙醇浓度最高增加69%。
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
杨晔 蒋晶 乔桂荣 周婧 陈银 何正权 李海营 卓仁英
为了研究旱柳Salix matsudana高耐盐无性系I-32的耐盐机制,分离其耐盐相关基因,实验以筛选出的高耐盐旱柳无性系I-32为材料,盐胁迫后提取总核糖核酸(RNA),纯化mRNA,利用改良SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术合成了全长cDNA,回收500bp以上cDNA大片段克隆到大肠杆菌Escherichia coli和酵母穿梭载体pYES2.1中,建成旱柳全长cDNA文库,对随机挑取的阳性克隆进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定,插入片断平均值为1000bp左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
涂珺 朱平 程克棣
天然产物紫杉醇是一种重要的抗癌药。其天然来源的匮乏和缺少商业上可行的化学全合成促进了对紫杉醇生物来源的深入研究。紫杉醇的生物合成是一个复杂的多步过程,主要包括四环骨架的构建和加入各种羟基和酰基基团,其中羟基的加入由细胞色素P450氧化酶催化。我们从中国红豆杉愈伤组织细胞mRNA构建的cDNA文库中克隆得到几个P450 cDNA片段。其中一个长1 494 bp的cDNA片段,编码497个氨基酸,推断蛋白分子量为56470 Da,等电点为9.42。序列比较显示,这个推断蛋白包含多个细胞色素P450氧化酶的保守区,具有典型的细胞色素P450氧化酶的特征,进一步的比较发现其与已鉴定的东北红豆杉紫杉烷-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵育 李海兰 杜君 战吉宬
【目的】研究铜胁迫下,酿酒酵母胞内海藻糖的积累情况及海藻糖对酿酒酵母的保护作用,为探讨铜胁迫下酿酒酵母的防御保护机制提供理论依据。【方法】以改良模拟葡萄汁为发酵培养基,分别对菌株AWRI、BH8和Freddo进行直接铜胁迫处理(Cu2+浓度为1.00 mmol.L-1)、热激预处理(37oC,1 h)、再铜胁迫处理,同时,设定无铜培养为对照。测定各种处理下酿酒酵母的存活率、胞内海藻糖的积累和6-磷酸海藻糖合成酶(TPS1)酶活性的变化。【结果】与对照相比,1.00 mmol.L-1Cu2+胁迫处理使酵母细胞内海藻糖的含量增加,TPS1酶活性提高。热激预处理可诱导海藻糖的积累,且铜胁迫下细胞的存...
关键词：
铜胁迫 酿酒酵母 海藻糖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋洋波 马捷 李丽 张留燕 刘延琳
近年,随着基因工程技术的日益发展,酿酒酵母在分子生物学研究方面的应用越来越广泛。本文介绍了后基因组学用于酿酒酵母的方法,并概述了利用该手段对试验菌株与商业酿酒酵母进行生理功能分析、研究和改造的最新进展,展示了后基因组时代对酿酒酵母的影响及综合基因组信息、生物信息学和分子生物学技术的研究策略。最后,展望了现代生物技术手段在葡萄酒工业中的应用前景。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
段亮亮 潘秋红 王亚钦 叶冬青 段长青 燕国梁
【目的】研究葡萄汁中不饱和脂肪酸（ＵｎｓａｔＵｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，Ｕｆａｓ，包括油酸、亚油酸和α－亚麻酸）含量同时变化对葡萄酒发酵过程中酿酒酵母胞内脂肪酸成分和酿酒香气的影响，为提高葡萄酒品质提供参考。【方法】选用‘美乐’葡萄（Ｖｉｔｉｓ Ｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．）汁为培养基，试验设置对照组（不添加Ｕｆａｓ，ｃＫ）、低浓度Ｕｆａｓ添加组（ＬｆＧ）和高浓度Ｕｆａｓ添加组（ＨｆＧ），比较葡萄酒酒精发酵过程中３个处理组间酵母（ｓａｃｃＨａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅＶｉｓｉａｅ ｅｃ１１１８）生长（ｏｄ＿（６００））、细胞内脂肪酸成分以及酿酒香气成分的差异。【结果】提高Ｕｆａｓ浓度能够促进．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张大城 洪玲玲 刘碧凡 苏云 李斌 曹立红 冯泽猛 印遇龙
选取12头体质量相近的健康断奶仔猪随机分为2组，对照组(CON组)和试验组(SDGS组)分别饲喂依据NRC(2012)仔猪营养需要标准配制的等氮等能基础日粮与4%白酒糟酿酒酵母培养物添加日粮，每组6个重复，预饲7 d后试验28 d，探索日粮添加白酒糟酿酒酵母培养物对断奶仔猪生长性能、器官指数、血清生化指标及肠道形态、肠黏膜紧密连接蛋白(TJ)和细胞因子m RNA相对表达量的影响，综合评价日粮添加白酒糟酿酒酵母培养物在断奶仔猪上的饲喂效果。结果表明：SDGS组的平均日增质量显著(P0.05)变化；SDGS组的肝脏指数显著(P0.05)变化；血清生化指标(总蛋白、尿素、葡萄糖、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G)在两组间的差异均无统计学意义(P>0.05)；与CON组相比，SDGS组的肠道形态更完整、排列整齐，但空肠和回肠隐窝深度显著(P<0.05)增加，空肠绒毛高度显著(P<0.05)降低，空肠和回肠绒毛高度与隐窝深度比值均显著(P0.05)变化；SDGS组空肠黏膜TJ蛋白中闭合蛋白–3(Claudin–3)的m RNA相对表达量有降低趋势(P=0.091)，空肠黏膜TJ蛋白中闭合小环蛋白–1(ZO–1)、闭锁蛋白(occludin)与十二指肠和回肠黏膜TJ蛋白Claudin–3、occludin、ZO–1的m RNA相对表达量则均无显著(P>0.05)变化；SDGS组十二指肠和回肠黏膜细胞因子白细胞介素–6(IL–6)的m RNA相对表达量显著(P0.05)变化。总之，依照NRC(2012)仔猪营养需要标准，添加4%白酒糟酿酒酵母培养物配制的等氮等能日粮可显著提高断奶仔猪平均日增质量，显著降低肝脏指数，改善肠道的免疫功能，且不会破坏肠道屏障结构，肠黏膜结构更完整，但肠道形态却向消化吸收能力降低的方向发展。可见，白酒糟酿酒酵母培养物可作为断奶仔猪配合日粮的原料，但使用时需要注意肠道健康的保护。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张大城 洪玲玲 刘碧凡 苏云 李斌 曹立红 冯泽猛 印遇龙
选取12头体质量相近的健康断奶仔猪随机分为2组，对照组(CON组)和试验组(SDGS组)分别饲喂依据NRC(2012)仔猪营养需要标准配制的等氮等能基础日粮与4%白酒糟酿酒酵母培养物添加日粮，每组6个重复，预饲7 d后试验28 d，探索日粮添加白酒糟酿酒酵母培养物对断奶仔猪生长性能、器官指数、血清生化指标及肠道形态、肠黏膜紧密连接蛋白(TJ)和细胞因子m RNA相对表达量的影响，综合评价日粮添加白酒糟酿酒酵母培养物在断奶仔猪上的饲喂效果。结果表明：SDGS组的平均日增质量显著(P0.05)变化；SDGS组的肝脏指数显著(P0.05)变化；血清生化指标(总蛋白、尿素、葡萄糖、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G)在两组间的差异均无统计学意义(P>0.05)；与CON组相比，SDGS组的肠道形态更完整、排列整齐，但空肠和回肠隐窝深度显著(P<0.05)增加，空肠绒毛高度显著(P<0.05)降低，空肠和回肠绒毛高度与隐窝深度比值均显著(P0.05)变化；SDGS组空肠黏膜TJ蛋白中闭合蛋白–3(Claudin–3)的m RNA相对表达量有降低趋势(P=0.091)，空肠黏膜TJ蛋白中闭合小环蛋白–1(ZO–1)、闭锁蛋白(occludin)与十二指肠和回肠黏膜TJ蛋白Claudin–3、occludin、ZO–1的m RNA相对表达量则均无显著(P>0.05)变化；SDGS组十二指肠和回肠黏膜细胞因子白细胞介素–6(IL–6)的m RNA相对表达量显著(P0.05)变化。总之，依照NRC(2012)仔猪营养需要标准，添加4%白酒糟酿酒酵母培养物配制的等氮等能日粮可显著提高断奶仔猪平均日增质量，显著降低肝脏指数，改善肠道的免疫功能，且不会破坏肠道屏障结构，肠黏膜结构更完整，但肠道形态却向消化吸收能力降低的方向发展。可见，白酒糟酿酒酵母培养物可作为断奶仔猪配合日粮的原料，但使用时需要注意肠道健康的保护。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈文婷 白描 谭君 唐婉莹 杨国顺
为探索本土野生酵母在刺葡萄酒酿造生产中的应用价值,改良刺葡萄酒品质,采用顶空固相微萃取(HS–SPME)和气相色谱-质谱联用(GC–MS)技术对1株商业酿酒酵母和6株野生酿酒酵母所酿刺葡萄酒的挥发性物质进行分析,并用统计建模软件RGui构建热图,分析各菌株对刺葡萄酒香气的影响。结果表明:刺葡萄酒中的挥发性物质主要为酯类物质,其次是醇类物质;LE28、LD22与商业酵母RC212处于同一分支,其刺葡萄酒呈香物质含量趋势一致;LD1015独成一支,其香气物质总含量显著高于其他菌株的,但含有闻起来令人不愉快的气
关键词：
刺葡萄酒 本土酵母 香气 挥发性物质
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