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[期刊] 华北农学报
[作者]
王晨 王文艳 初建青 杨光 郭磊 房经贵
构建葡萄花果全长cDNA文库是开展葡萄花及果实发育的分子机理研究的重要工作基础,有助于重要相关基因的克隆、功能分析、调控及其利用。以生产上广泛栽培、性状优良且极具代表性的夏黑葡萄为试材,应用优化的CreatorSMART cDNA Construction Kit技术,构建了夏黑葡萄花和果实的全长cDNA文库。文库的滴度为1.2×106pfu/mL,库容为6.0×106pfu/mL。从文库中随机挑取30个克隆进行菌落PCR鉴定的结果显示:插入片段大小为1.0～3.0kb,重组率为99%。研究结果表明,该葡萄全长cDNA文库具备较高的质量。
关键词：
葡萄 花 果实 RNA提取 cDNA文库
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李晓颖 曹雪 杨光 王晨 沈玉英 房经贵
以果梅品种'细叶青'不同时期的花和果实为实验材料,应用Creator SMART cDNA Construction Kit构建了我国果梅第一个花和果实的cDNA文库。结果表明,该文库的库容量约为1.4×106pfumL,从扩增文库中随机挑取30个克隆进行PCR鉴定,其重组率达97%,插入片段多分布在1～3kb之间,平均大于1kb。说明本研究成功构建了果梅花和果实的cDNA文库,为进一步开展果梅开花调控和果实发育等相关基因的克隆及其表达与功能分析等研究奠定了重要基础。
关键词：
果梅 果实 花 cDNA文库 RNA提取
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
夏信明 刘金仙 林明 王育娜 何水林
以紫外线辐射的葡萄幼果为材料提取总RNA,用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建cDNA文库,初始文库含有1.5×106个独立的单克隆,扩增后滴度达到1.2×108pfu.mL-1.随机挑取噬菌斑进行PCR检测,发现重组率在92.9%以上.
关键词：
葡萄 幼果 cDNA文库 紫外线辐射
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郭荣荣 林玲 周思泓 韩佳宇 张瑛 白先进
【目的】VlTFL1A是葡萄3个TFL基因之一,该基因在葡萄花序形成过程中发挥重要作用。筛选VlTFL1A启动子上游的调控因子,为研究该基因在调控葡萄成花中的机理奠定基础。【方法】由VlTFL1A的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建葡萄酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,筛选VlTFL1A启动子上游的调控因子。【结果】筛选出大于500 bp的9个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析,作用在VlTFL1A启动子上游的调控因子分别为:信号识别受体亚基、钙调蛋白相关蛋白、转酮醇酶、木葡聚糖糖基转移酶、F-box蛋白、冠毒素不敏感基因1(COI1)、UV-B诱导蛋白、重金属相关的异戊二烯蛋白39等8个蛋白和一个未知功能的蛋白。【结论】筛选出的作用在VlTFL1A启动子上游的9个调控因子在葡萄花序形成过程中的功能尚未见报道,为进一步研究VlTFL1A基因的表达调控机制提供了候选蛋白。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈国品 白先进 文仁德 李玮 谢蜀豫 李洪艳 韩佳宇 盘丰平 陆正义 陈立 曹慕明
以６年生夏黑萄萄为试材，研究不同浓度矮壮素对夏黑葡萄果实品质的影响。结果表明，果实中矮壮素的残留浓度与施用的矮壮素浓度呈正相关性，高浓度的矮壮素能够显著减少果实的穗重、粒重、皮重、纵径、横径。低浓度（０．３３ ｍｌ／ｌ）矮壮素对于果实品质的影响不稳定，中高浓度（０．５和１．０ ｍ ｌ／ｌ）矮壮素对于果实品质的影响比较稳定。高浓度矮壮素对提高葡萄果实固酸比、降低总黄酮和单宁含量具有显著作用，同时能提高果胶含量和氨基酸尤其是必需氨基酸的含量，提高其营养价值。
关键词：
葡萄 夏黑 矮壮素 果实品质
[期刊] 林业科学研究
[作者]
周祥明 张冰玉 苏晓华 王大海 黄秦军 张香华 张志毅
以美洲黑杨雄性花芽为材料,利用SMART技术构建全长cDNA文库。该库的滴度大于106pfu.mL-1,重组率达95%,平均插入片段大小为1 kb左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求,为将来克隆与杨树花发育相关基因及研究其它树种花发育的分子机理奠定了基础。
关键词：
美洲黑杨 雄花芽 全长cDNA文库
[期刊] 中国农业科学
[作者]
迟吉娜 蔡肖 张建宏 甄军波 刘琳琳 田海燕 唐丽媛 刘存敬 崔瑞敏 张香云
【目的】构建优质陆地棉栽培品种冀２２８纤维均一化全长ｃＤＮＡ文库，降低纤维中存在的高峰度基因的拷贝数，提高发现纤维发育相关基因随机序列和稀有基因的效率，为公共数据库提供丰富的陆地棉ＥＳＴ资源。【方法】以优质陆地棉冀２２８开花后８—４０ Ｄ纤维为材料，将纤维全长ｃＤＮＡ与ＧＡＴＥｗＡｙ供体载体ｐ ＤＯＮＲ２２２重组，构建了棉花纤维的非剪切型全长ｃＤＮＡ原始文库。利用均一化技术获得均一化全长ｃＤＮＡ文库，进而测序获得大量的ＥＳＴ序列。采用生物信息分析手段，对所测ＥＳＴ进行拼接、比对、ｃＯＧ功能注释和ＧＯ注释。【结果】构建了优质陆地棉冀２２８纤维均一化全长ｃＤＮＡ文库，该文库初级文库库容为１．０６×．．．
关键词：
陆地棉 纤维 均一化 cDNA文库
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张军科 杜敬 李爽 朱自果 王跃进
【目的】从环化的中国华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后的叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因序列。【方法】根据植物抗病基因在氨基酸水平上的保守结构域NBS的P-loop区和LRR设计特异引物,采用三维文库筛选法,对环化的葡萄白粉菌接种诱导后的叶片cDNA文库进行PCR筛选。【结果】共建组池24个,每个组池中含有单菌落768个,包含18432个克隆。从中筛选出具有抗病基因保守序列的阳性克隆585个,其中具有NBS保守序列引物筛选出330个,LRR保守序列引物筛选出255个。对获得的阳性克隆中的插入片段进行了测序,经生物信息学分析去除重复序列后,获得422条具有抗病基因保守结构域的基因...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张军科 王静 王跃进 张朝红 徐炎
【目的】从中国野生华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因。【方法】根据植物抗病基因保守序列NBS位点设计特异引物,对葡萄白粉病接种诱导后的环化cDNA文库进行菌落PCR筛选,从随机挑选的大量菌落中筛选出82个PCR阳性菌落,提取阳性菌落的质粒进一步进行PCR检测确认,对确认的36个阳性质粒插入片段进行了测序。【结果】测序结果和序列生物信息学分析结果均表明,有3个基因序列与Genbank中的已知序列有较高的同源性,其中1个基因序列与葡萄抗白粉病基因(DT661587.1)序列同源性达99%,另外2个基因序列与水分胁迫下葡萄特异表达基因(DT031657...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谢荔 成学慧 冯新新 杨涛 张治平 汪良驹
以‘夏黑’葡萄为材料,研究了叶面喷施不同稀释倍数(600、800和1 000倍)氨基酸肥料对叶片光合气体交换参数、叶绿素快速荧光特性、生长发育和果实品质的影响。结果表明:稀释后氨基酸肥料均能显著提高叶片叶绿素相对含量、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr),其中,经处理的叶片Pn比对照高出1倍以上。氨基酸肥料处理后,葡萄叶片表观量子效率(AQY)明显升高,光补偿点(LCP)和暗呼吸速率(Rd)呈下降趋势。叶绿素快速荧光测定显示,处理叶片光合性能指数(包括PIABS、PICS和PITOTAL)、PSⅡ反应中心用于电子传递的量子产额(φEo)以及捕获激子将电子传递到电子传递链QA-...
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭磊 王晨 曹雪 杨光 慕茜 房经贵
首次在果树作物上使用cDNA-RAPD技术,以藤稔葡萄正常成花花芽和摘心处理后成花花芽为材料,分析了摘心处理后与葡萄夏芽成花相关基因的差异表达。通过10条RAPD引物分析,在基因组和cDNA上共获得153条(差异性条带81条)扩增片段,并进一步将这些片段分为3种类型。摘心处理后的葡萄夏芽在成花过程中部分基因出现了不同程度的差异表达,且差异表达的基因大多数呈现表达增强的趋势。对差异性片段进行选择回收和测序,共获得14条核苷酸片段,其中有13个片段能在GenBank数据库中发现相应的同源序列。说明该技术是一种较好的可用来研究基因差异表达的方法。
关键词：
葡萄 夏芽 差异表达 cDNA-RAPD
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈明 李超 王瑞 李莉萍 甘西 余晓丽 雷爱莹 黄婷 陈福艳 梁万文
为大规模快速克隆罗非鱼细胞免疫功能基因,采用SMART技术,构建了尼罗罗非鱼链球菌疫苗免疫后外周血白细胞全长cDNA文库。提取免疫后第3、5和7天外周血白细胞总RNA,用PowerscripTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得双链cDNA,经SfiI酶切和CHROMASPIN-400TM柱分级分离,收集500 bp以上的片段重组于改造的pBluescript II SK载体并转化大肠杆菌DH5α,测定文库滴度、重组率及库容量。结果表明,构建的cDNA文库原始库容量1.021×106克隆,文库滴度1.078×106pfu/mL,重组率94.71%,插入片段大小0.75~3....
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李玉 张成 吴伟民 王剑 房经贵
[目的]探究不同拉枝处理对葡萄冬芽成花过程中花发育相关基因表达的影响。[方法]试验以‘夏黑’葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca‘Summer Black’)为试材,利用半定量RT-PCR技术研究不同拉枝处理对‘夏黑’葡萄长、中、短枝上的冬芽成花过程中Vitis vinifera FLOWERING LOCUS T(VvFT)、Vitis vinifera SUPPRESSOR OF OVER EXPRESSION OF CO 1(VvSOC1)、Vitis vinifera LEAFY(VvLFY)、Vitis vinifera APETALA2(Vv AP2)和Viti...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王玉荣 张雪妍 刘传亮 陈亚娟 李付广
【目的】构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因。【方法】取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期、花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA。用DSN(duplex-specificnuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到λZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库。【结果】初级文库滴度4×106pfu·ml-1,库容2×106个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5kb。随机挑取192个克隆...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
徐刚标 房学爽 叶翠层
以珙桐叶片为研究材料,用Rneasy Plant Mini Kit提取珙桐叶片组织总RNA,反转录成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K消化、SfiI酶切后,采用CHROMA SPIN-400柱分级分离,回收0.5 kb以上的cDNA组分,以λTriplEx2载体连接并进行体外包装,构建了珙桐叶全长cDNA文库.结果表明:以XL1-Blue、BM25.8为受体菌测定的原始文库滴度为8.3×106pfu/mL,扩增后文库总滴度为4.16×108pfu/mL,重组率为97.3%;对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,表明插入片段大多分布在0.5~2.0 kb之间,文库质...
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