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[期刊] 中国农业科学
[作者]
沈福晓 蒋金凤 程安春 汪铭书 路立婷 贾仁勇 朱德康 陈孝跃 孙涛
【目的】以DPV gC基因疫苗(pcDNA-DPV-gC)为模型,采用复凝法制备壳聚糖/pcDNA-DPV-gC纳米微球,对其在雏鸭体内的抗原表达和分布进行初步研究。【方法】将壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗以肌注、滴鼻和口服3种途径免疫20日龄雏鸭,于免疫后不同时间点(4h、12h、1d、3d、5d、7d、2 w、4 w、6 w和10 w)分别随机宰杀2只雏鸭,采集肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、食道、十二指肠、盲肠和直肠,应用间接免疫组化检测DPV gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布。【结果】①肌注组免疫雏鸭1 d,肝脏、法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨光 盛军 陈亚东 沙珍霞
构建了枯草芽孢杆菌CH_2菌株(Bacillus subtilis CH_2)壳聚糖酶基因的真核表达载体p PIC9K-CH2-Cns,在毕赤酵母GS115(Pichia pastoris)中进行重组表达,获得了有生物学活性的重组壳聚糖酶,对重组壳聚糖酶的酶学特性及酶解产物进行了分析。结果显示,重组壳聚糖酶的分子量为29 k D,粗酶的比酶活达到133.60 U/mg,纯化后重组蛋白的比酶活为338.08 U/mg;该酶的最适作用温度为50℃,最适pH为4.5,酶动力学常数Vmax=24.39(μmol/
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蒋金凤 程安春 汪铭书 路立婷 朱德康 贾仁勇 陈孝跃
【目的】探讨壳聚糖对鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)gC基因疫苗免疫反应的影响。【方法】应用壳聚糖作为DEV gC基因疫苗(pcDNA-DEV-gC)递送载体,采用肌肉注射和口服单次免疫Balb/c小鼠50μg剂量基因疫苗,并以肌注不同剂量裸质粒组、弱毒组和生理盐水组作为对照,分别检测不同疫苗免疫后的细胞、体液和黏膜免疫水平。【结果】肌注壳聚糖疫苗组诱导小鼠产生较肌注裸质粒50μg组和口服壳聚糖疫苗组高的细胞和体液免疫反应,且产生与弱毒疫苗相似的细胞免疫应答,但弱毒疫苗诱导体液免疫的能力更强,仅口服壳聚糖疫苗组产生粘膜免疫。【结论】上述研究结果表明壳聚糖具有一定的...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱方伟 谷长勤 程国富 苏敬良 佘锐萍 胡薛英
应用免疫组织化学方法,对人工感染新型鸭肝炎病毒雏鸭体内的病毒分布进行了动态观察。结果表明:接种后不同时间,在肝脏、脾脏、胰脏、胸腺和法氏囊组织中均可检测到新型鸭肝炎病毒抗原,而肾脏、心脏、脑组织中均未检测到病毒抗原。病毒抗原均位于阳性细胞的细胞质中。研究结果提示,感染雏鸭的肝脏和胰脏的组织病理变化与病毒的分布有关。
关键词：
新型鸭肝炎病毒 病毒分布 鸭
[期刊] 水产学报
[作者]
段静 刘广鑫 董晏君 周洋 李锦铨 刘小玲 周萌 梁日深 赵丽娟 林蠡
为了研究壳聚糖酶的水解活性,实验进行了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因编码序列的克隆,并构建了谷胱甘肽转移酶(GST)-壳聚糖酶融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中表达后提取、纯化得到重组蛋白,并通过生物信息学对该蛋白的信号肽、三维结构等进行了分析,最后以胶态壳聚糖溶液为底物研究了该重组壳聚糖酶的活性。结果显示,该壳聚糖酶基因的ORF长为837 bp,编码279个氨基酸,分子量为31.45 ku。在其氨基末端具有信号肽,切割点位于36和37位氨基酸之间。氨基酸序列同源性分析表明该壳聚糖酶属于GH46家族
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
卢梦琪 蒋霞云 司蕊蕊
建立了有效分析浅玫瑰色链霉菌菌体全蛋白质的方法，使用分离范围为ｐ Ｈ ４～７的ＩｐＧ胶条、２Ｄ ｃｌｅａｎ－ｕｐ试剂盒法纯化方法、８０μＧ蛋白质上样量和银染的双向电泳技术，获得了低背景、高分辨率和重复率、无明显条纹的浅玫瑰色链霉菌全蛋白质双向电泳图谱。通过ＩｍａＧｅ ｍａｓｔｅｒ２Ｄ ｐｌａｔＩｎｕｍ７．０软件对壳聚糖诱导条件下浅玫瑰色链霉菌菌体总蛋白质的电泳图谱进行匹配分析，在诱导菌株图谱上有７２３±１４个清晰可见的蛋白质点可供差异分析。与未诱导菌株的双向电泳图谱对比结果显示：１８个蛋白质点在诱导菌株中差异表达，其中１４个蛋白质点的表达量上调，４个蛋白质点的表达量下调，选取１０个差异表达量在．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李向阳 王学理 刘凯 霍晓伟 武迎红 张显华
克隆牛布鲁氏菌的甲酰基转移酶基因(Wbkc),在大肠杆菌中表达/纯化,并对甲酰基转移酶的抗原性进行分析。以牛布鲁氏菌的染色体DNA为模板,扩增Wbkc基因,双酶切后克隆至pET-28a上,在大肠杆菌BL21中诱导表达,His Trap FF层析柱纯化,Western blot鉴定甲酰基转移酶的抗原性。提取的重组质粒经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序分析确定目的基因成功插入到了克隆载体中。SDS-PAGE分析证明,表达产物为相对分子质量29 000的融合蛋白。Western blot结果表明,表达的蛋白具有特异的免疫反应原性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
廖文艳 马得莹 刘胜旺 韩宗玺
【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duckAvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204bp,前体肽包括67个氨基...
[期刊] 草业科学
[作者]
马春娟 杨宇泽 邹爱爱 孙康永杰 万雪瑞 王川 魏亚琴
为提高纤维素的降解效率、构建高效表达的纤维素酶基因工程菌，本研究以牛瘤胃液微生物全基因组为模板，首先通过PCR扩增内切葡聚糖酶eg基因，然后与pET-28a连接获得表达载体pET-28a::eg并转化至大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达EG蛋白，最后用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定重组内切酶的酶活力，分析其酶学性质。结果表明：成功构建表达载体pET-28a::eg，重组菌株E. coli BL21/pET-28a::eg在28℃用IPTG诱导14 h后纯化得到重组的EG蛋白，EG蛋白大小约为50 kDa，刚果红染色有明显水解圈。用DNS法测得EG的酶活为12.60 U·mL~(-1)，滤纸总酶活为3.53 U·mL~(-1)。重组酶在不同底物的反应中，羧甲基纤维素钠为底物的酶活力最高，脱脂棉最低。重组酶的最适温度为40℃，最适pH为7.0。在此条件下，Ca~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、K~+、Mn~(2+)等离子均可对重组蛋白EG的酶活力具有促进作用，Zn~(2+)可促进但差异不显著，而Hg~(2+)、Cu~(2+)对EG的酶活力具有抑制作用。本研究构建的重组内切酶菌株可以高效水解纤维素，为内切酶的工业应用奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李琦 成莉凤 段盛文 冯湘沅 郑科 杨琦 刘志远 彭源德
为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xyn A的基础上,将xyn A基因(Gen Bank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到p PICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表达体系,再分批加入0. 5%(V/V)甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶。结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况。结果表明,该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域(GH11),成熟蛋白的预测分子量为38. 6 ku,等电点为6. 86; 7个毕赤酵母基因工程菌株X33/p PICZαA-xyn A分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/m L,最高达487. 2 U/m L;胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku,均比预期分子量(38. 6 ku)略大。一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达,为进一步分离纯化,研究其性质、结构和功能奠定了基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杜志龙 高振江 吴薇 凌刚
采用清洗 +壳聚糖涂膜及不清洗 +壳聚糖涂膜的处理方法进行了鸭蛋保鲜对比试验 ,溶液壳聚糖质量浓度 ρ(壳聚糖 )分别为 5 ,10和 2 0 g/L。 2 5℃ ,相对湿度 2 0 %～ 2 5 %条件下贮藏 2 7d ,结果表明 :鸭蛋失重率与贮藏时间成线性关系 ,ρ(壳聚糖 )较高时鸭蛋失重率较低 ,且蛋黄指数较高。不清洗 + ρ(壳聚糖 ) 2 0g/L涂膜处理效果最佳 ,失重率比对照组低 3 0 % ,蛋黄指数 0 36 8,较对照高 0 0 17;清洗 +涂膜处理各组均有鸭蛋变质。壳聚糖涂膜具有一定保鲜作用 ,但 ρ(壳聚糖 ) 5～ 2 0 g/L时 ,抑菌效果不佳 ,建议保...
关键词：
壳聚糖 鸭蛋 保鲜 蛋壳处理
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡廷章 钟彦 陈林 杨俊年 黄小云
为了研究胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA2的功能,利用PCR方法扩增目的基因,采用基因重组、蛋白质表达和抗逆性分析对OsLEA2基因进行研究。结果表明,构建的原核表达载体pET32a-OsLEA2,转化到E.coli BL21中,得到表达OsLEA2融合蛋白的工程菌;SDA-PAGE分析表明融合蛋白的分子量约为29.4 kDa。OsLEA2的表达增强了大肠杆菌对高盐、高温、低温和紫外照射等非生物胁迫的抗性。该研究为进一步改良作物品种、提高农作物的抗逆性奠定基础。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
陈云波 华雪铭 周洪琪 沈士林 徐忠 张旭日 陆汉斌
在基础饲料中分别添加0.0%(对照组)、0.3%、0.5%、1.0%、2.0%壳聚糖,饲喂异育银鲫(体重46.20±3.56 g)二个月,测定鱼的生长与成活,进行嗜水气单胞菌的感染试验,并计算半致死量LD50。结果表明,不同浓度的壳聚糖均能极显著地提高鱼的增重,其中0.5%壳聚糖组增重率比对照组提高33.90%(P<0.01)。壳聚糖对鱼的成活率无显著影响。0.5%、1%壳聚糖组的异育银鲫对嗜水气单胞菌的抵抗能力显著高于对照组(P<0.05)。壳聚糖在异育银鲫饲料的适宜添加量为0.5%。
关键词：
壳聚糖 异育银鲫 生长 抗病菌感染能力
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
夏葵 曾虹燕 孟娟 廖晓珊 郭强
测定了壳聚糖及其衍生物对细菌和真菌的最低抑制浓度(MIC),并研究了不同浓度壳聚糖及其衍生物对抑菌活性的影响;同时,以壳聚糖为主剂,双乙酸钠为助剂制成复合保鲜剂,以不同浓度的复合保鲜剂水溶液涂膜处理蕨菜表面,室温存放进行保鲜试验.结果表明:壳聚糖及其衍生物对这2类微生物均有较强的抑制作用,且其抑菌活性高于双乙酸钠和苯甲酸钠;其中,壳聚糖—硫脲—Ag+的抑菌作用最强,在0.0025%的浓度下就可抑制细菌.此外,保鲜过的蕨菜基本上保持了原有风味和营养成分,仍为绿色,无霉变.
关键词：
壳聚糖 抗菌性 蕨菜
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