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[期刊] 中国农业科学
[作者]
马帆 周宇 高亚可 朱鹏 雷小灿 刘庆友 石德顺
【目的】探讨在水牛中增殖细胞核抗原(PCNA)参与卵泡发生的时期及其在卵巢组织不同时期卵泡中的表达定位;【方法】采用石蜡切片结合免疫组化的方法对PCNA在卵巢组织中进行定位,利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术检测PCNA在腔前卵泡中的表达情况。【结果】免疫组化结果显示:原始卵泡中的卵母细胞能检测到PCNA的表达,但颗粒细胞并未观察到PCNA的免疫染色;初级卵泡到次级卵泡,卵母细胞和颗粒细胞中均可检测到PCNA的表达,且在颗粒细胞中的表达有增强的趋势;有腔卵泡中,颗粒细胞、卵泡膜细胞及包围卵母细胞的卵丘细胞中都能观察到很强的免疫染色。定量表达检测结果显示:PCNA在原始卵泡、初级卵泡及...
关键词：
水牛 PCNA 卵巢定位 定量表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王成扬 赵超 傅明骏 邱丽华
为研究增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ，ｐｃｎａ）在斑节对虾（ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ）卵巢发育中的功能，利用ｒａｃｅ技术克隆得到了斑节对虾ｐｃｎａ基因（ｐｍｐｃｎａ）的ｃｄｎａ全长序列。该序列全长９７８ ｂｐ，包括１３５ ｂｐ的５′非编码区（５′ｕｔｒ）、６０ ｂｐ的３′ｕｔｒ和编码２６０个氨基酸的７８３ ｂｐ的开放阅读框（ｏｒｆ）。同源性分析结果表明，ｐｍｐｃｎａ与其他物种具有很高的蛋白同源性。组织表达模式分析表明，ｐｍｐｃｎａ在所监测的各组织中为组成性表达，其中在卵巢和脑中表达量较高；卵巢发育不同阶段基因的表达分析则表明ｐｍｐｃｎ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李鹏飞 毕锡麟 王锴 景炅婕 吕丽华
【目的】探讨牛卵泡颗粒细胞中可卡因－苯丙胺调节转录肽（ｃｏｃａｉｎｅ－ａｎｄ ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ，ｃａｒｔ）的表达对牛不同阶段卵泡发育的影响。【方法】通过对牛卵泡转录组ｏｄＦ１（ｔｈｅ ｌａｒｇｅｓｔ ｏｎｓｅｔ ｏＦ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ Ｆｏｌｌｉｃｌｅ）和ｏｄＦ２（ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｌａｒｇｅｓｔ ｏｎｓｅｔ ｏＦ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ Ｆｏｌｌｉｃｌｅ）颗粒细胞（ｇｒａｎｕｌｅｓａ ｃｅｌｌｓ，ｇｃｓ）构建ｒｎａ文库，ｉｌｌｕｍｉｎａ ｈｉ ｓｅｑ ２０００平台测序；采集屠宰牛双侧卵巢，通过黄体形态特征筛选处于第一卵泡波阶段的最大卵泡和第二．．．
关键词：
牛 卵泡 发育 CART 表达
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宋丹 吴国云 丁威 邢军 魏全伟 石放雄
[目的]本试验旨在探究甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成功能以及增殖的影响。[方法]首先采用免疫组化法鉴定甲状腺素受体(TRα/β)在猪卵巢组织的表达情况,随后体外培养猪卵巢原代颗粒细胞,选取低(10-8mol·L(-1))、中(10-7mol·L(-1))、高(10-6mol·L(-1))3种浓度的甲状腺素(T4)孵育24 h,采用酶联免疫法检测细胞培养液中孕酮(P4)和雌二醇(E2)水平,并采用蛋白印迹法检测颗粒细胞内激素合成相关酶蛋白(3β-HSD、CYP19)的表达情况。采用MTT法检测各
[期刊] 华北农学报
[作者]
王峰 刘永斌 荣威恒 田春英 达赖
为阐明BMPRIB基因在牛的卵泡发育和分化中的作用及其分子机理,首先根据其他物种BMPRIB基因的保守序列设计特异性引物,从蒙古牛卵巢中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出蒙古牛BMPRIBcDNA序列;将此片段克隆到pGM-T载体中,提取重组质粒,经PCR鉴定和DNA序列测定分析验证;符合BMP家族基因结构特征,然后根据此序列构建cRNA探针,利用原位杂交技术检测牛卵巢BMPRIB基因mRNA的表达情况。原位杂交结果显示,牛BMPRIB基因,在初级卵泡和次级卵泡早期表达,在颗粒细胞中表达,在次级卵泡晚期也有表达。
关键词：
牛 BMP15 RT-PCR 原位杂交
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
苏友强 汪琳仙
建立鸡卵泡膜细胞体外无血清贴壁培养模型，研究了鸡促性腺激素释放激素（cGnRH－Ⅱ）对鸡卵泡膜细胞增殖的作用。细胞在培养箱内预培养约24h后进行各项处理，继续培养72h后，分别用胰蛋白酶消化成单个细胞，然后计数。结果表明：cGbnRH－Ⅱ能促进膜细胞增殖，作用效果具有剂量依赖关系；该促进作用能被GnRH拮抗剂（G－Ant）所阻断。这提示cGnRH－Ⅱ对膜细胞增殖的刺激作用有可能通过与膜细胞上特异的GnRH受体结合而起作用的。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李佳宜 陆应林 刘小凡 虞德兵
[目的]以东乡绿壳蛋鸡为研究对象,从形态学和分子水平上探究高低产蛋鸡卵巢和卵泡的差异。[方法]选择高产组、低产组东乡绿壳蛋鸡各10只,采集静脉血,测定相关激素含量;屠宰采集卵巢组织,制作组织切片,观察卵巢形态结构;提取卵巢组织RNA,分别测定高产与低产蛋鸡卵巢中的细胞增殖凋亡基因、生殖调控相关转录因子基因、类固醇激素合成关键酶基因和相关激素受体基因的表达量。[结果]高产与低产蛋鸡卵巢和卵泡在形态上有明显差别:高产蛋鸡卵巢体积大,卵泡丰富,细胞排列紧密;低产蛋鸡卵巢、卵泡发育不良,细胞松散。高产蛋鸡血清中促
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李佳宜?陆应林?刘小凡?虞德兵
[目的]以东乡绿壳蛋鸡为研究对象?从形态学和分子水平上探究高低产蛋鸡卵巢、卵泡的差异?[方法]选择高产组、低产组东乡绿壳蛋鸡各10只?采集静脉血?测定相关激素含量?屠宰采集卵巢组织?制作组织切片?观察卵巢形态结构?提取卵巢组织RNA?分别测定高、低产蛋鸡卵巢中的细胞增殖凋亡基因、生殖调控相关转录因子基因、类固醇激素合成关键酶基因和相关激素受体基因的表达量?[结果]高低与低产蛋鸡卵巢及卵泡在形态上有明显差别?高产蛋鸡卵巢体积大?卵泡丰富?细胞排列紧密?低产蛋鸡卵巢卵泡发育不良?细胞松散?高产蛋鸡血清中促卵泡
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘海军 薛俊 徐直 张冬梅 李义海
分离方法和绵羊年龄对绵羊卵巢腔前卵泡的分离效果有显著影响。从每只羊获得腔前卵泡的总数看,机械分离法(89.5)和酶消化法(103.3)差异不显著,而正常卵泡数和正常卵泡率机械分离法(27.9,31.2％)明显高于酶消化法(19.1,18.5％);采用机械分离法,每只初情期前绵羊获得的腔前卵泡总数和正常卵泡数(125.6,35.1)均高于成年绵羊(60.4,16.1),而正常卵泡率(28.1％比26.8％)差异不显著。腔前卵泡在体外培养6 d,培养液中添加20ng/mL的IGF-I,培养结束时卵母细胞直径增幅为34.8 μm,与对照组的29.9 μm差异不显著。
关键词：
绵羊 腔前卵泡 分离 体外培养
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
江中良 胡建宏 史怀平 王立强 李青旺
【目的】研究体外培养牛卵巢颗粒细胞中Sprouty基因(Spry)的表达,探讨成纤维细胞生长因子1(FGF1)对Spry基因表达的影响。【方法】从屠宰场收集牛卵巢,剪下直径2~5 mm的卵泡,机械破碎卵泡后收集颗粒细胞进行体外培养,在培养的第5天用FGF1和PD98059处理培养的颗粒细胞,然后用Trizol提取细胞总RNA,利用牛特异性引物进行实时定量PCR检测,用ΔΔCt方法计算Spry基因的相对表达量。【结果】牛卵巢颗粒细胞可以表达Spry基因;Spry基因的表达与FGF1呈现剂量依赖关系,Spry2和Spry4的表达量随FGF1作用时间的延长呈现出先上升后下降的变化趋势;FGF1信号通...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘笑然 李冬冬 钟友刚 史雅然 张超 张松 刘琳 高建明
【目的】揭示小鼠卵泡膜细胞成熟过程中DNA甲基转移酶(Dnmts)表达的变化,并初步探讨其可能的机制。【方法】对新生昆明白小鼠第3、5及8天(days post parturition,dpp3、dpp5和dpp8)的卵巢进行切片,经H.E染色,分别观察原始、初级、次级卵泡膜细胞的形成情况,统计各级卵泡的比例并对卵泡外缘的膜细胞进行计数;半定量PCR检测成熟膜细胞特异性表达基因CYP17A1及Dnmts转录水平在dpp3、dpp5、dpp8卵巢中的变化;免疫组化观察Dnmt1蛋白在dpp3、dpp5、dpp8小鼠卵巢中的分布情况。【结果】小鼠dpp3卵巢中的初级卵泡外缘存在"梭形细胞";随出生...
关键词：
DNA甲基转移酶 卵泡膜细胞 成熟 小鼠
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王立斌 王强龙 潘阳阳 黄振华 赵天 丁天翊 刘敏清 崔燕 余四九
【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor,DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径<3 mm,直径3～8 mm,直径>8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(q RT-PCR)检测DBI基因m RNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting,WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry,IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因m RNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P<0.05),表达量随着牦牛卵泡直径的增大而显著上升。DBI蛋白在牦牛成熟卵泡中的颗粒细胞、卵丘细胞均有分布;在卵母细胞中主要定位于细胞质、细胞核。【结论】DBI在类固醇激素合成与卵母细胞成熟过程中具有重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冯贵雪 杨素芳 潘红平 卞桂华 石德顺
【目的】主要探讨水牛腔前卵泡体外培养的影响因素。【方法】采用梳刮法从沼泽型水牛的卵巢中回收得到腔前卵泡,而后用McCoy's5a培养液在96孔培养板中体外培养5～10d,在显微镜下观测腔前卵泡的形态与增长情况,并用台盼蓝染色鉴定腔前卵泡的存活情况。【结果】在培养液中添加100μg·L-1的FSH能显著提高腔前卵泡培养5和10d后的增长幅度,当同时添加50mg·L-1的维生素C时增长幅度进一步加强;添加50mg·L-1的维生素C能提高腔前卵泡培养10d后的形态正常率,但对卵泡增长及存活没有影响;添加50μg·L-1的EGF能提高腔前卵泡培养5d的增长幅度,但对培养10d后腔前卵泡的作用不显著。随...
关键词：
水牛 腔前卵泡 体外培养
[期刊] 中国农业科学
[作者]
耿建军 郭青云 庞亚妙 白俊明 贺俊平
【目的】研究生长分化因子9(growth differentiation facter9,GDF9)的潜在靶蛋白Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达与定位,探索Claudin-11对促进卵泡发育、调节排卵的作用机理。【方法】以成年雌性羊驼为研究对象,用RT-PCR技术分析潜在靶蛋白Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达,并使用实时荧光定量PCR技术分析其相对表达量,采用免疫组织化学法和western blotting法对Claudin-11在成年羊驼卵巢中的表达进行定位分析。【结果】荧光定量PCR结果显示,Claudin-11在羊驼卵巢的初级卵泡中弱表达于次级卵泡;westernbl...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杜学海 曹蕊 萧鹏 李伯江 吴望军 刘红林
为研究低氧诱导因子1α(HIF1α)及其下游基因胰岛素样生长因子2(IGF-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(促排组)的促排卵巢与注射生理盐水(对照组)的普通卵巢组织中的mRNA转录水平,构建小鼠HIF1α基因真核表达载体,观察其转染的小鼠颗粒细胞中HIF1α基因的表达情况,以探讨HIF1α与小鼠卵泡发育的关系。用荧光定量PCR检测不同处理组织中HIF1α、VEGF及IGF-2 mRNA转录水平,免疫组化技术定位HIF1α在卵泡中的表达,基因重组技术构建HIF1α-pcDNA3.1真核表达载体并将其转染小鼠颗粒细胞,荧光定量PCR与Western blot...
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