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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
代金彩 聂竹兰 赵年桦 任永丽 魏杰
为了建立塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)尾鳍细胞系，本研究采用组织块法，分别用含胎牛血清(FBS)的DME/F12培养基体外培养塔里木裂腹鱼尾鳍组织，初步建立了塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系(BICF1)。采用MTT法测定分析盐度(NaCl)和碱度(NaHCO_(3))对其增殖的影响。结果显示，BICF1悬浮培养传至45代，最适培养液为DME/F12，最适FBS浓度为20%，最适温度为25℃。第10代BICF1的群体倍增时间为28.11 h，呈“S”型生长。第6代BICF1液氮冻存180 d后复苏，经台盼蓝染色计数，BICF1有(87.85±0.66)%的细胞具有活性，复苏后可增殖并传代。BICF1无细菌、真菌、支原体污染。第10代BICF1线粒体16S rRNA测序结果与GenBank基因序列进行一致性对比，结果显示，BICF1与JQ844133.1的一致率为100%，证明BICF1来自于塔里木裂腹鱼。BICF1增殖数量随盐度1、2、4、6呈上升趋势，随6、8、10呈下降趋势；盐度为6时，BICF1增殖数量最高。BICF1增殖数量随碱度2、3、4、5、6 g/L呈上升趋势，随碱度6、7、8、10 g/L呈下降趋势；碱度为6 g/L时，BICF1增殖数量最高。细胞增殖数量随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。本研究旨在为合理开发和利用塔里木裂腹鱼遗传资源以及建立和保护其种质资源提供一定的科学依据。
关键词：
塔里木裂腹鱼 尾鳍组织 细胞培养
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李华玮 王旭英 井汇源 万博 乔宏兴 郭科威 侯文静
旨在利用CRISPR/Cas9系统构建敲除真核翻译起始因子5A(Eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)的MARC-145多克隆细胞系，并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。针对eIF5A基因构建并筛选成功获得重组慢病毒，用重组慢病毒感染MARC-145细胞，嘌呤霉素及有限稀释法进行筛选，获得敲除eIF5A的MARC-145多克隆细胞系。对构建细胞系进行活力检测，T7E1核酸内切酶、Real-time PCR以及Western blot验证eIF5A体外敲除效率，病毒增殖试验验证该细胞系对PRRSV复制的影响。结果表明：1)细胞活性检测结果显示敲除eIF5A基因对细胞活性无显著影响；2)通过T7E1核酸内切酶、Real-time PCR以及Western blot表明eIF5A表达显著降低，并将此细胞系命名为MARC-145-△eIF5A细胞系；3)使用PRRSV HN07-1感染MARC-145-△eIF5A,体外试验证明敲除eIF5A对PRRSV的增殖有抑制作用。综上，本研究成功构建eIF5A基因敲除的MARC-145多克隆细胞系，体外敲除eIF5A显著抑制PRRSV增殖，这将为进一步探索eIF5A调控PRRSV复制的分子机制奠定基础。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张人铭 郭焱 马燕武 吐尔逊
于2003~2006年在新疆塔里木河水系调查了塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi Günther)的分布和资源现状。结果表明:塔里木裂腹鱼在流域内各主要河流均有分布;分布范围较广,但分布区域缩小;栖息环境条件恶劣,水温低,饵料少;主要种群分布在海拔1000~3300 m区域;个体低龄化,种群数量占土著鱼类的比例小。水利工程、过度捕捞、引入外来物种和生态环境恶化等因素已对该鱼资源造成严重破坏。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
史昆 杨模华 李志辉 张冬林 王茜 丁贵杰
本研究利用马尾松未成熟胚诱导的胚性愈伤组织,首次建立马尾松胚性愈伤组织悬浮增殖培养体系。实验中定期对细胞生长参数沉淀细胞体积(SCV)、细胞活力进行了测定,研究了初始接种量,继代细胞密度对悬浮增殖培养体系建立的影响。研究结果表明:不同初始接种量、继代转接细胞密度显著地影响马尾松胚性细胞悬浮培养的效果;在悬浮培育过程中,胚性细胞的生长周期曲线呈"S"型,细胞活力呈现先急剧上升,后缓慢下降的趋势;本研究建立的马尾松胚性细胞悬浮增殖培养体系为:在30 mL的培养基中,初始接种1.0 g胚性细胞(平均增殖系数达12.097),继代培育以1/6作为继代细胞密度,且继代周期为8~12 d为宜。本研究为优化...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姚娜 宋勇 王帅 陈生熬 阿达可 刘洁雅 谢从新
【目的】研究塔里木河叶尔羌高原鳅盐碱胁迫下机体耐受和行为变化。【方法】以塔里木河叶尔羌高原鳅为研究对象,通过采用生态急性毒理学试验方法,限定低温环境(13±0.5)℃,测定不同盐、碱浓度下高原鳅属鱼类耐受和喜好程度,分析低温环境中盐、碱胁迫对塔里木河水系特有叶尔羌高原鳅毒性影响。【结果】p H 6.57.5、温度(13±0.5)℃下,叶尔羌高原鳅12、24、48、72、96 h时盐度半致死浓度分别为20.0870‰、15.2560‰、14.1960‰、13.2990‰、12.9180‰,安全值为4.167
关键词：
叶尔羌高原鳅 盐度 碱度 毒性
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨长庚 文华 王美姿 陆星 蒋明 田娟 喻丽娟
探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2(Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5℃/d降温速率对转染后的罗非鱼肾脏细胞进行低温胁迫,分别在25、20、15、10℃进行细胞采集。随后,利用实时荧光定量PCR检测Gas2基因及P53基因mRNA表达变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并开展WST-1细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果表明,低温胁迫下,阴性对照组及Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达在15℃和10℃时均显著升高;Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达水平在所有温度下均显著低于阴性对照组;随着温度降低,阴性对照组及Gas2干扰组的细胞凋亡率均明显升高,但Gas2干扰组的细胞凋亡率明显低于阴性对照组;低温胁迫下,对照组及Gas2干扰组的细胞增殖率与25℃时相比均显著下降;当温度降至15℃时,Gas2干扰组的细胞增殖率显著高于对照组。罗非鱼肾脏细胞在受低温胁迫时,抑制Gas2基因能够降低P53基因mRNA的表达水平以及细胞的凋亡率,并增加细胞的增殖。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
任永丽 聂竹兰 杨志军 张升 魏杰
利用传统石蜡切片、HE染色等方法对塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)消化系统形态学和组织学特征进行了研究。结果显示：塔里木裂腹鱼消化系统由消化管和消化腺组成，消化管包括口咽腔、食道和肠(前肠、中肠、后肠、直肠)。口咽腔内具有发达的咽齿。无胃，肠与食道紧接，前肠膨大。消化道由腔面向外依次为黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层，但口咽腔只有黏膜层、黏膜下层和肌层，未发现有浆膜层。消化道4层中黏膜层差异最大：口咽腔黏膜层为复层扁平上皮，其间分布有味蕾和大量黏液细胞；食道粗而短，黏膜层为复层扁平上皮，黏膜褶两侧分布大量黏液细胞，且固有膜血管丰富；肠道上皮细胞为单层柱状上皮，上皮间分布有杯状细胞，其数量由前向后逐渐增加，而黏膜褶高度逐渐降低。消化腺由肝脏和胰脏组成，肝脏的肝小叶不明显，但明显可见肝血窦及中央静脉分布，肝门管区不典型。胰脏仅在肠系膜中出现，而未在其他组织中发现，胰小叶间中央静脉明显，中央静脉中可见大量椭圆形有核的红细胞。文章对塔里木裂腹鱼消化系统形态学和组织学特征与其食性的关系进行了探讨，旨在丰富塔里木裂腹鱼的生物学研究内容，为其食性分析及饵料开发提供理论依据。
关键词：
塔里木裂腹鱼 消化系统 形态学 组织学
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
龚小玲 崔忠凯 吴敏芝 殷建国 李岩 王成辉
2012年4月至6月,在新疆博湖苇业股份有限公司三苇场(新疆且末县)进行了塔里木裂腹鱼的人工繁殖和苗种培育研究。人工授精的受精率为83%,孵化率为89%。塔里木裂腹鱼受精卵在16~19℃下历时约93 h经过卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、孵化期等时期孵化出膜,初孵仔鱼平均体长(7.29±0.18)mm。1~25日龄的仔鱼可分为卵黄囊期、弯曲前期、弯曲期和弯曲后期4个发育阶段;对仔鱼阶段的全长(LT)、头长(LH)、躯干长(LQ)、尾部长(LC)、眼径(D)、体高(HB)、头高(HH)、湿重(W)8项生长指标的特定生长率进行了分析,结果表明仔鱼各个阶段的发育是异速的;仔鱼全长、尾部长、头长、头...
关键词：
塔里木裂腹鱼 胚胎 仔鱼 发育 生长
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨天燕 郭焱 孟玮 马燕武 陈朋
采用AFLP技术对喀拉喀什河、塔什库尔干河、阿克苏河多浪渠首、木扎提河4个群体共80尾塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi Günther)个体进行了遗传多样性分析。6对选择性扩增引物共扩增得到212个位点,其中多态性位点141个,多态位点比例为66.51%。4个群体的Shannon多样性指数(I)为0.316 9-0.544 3,Nei’s遗传多样性指数(H)为0.213 9-0.376 2,群体间的遗传距离为0.078 1-0.250 2。塔什库尔干河群体的多态位点比例、Shannon多样性指数和Nei’s遗传多样性指数均高于其它三个群体。AMOVA分析结果显示,群体...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
诸葛强 阙国宁
山杉木(Cunninghamia lanccolata Hook.)成熟种子胚在含有2.0mg/l 2,4-D、0.2mg/l KT的MS培养基上诱导愈伤组织,通过筛选继代培养,得到了生长旺盛、质地松散的愈伤组织细胞系。继代初期适当降低蔗糖浓度有助于减少愈伤组织的褐化。将5个月龄的愈伤组织转移至含1.5～2.0 mg/l 2,4-D、0.1～0.2mg/l KT、200 mg/l CH的MS液体培养基振荡培养,建立了增殖快、分散性良好的杉木悬浮细胞系。从4个月龄的悬浮细胞酶解(2％纤维素酶、0.25％果胶酶和13％甘露醇),游离得到大量的杉木原生质体,产量为9.3×10~5个/g FWW,活力...
关键词：
杉木 悬浮细胞系 原生质体的分离
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张雪萍 曾令兵 陈倩 周勇 张琳琳
采用组织块移植培养技术，对来源于青鱼（Ｍｙｌｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ ｐｉｃｅｕｓ）的鳍条组织细胞进行原代培养，建立了青鱼鳍条组织细胞系，定名为Ｂｃ－Ｆｉｎ。青鱼鳍条组织细胞为成纤维样细胞，已稳定传代培养５０多代，其最适培养温度为２５℃，最佳培养基为ｌ－１５，最适血清浓度为１５％，在最适培养条件下，青鱼鳍条组织细胞的群体倍增时间为６０．６ ｈ。青鱼鳍条组织细胞液氮冷冻保藏６个月后，经台盼蓝染色，约（９０．０９±４．６５）％的细胞具有细胞活性，复苏后的细胞生长旺盛。细胞染色体分析显示，第１６代青鱼鳍条组织细胞的染色体数目为正常二倍体（２ｎ＝４８），第４１代细胞染色体众数为４６。通过对离体培养细胞．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李莲军 韦精卫 黎宗强 卢盛晟 卢克焕
体外培养雄性新生仔猪生殖细胞,并检测其碱性磷酸酶活性及O ct-4蛋白,探讨用雄性新生仔猪生殖细胞建立干细胞系的可行性及检测方法。结果表明,雄性新生仔猪生殖细胞在BRL细胞饲养层上培养2 d,大部分生殖细胞呈碱性磷酸酶阳性(AP+),而全部呈O ct-4蛋白阴性(O ct-4-);培养1周后,生殖细胞及细胞克隆均为AP-和O ct-4-。雄性新生仔猪生殖细胞体外培养时出现2类细胞克隆,一类体积较小,数量众多,形成1周后又开始分化,仅能传至第2代;另一类细胞克隆的形态与猪原生殖细胞来源的胚胎生殖细胞(EGC)克隆相似,细胞克隆与周围细胞分界明显,而克隆中细胞相互间界限不清,这类细胞克隆易于分化,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陆玲 黄为一 袁生 樊庆笙
以单细胞的真核模式生物裂殖酵母 (S .pombe)为材料 ,研究钙与细胞增殖的关系。结果表明 ,外源钙浓度的增加能明显缩短群体生长的延滞期 ,促进细胞增殖。添加Ca2 + 螯合剂EGTA ,在培养基pH≥ 5 4条件下能完全抑制S .pombe细胞的增殖 ,终止细胞周期的正常运转 ;而CaCl2 对EGTA抑制S .pombe细胞增殖具有恢复作用。这表明EGTA终止S .pombe细胞增殖是由于缺Ca2 + 而引起的。此外 ,EGTA与A2 31 87配合使用可以显著降低S .pombe细胞内Ca2 + 含量 ,可见维持S .pombe胞内钙量的稳定 ,对细胞增殖也起着重要的作用
关键词：
钙离子 细胞增殖 裂殖酵母
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳飞 李健 李吉涛 葛倩倩 葛红星 沈明明
采用静态毒理学方法研究了不同碳酸盐碱度（３．５，５，６．５，８ ｍｍｏｌ／ｌ）胁迫对脊尾白虾（ＥｘｏｐａｌａＥｍｏｎ ｃａｒｉｎｉｃａｕｄａ）生存、生长、繁殖及免疫酶活性的影响。结果表明，碳酸盐碱度对脊尾白虾的９６ ｈ ｌｃ＿（５０）值为８．７３ ｍｍｏｌ／ｌ（ｐ ｈ约为９．１５）；脊尾白虾的死亡率、特定生长率、抱卵率、孵化率、性腺发育及变态幼体成活率随碱度的上升而降低，３．５ ｍｍｏｌ／ｌ的低碳酸盐碱度对脊尾白虾生长繁殖影响不显著（ｐ≥０．０５），高于该碱度则会显著降低其生长及繁殖能力（ｐ＜０．０５）；随着碳酸盐碱度胁迫时间的增加，各碱度胁迫组脊尾白虾鳃和肝胰腺中的免疫酶活性均呈先升高后降低．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杜晓映 张振文 夏惠 徐国前
【目的】建立适合葡萄悬浮细胞系快速稳定生长的培养体系。【方法】以鲜食葡萄巨峰的果皮为材料,以B5为基本培养基,通过选择合适的激素配比及浓度、pH、蔗糖浓度等建立并优化葡萄愈伤组织培养体系及细胞悬浮培养体系。【结果】在B5+0.5 mg/L 6-BA+NAA条件下,NAA最适质量浓度为1 mg/L;在B5+0.5 mg/L 6-BA+2,4-D条件下,2,4-D最适质量浓度为1.0~2.0 mg/L;在B5+1 mg/L NAA+6-BA条件下,6-BA最适质量浓度为0.5~1.0 mg/L;在B5+2 mg/L 2,4-D+KT条件下,KT的最适质量浓度0.2 mg/L。在最佳蔗糖质量浓度30...
关键词：
巨峰葡萄 愈伤组织 悬浮细胞 培养体系
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