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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
许细丹 陈红林 MANDALBIPLABKUMAR 司周旋 王军 王成辉
酪氨酸酶(Tyr)基因在动体的黑色素合成过程中起关键作用，其突变会导致人类和其他物种出现白化现象。以AB系斑马鱼(Danio rerio)为研究对象，应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，对纯合亲鱼受精卵进行显微注射，通过编辑损坏Tyr基因的CDS区第二外显子和3′-UTR非poly-A加尾信号区，使基因发生突变，检测基因不同功能区经编辑后对鱼类体色的影响。结果显示：Tyr基因在野生型斑马鱼的胚胎各个发育时期均能正常表达，眼睛出现黑色素时的表达量最高；编辑损坏Tyr基因的CDS区后，突变型斑马鱼的胚胎和仔鱼均未出现黑色素细胞，表现为体表白化，而成鱼会再度出现黑色素细胞，表现为体表黑色条纹断裂。编辑损坏Tyr基因的3′-UTR非poly-A加尾信号区后，突变型胚胎、仔鱼和成鱼均未出现黑色素减褪，黑色素合成未受影响。研究表明，编辑损坏基因的CDS区会对生物表型产生显著影响，而编辑损坏3′-UTR非poly-A加尾信号区对生物表型的影响有限。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
古珍珍 杨新鑫 胡建尊 项松平 王剑 王军 徐志彬 王成辉
酪氨酸酶是生物体黑色素合成的关键限速酶，黑色斑纹是瓯江彩鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ Ｃａｒｐｉｏ ｖａｒ．Ｃｏｌｏｒ）体色的主要特点之一。以瓯江彩鲤的５种体色选育系Ｆ５为材料，探讨酪氨酸酶基因５个外显子及其在不同体色间的变异特性和承受选择压力的敏感性。结果发现：酪氨酸酶基因外显子１和外显子５的核苷酸变异率最高，选择性位点最多，易承受到选择压力；５个外显子的非同义替换率（ｄ＿ｎ）与同义替换率（ｄ＿ｓ）的比值（ω值）均小于１（０．１０～０．６７），表明它们均受到净化选择压力；不同体色瓯江彩鲤的酪氨酸酶基因也均受到净化选择压力（ω＝０．１２～０．２３）。应用ｐａＭｌ软件中的Ｍ２ａ和Ｍ８两种模型检测显示：无．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
肖婕 王梦娅 吴绍轩 汪波 胡景杰 包振民
酪氨酸酶蛋白家族(tyrosinase gene family)是一类调控黑色素合成的关键酶,在黑色素细胞形成的过程中起着不可替代的作用,然而Tyr基因家族在东星斑体色形成中的潜在机制尚不清楚。豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)俗称东星斑,是我国重要的热带经济养殖鱼类,但是人工养殖的东星斑因环境等变化而逐渐出现体色变淡或者变黑的现象,严重影响其品质和经济价值。本研究从东星斑全基因组中共筛选鉴定获得5个Tyr基因家族成员,氨基酸序列比对结果显示不同物种间的同源基因保守性较高,尤其是Tyr家族典型的酪氨酸酶功能域在不同物种各成员之间均具有高度保守性。系统发育和共线分析均显示东星斑Tyr基因家族进化过程中存在基因复制和丢失现象。此外,荧光定量PCR结果表明Tyr基因家族所有成员在东星斑黑色个体的皮肤组织中表达量均显著高于红色个体(P<0.05)。本研究初步鉴定和分析了东星斑Tyr基因家族在其体色形成中的作用,旨为深入解析东星斑酪氨酸蛋白酶基因家族的进化及功能机制提供依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
赵博文 李琪 王九龙 于红
黑色素是一种广泛存在于动物界的生物色素,而酪氨酸酶被认为是一种重要的调控黑色素合成的关键酶。实验以3种壳色的长牡蛎选育品系为材料,使用PCR-SSCP的方法对长牡蛎酪氨酸酶基因CgTyr1进行SNP分型筛选,将突变位点与不同壳色性状进行关联分析。结果显示,酪氨酸酶基因的外显子上存在23个SNP位点,其中11个SNP位点与壳色性状极显著相关;在这11个SNP位点中,检测到有3个SNP位点为有义突变(c.591C/T、c.632G/A和c.1155T/C),分别导致不同的氨基酸突变(Ala122Val、Gly136Ser和Phe310Ser);利用极显著关联的11个SNP位点,为每种壳色群体建立了1种单倍型,并在验证组中得到了确认。研究表明,长牡蛎酪氨酸酶基因的单个碱基突变和以此构建的单倍型与壳色性状存在显著的关联。本研究筛选出的SNP位点和构建的单倍型为长牡蛎壳色品系选育提供了重要的参考资料。
[期刊] 水产学报
[作者]
王巍 胡红霞 孙向军 牛翠娟
为了解色素控制基因与体色分布的关系,实验用分子克隆技术得到了锦鲤酪氨酸酶(tyrosinase,Tyr)cDNA基因序列,并利用半定量PCR的方法分析了酪氨酸酶基因在锦鲤不同品系和组织中的表达差异。实验得到了长约1 779 bp锦鲤酪氨酸酶cDNA基因,其包括长1 608 bp开放阅读框,编码535个氨基酸。cDNA、蛋白水平序列分析和系统发育分析都表明酪氨酸酶在鱼类间的保守性要高于鱼类与其他脊椎动物间的保守性。半定量分析研究显示,酪氨酸酶基因在皮肤、肝、心、脑和眼中都有表达,其中眼部和黑色皮肤表达最高,其次是脑,红色和黄色皮肤,肝和心的表达最低。不同品系同组织间眼、肝、心、脑的酪氨酸酶基因表...
关键词：
锦鲤 酪氨酸酶基因 半定量分析 黑色素
[期刊] 水产学报
[作者]
夏立群 童邦卓 徐亮 苏泽杰 陈锐敏 廖保山 鲁义善
這鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾病。這鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphtase,PTP)基因,生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白。本实验对這鱼诺卡氏菌PTP进行了基因克隆、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和线粒体膜电位检测,结果显示,在這鱼诺卡氏菌胞外产物中质谱鉴定到了PTP肽段,证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究观察到PTP-GFP融合蛋白均匀地分布在FHM细胞中,
[期刊] 水产学报
[作者]
王良炎 田雪 庞小磊 李梦荣 李学军
为探究Tyrosinase(Tyr)基因在黄河鲤体色形成中的作用,利用生物显微镜对黄河鲤黑色鳞片、银色鳞片、鳍条色素细胞的组成进行观察,并利用RACE克隆黄河鲤Tyr基因全长cDNA序列,荧光定量PCR分析其在不同组织中的表达情况,Western blot印迹和免疫组织化学方法检测其蛋白的表达定位。结果显示,黄河鲤具有黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞3种色素细胞,3种色素细胞的数量、种类和分布在不同组织中存在较大差异。黄河鲤Tyr基因cDNA全长1717 bp(GenBank ID:No.KY305667
关键词：
黄河鲤 体色 黑色素 Tyr基因
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
杨新鑫 王成辉 马玉清 项松平 王剑
瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)是分布在我国瓯江流域的一种鲤科鱼类,色彩艳丽,体形优美,深受人们喜爱。瓯江彩鲤有5种基本体色:"全红"、"大花"、"麻花"、"粉玉"和"粉花",是研究鱼类体色遗传的良好材料和理想模型。酪氨酸酶(tyrosinase)是影响黑色素合成的关键酶,其转录的提前终止会导致黑色素无法合成。采用RACE技术从瓯江彩鲤皮肤转录本中克隆5种体色酪氨酸酶基因全序列,并对序列进行分析。发现在瓯江彩鲤的5种体色中,酪氨酸酶基因cDNA序列长度存在差异:"全红"为2 100 bp,"麻花"为2 107 bp,"大花"为2 073 bp,"粉玉"为1 976...
关键词：
瓯江彩鲤 体色 酪氨酸酶基因
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王贤丽 张玉喜 孟亮 陈松林
本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)从大菱鲆(Scophthalmus maximus)脾脏cDNA文库中克隆得到T淋巴细胞酪氨酸激酶(LCK)全长cDNA序列。该序列包含193bp的5′末端非编码区(5′UTR),1506bp的开放阅读框(ORF)和300bp3′UTR,整个开放阅读框编码502个氨基酸。系统发生分析表明,大菱鲆LCK基因与红鳍东方鲀(Fugu rubripes)和黑青斑河鲀(Tetraodon nigroviridis)的亲缘关系最近。在大菱鲆正常组织、胚胎细胞(TEC)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染的免疫器官组织中对LCK基因进行了RT-P...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姜俊兵 于秀菊 贺俊平 董常生
【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在羊驼皮肤中的表达进行定位。【结果】不同毛色羊驼皮肤组织中均有TYR基因mRNA的表达,有色被毛皮肤组织中TYR的基因mRNA表达量显著高于白色被毛组织的表达量;在有色被毛皮肤组织中,TYR阳性反应区主要集中于毛球部位,即毛根成形部;而白色被毛组织中,TYR阳性反应区主要位于毛根壶腹部及膨大部,即毛根永久部。【结论】综合分析TYR基因mRNA表达量及...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁莹莹 谢运法 胡传活 陈志英 邓祝新 冯显钤 许春荣 刘德玉 唐胤晟 李铭
【目的】探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据。【方法】采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blotting、SDS-PAGE、免疫荧光、ELISA和实时荧光定量PCR等检测各组精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平、精子不同部位蛋白酪氨酸磷酸化位点变化情况、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)活性及黏附蛋白家族基因(AQN1、AQN3、AWN、PSP-Ⅰ和PSP-Ⅱ)和精子运动抑制因子(SPMI)基因mRNA的表达水平,分析金雀异黄酮对冻融猪精子的保护机制。【结果】与CK组相比,G组的32和69 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平、顶体+顶体后区磷酸化位点、PKA活性显著降低(P<0.05,下同);AWN基因相对表达量极显著升高(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高思语 王晓娟 齐玮瑜 姜宇辰 张莉
为探究固原乌鸡黑色素分布沉积特征，以及在不同日粮酪氨酸水平下黑色素相关基因表达量的变化，明确酪氨酸对固原乌鸡黑色素形成的影响。选取4周龄健康、体质量差异不显著的固原乌鸡150只，随机分为5组，每组3个重复，每个重复10只。日粮酪氨酸添加水平分别为0、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%，饲养至12周龄末，利用电镜技术观察不同组织中黑色素的分布特征，利用免疫组织化学和荧光定量PCR方法检测不同组织中黑色素相关基因表达量的变化。试验结果显示：固原乌鸡皮肤、气管与小肠中存在黑色素细胞且大都已分化成熟。TYR在肺脏组织有阳性反应，TYRP1在肌肉与肝脏组织有阳性反应，MITF、CREB1在肺脏、肝脏、小肠、胸肌组织中均有阳性结果。在不同日粮酪氨酸水平下，MITF、TYR、TYRP1基因的表达量与黑色素含量成一定的线性相关。结果表明，固原乌鸡组织黑色素沉积特征与组织中黑色素颗粒合成多少相关，而黑色素合成过程中TYR、MITF可能是其主要关键调控基因，日粮中添加酪氨酸能够促进其表达。
[期刊] 水产学报
[作者]
殷晓雯 谭素建 许飞 郇聘 刘保忠
为研究软体动物贝壳发育区形成机制，实验通过扫描电子显微镜观察分析了皱纹盘鲍贝壳发育区的形态特征，鉴定了皱纹盘鲍的酪氨酸酶(Hdi-Tyr1和Hdi-Tyr2)、过氧化物酶(Hdi-Prx1、Hdi-Prx2)和碱性磷酸酶(Hdi-Alp)等5个贝壳形成相关的候选基因，并通过整装原位杂交技术解析了各基因在皱纹盘鲍早期幼虫发育过程中的表达模式。结果显示，皱纹盘鲍贝壳发育区由至少3种特征差异明显的细胞组成，酪氨酸酶基因(Hdi-Tyr1和HdiTyr2)在担轮幼虫的贝壳发育区呈“U”形表达，在面盘幼虫外套膜的长柱状细胞中表达，而碱性磷酸酶(Hdi-Alp)和过氧化物酶(Hdi-Prx1和Hdi-Prx2)基因仅表达在幼虫的担轮环和头部。研究表明，Hdi-Tyr1和Hdi-Tyr2基因可能参与了皱纹盘鲍担轮幼虫和面盘幼虫的贝壳形成过程，而过氧化物酶基因Hdi-Prx1和Hdi-Prx2以及碱性磷酸酶基因Hdi-Alp并不参与初生壳的发育过程，实验结果为深入解析软体动物的贝壳发育机制和贝壳相关性状的种质创新提供了基础支撑。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
苏雅静 孙爱东 孙红男 高雪娟
酪氨酸酶是合成黑色素细胞的关键酶,为了探讨竹笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶活性的影响,对竹笋壳中的黄酮类物质进行提取纯化,并采用酶动力学方法研究了笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制作用。结果表明:笋壳黄酮提取物导致单酚酶和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为5.6和4.6mg/mL;笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,8.0mg/mL的笋壳黄酮提取物可使单酚酶的迟滞时间从1.4min延长到4.2min;笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制,笋壳黄酮提取物对游离酶的抑制常数(Ki)为3.1mmol/L,对酶底物络合物的抑制常数(Ki...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
米智 曾彪 徐水 朱勇
为了探讨氟化物对家蚕代谢机制的影响，以家蚕耐氟品种Ｔ６和氟化物敏感品种７３４为研究材料，从５龄起蚕开始分别添食经５０、１００、２００、４００ ｍｇ／ｋｇ Ｎａ Ｆ溶液浸泡后的新鲜桑叶，检测家蚕血液和中肠中酪氨酸酶活性的变化。结果表明，在血液中，７３４添氟组酪氨酸酶活性是对照组的０．７９～１．７１倍，Ｔ６约是对照组的０．５９～０．９６倍。７３４对照组和２个低浓度添氟组（５０、１００ ｍｇ／ｋｇ Ｎａ Ｆ处理组）之间差异极显著（Ｐ＜０．０１），２个高浓度添氟组之间差异显著（Ｐ＜０．０５）；Ｔ６对照组和最高浓度添氟组之间的差异极显著。在中肠中，７３４添氟组酪氨酸酶活性是对照组的０．６０～１．１６倍，．．．
关键词：
家蚕 氟化物 血液 中肠 酪氨酸酶
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