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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
万丙良 张献龙
以质粒pBI12 1作外源DNA ,对基因枪介导转化水稻花药愈伤的有关参数进行了优化 ,优化值分别为射程 9cm ,枪膛氦气压力 110 0psi,真空度 36 0 0～ 3733Pa ,轰击次数 2次。轰击前后愈伤经 0 .4mol/L甘露醇处理可提高转化效率。在优化条件下将Xa2 1基因导入籼型光敏核不育水稻W945 1S ,获得了单倍体植株 ,经人工染色体加倍得倒二倍体转基因植株。白叶枯病菌接种鉴定结果表明其抗性有明显提高
关键词：
水稻 花药愈伤 基因枪 转基因
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
齐春辉 韩烈保 梁小红 曾会明 刘君
将含有DREB1A和gus基因的双基因载体质粒包裹在金粉上,以基因枪轰击日本结缕草胚性愈伤组织,以gus基因的瞬时表达研究日本结缕草基因枪转化参数.结果表明,在1 100 psi压力下6 cm的轰击距离、每皿轰击2次的转化效果最好,而金粉和质粒用量对转化效率影响不显著;经过筛选和再生培养,检测到gus基因的稳定表达,并获得日本结缕草潮霉素抗性株系,PCR-Southern杂交证实外源DREB1A基因已整合到日本结缕草基因组中.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王海凤 韩冉 张东武 刘振华 赵惠贤
【目的】获得转玉米ZmalⅠ基因的安全转基因小麦植株,为研究玉米ZmalⅠ基因在增加小麦籽粒大小和粒质量方面的作用,以及利用基因工程提高小麦产量奠定基础。【方法】以陕农138为供试材料,绿色荧光蛋白基因(GFP)为安全标记基因,利用基因枪法,将由谷蛋白胚乳特异表达启动子启动的ZmalⅠ+GFP融合蛋白基因的过表达载体pGlu-exbessa::ZmalⅠ导入小麦中,并对转基因小麦进行PCR检测。【结果】采用基因枪法共轰击3 000个幼胚,获得再生植株59株,移栽至培养钵后成活52株,成活率为88.1%;利用载体上安全标记基因GFP的特异引物对成活的转化植株进行PCR检测,获得含有GFP基因的阳...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张晓东 李冬梅 徐文英 蒋有绎 胡道芬 韩立新
用基因枪将除草剂Ｂａｓｔａ抗性基因与小麦ＨＭＷ谷蛋白亚基基因导入小麦获得转基因植株ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＷｈｅａｔｂｙＢｉｏｌｉｓｔｉｃＢｏｍｂａｒｄｍｅｔＴｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇＢａｓｔａＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＧｅｎｅａｎｄＮ...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
欧阳波 李汉霞 张俊 叶志彪
通过根癌农杆菌介导转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)下胚轴 ,将外源双价基因导入番茄 ,获得了一批卡那霉素抗性苗 ,经PCR检测证明外源基因已经整合到番茄基因组中。研究表明番茄下胚轴是良好的遗传转化受体 ,具有操作简便 ,节省番茄材料和再生速度快的特点。烟草细胞看护培养能够提高外植体的转化效率和减少农杆菌对外植体的污染
关键词：
番茄 下胚轴 转化再生
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴关庭 陈锦清 胡张华 郎春秀 陈笑芸 王伏林 金卫 夏英武
为改良草坪型高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)的耐逆性,以成熟种子来源的胚性愈伤组织为受体材料,通过农杆菌介导法将拟南芥(Arabidopsis thaliana)耐逆相关CBF1基因导入4个供试品种的基因组,经GUS染色、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得了112株转基因植株,转化频率为0.92%~2.87%,不同品种间存在差异。试验表明,在高盐与高渗胁迫下,转基因植株具有显著生长优势,存活率极显著高于非转化对照植株,经低温、高温、干旱和高盐等逆境胁迫处理后的叶片相对电导率平均较对照植株低25%~30%,证明转基因植株的耐逆性有所增强。考察发现,非胁...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉宏 韩长磊 张椿雨 肖勇 曾红霞 彭金光 代书桃 孟金陵
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。
关键词：
西瓜 转化 农杆菌 gus 转基因植株
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘小红
杂草危害已成为玉米(Zea mays L.)栽培中的一大难题,采用常规人工拔草的方式去除杂草存在操作麻烦、成本高等问题,而培育抗除草剂转基因玉米是解决这一问题的有效途径。为了获得生产中可用的抗草丁膦(phosphinothricin,PPT)除草剂的优良转基因玉米,本研究通过基因枪法将p35SIH3X质粒上的bar基因导入了优良玉米自交系18-599红幼胚诱导的愈伤组织。转化后的愈伤组织经过在含Bialaphos浓度(以有效成分PPT计算)为6,10,15mg.L-1的选择培养基中筛选3次以后进行分化,长出的小苗再经炼苗后移栽至大田,最后得到长大成活植株75株,结实收获8株。通过PCR(pol...
关键词：
玉米 除草剂 基因枪 转基因 草丁膦
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李轶女 孙丙耀 苏宁 孟祥勋 张志芳 沈桂芳
【目的】建立外源基因在水稻叶绿体中的表达体系。【方法】通过分析已公布的水稻叶绿体基因组全序列及其基因分布特点,选择ndhF与trnL的基因间序列作为除草剂PPT抗性基因bar定点整合的位点。以水稻叶绿体基因组DNA为模板,采用PCR方法克隆了两个适于水稻叶绿体基因组遗传转化的同源片段,构建了含水稻叶绿体16S高效表达启动子、外源基因bar、psbA基因的3′序列(终止子)以及两个同源片段的水稻叶绿体特异表达载体pRB。【结果】采用基因枪法转化水稻品种中花10号幼穗诱导的愈伤组织,并再生植株,获得转化体后代种子。对转化植株进行的分子检测结果表明,外源基因bar可能被整合到水稻叶绿体基因组中。后代...
关键词：
水稻 同源片段 bar基因 叶绿体转化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
霍秀文 云锦凤 米福贵 魏建华 张辉
【目的】利用基因工程技术对冰草属植物进行遗传改良在国内外尚属空白,为加快冰草属植物种质改良进程,培育更为优良的冰草品种,本研究在多年冰草种质资源搜集与育种的基础上,开展冰草基因工程研究。【方法】以冰草属(Agropyron Gaertn.)中的一个优质种间杂种–“蒙农杂种”冰草(A.cristatum×A.desertorum cv.‘Hycrest-Mengnong’,)为材料,在以幼穗为外植体建立的冰草组织培养再生体系基础上,以调控脯氨酸生物合成最后一步的关键酶的突变体基因p5CS为目标基因,bar基因为筛选标记基因,进行共转化,利用基因枪轰击冰草幼穗诱导的愈伤组织。【结果】获得转基因植株...
关键词：
冰草 p5CS基因 共转化 转基因植株
[期刊] 华北农学报
[作者]
张艳敏 郭北海 丁占生 温之雨 蒋春志 李辉 李洪杰 陈受宜
针对农杆菌转化系统的诸多影响因素进行了系统研究,建立了有效的小麦农杆菌转化系统;利用石4185、石6365的花药愈伤组织为受体,进行了甜菜碱醛脱氢酶和胆碱氧化物酶等目的基因的转化研究。
关键词：
小麦 农杆菌 转基因 转化效率
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝曜山 张欢欢 杜建中 王亦学 孙毅
类受体激酶基因Ｏｓ ｓＩＫ１具有通过激活抗氧化系统，增强水稻对于干旱和盐胁迫抗性的作用。为了丰富可利用的作物抗旱基因，获得具有较高抗旱水平的玉米新种质，通过超声波辅助花粉介导法，将水稻类受体激酶基因Ｏｓ ｓＩＫ１导入玉米自交系郑５８中，并对转化株进行卡那霉素筛选及Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３的ＰＣＲ及ｓＯｕＴｈｅＲｎ ＢｌＯＴＴＩｎｇ杂交等分子检测，获得转化植株并在Ｔ３获得转基因纯合株系。对Ｔ３转基因玉米和非转基因玉米对照以１６．１％的Ｐｅｇ模拟水分胁迫进行抗旱性分析。结果表明，与对照相比，在水分胁迫处理下，转基因玉米株系叶片相对含水量提高了７．４％～１９．８％，叶绿素含量提高了１１．３％～１０６．９％，．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
丁玉梅 杨正安 周晓罡 张绍松 孙茂林
构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因Cry1Ab的烟草叶绿体表达载体pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组trnI-trnA为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因aadA、质体特异性启动子Prrn和终止子TpsbA.利用基因枪转化法,将pCTBt导入栽培烟草红花大金元叶绿体,经过4次继代筛选,获得9个抗壮观霉素的转化株系,转化频率为0.3～0.6株/枪,其中有5个株系PCR检测结果为阳性,初步确定Cry1Ab基因已整合到烟草叶绿体中.转基因烟草抗斜纹夜蛾试验表明,幼虫死亡率为10%～75%,转基因烟草植株具有较好的杀虫活性.
[期刊] 华北农学报
[作者]
董云洲
构建了 Imtl(Inositol methyltransferase,肌醇甲基转移酶)基因的高效植物表达载体pDH01。通过农杆菌介导的遗传转化法,得到了转基因植株。将收获的转基因 F_1烟草种子,发芽后以1.5％NaCl溶液浇灌,转Imtl基因烟草后代具有明显的耐盐能力,在株高、单株鲜重、生长势等指标上具有显著优势。
关键词：
烟草 肌醇甲基转移酶 转基因 耐盐性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
叶兴国 Shirley Sato 徐惠君 杜丽璞 Tom Clemente
以预培养 4 d的小麦幼胚愈伤组织为受体 ,L B培养基上激活培养 3 d或 AB培养基上激活培养 4 d,并在WCC培养基中重悬的 C5 8c1农杆菌菌系为供体 ,将含有目的基因、标记基因的 p PTN2 4 9、p PTN 2 5 4、p PTN2 70、p SIS-GFP等重组 DNA质粒转入了小麦 ,经在含 10～ 5 0 mg/ L geneticin( G4 18)、5 0 mg/ L cefotaxime、5 0 m g/ L vancomycin、5 0 m g/ L ticillicin选择培养基上多次选择 ,移栽前利用 npt EL ISA检测 ,移栽后利用叶片离体退绿、P...
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小麦 农杆菌 转基因植株 单拷贝整合
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