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[期刊] 中国农业科学
[作者]
高学文 姚仕义 Huong Pham Joachim Vater 王金生
利用MALDI TOF MS技术 ,鉴定了将lpaB3基因转入枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis 168菌株所构建的工程菌GEB3产生的脂肽类抗生素种类。结果表明 ,GEB3仅产生表面活性素 (surfactin) 1种脂肽类抗生素。经LC MS分析 ,GEB3产生由 13、14和 15个碳原子的脂肪酸链构成的标准表面活性素变异体 (standardsurfactinisoforms)。生物活性检测表明 ,该工程菌产生的脂肽类抗生素表面活性素具有抑制小麦纹枯病菌和稻瘟病菌菌丝生长的作用
[期刊] 中国农业科学
[作者]
罗楚平 王晓宇 陈志谊 刘永锋 张杰 刘邮洲 聂亚锋 余俊杰 尹小乐
【目的】明确枯草芽孢杆菌Bs916(Bacillus subtilis 916)分泌的脂肽化合物Bacillomycin L操纵子、结构和生物活性,阐明枯草芽孢杆菌Bs916防治病害的分子生化机制。【方法】采用LA-PCR和基因步行的方法克隆bacillomycin L的操纵子Bac;通过生物信息学的方法分析Bac操纵子的遗传特征;运用基质辅助解离质谱法测定Bac操纵子合成的脂肽类化合物bacillomycin L的分子量;利用碰撞诱导解离(CID)技术获得化合物的典型结构特征离子碎片测定bacillomycin L肽端的一级结构;通过平板对峙实验和溶血活性试验测定bacillomycin L...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
向亚萍 陈志谊 罗楚平 周华飞 刘永锋
【目的】明确55株芽孢杆菌(Bacillus spp.)菌株对3个植物病原真菌(小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum)抑菌活性及与其产生的脂肽类抗生素种类的定性定量关系。【方法】采用平板对峙培养分别测定55株芽孢杆菌活体菌及其脂肽类抗生素粗提物对3个真菌的抑菌活性;根据脂肽类抗生素合成相关基因序列srf A、itu A和fen A对55株芽孢杆菌进行PCR扩增;采用质谱及液相色谱分析55株芽孢杆菌脂肽类抗生素的种类、数量。【结果】55株芽孢杆菌菌株及其...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乔俊卿 刘邮洲 张荣胜 刘永锋
[目的]枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌,通过优化其摇瓶发酵工艺,从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量,为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法]以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)为指示菌,利用酸沉淀法提取T-500菌株发酵液中的脂肽类抗生素,并进行脂肽抗生素粗提液的抑菌效果分析,筛选影响抑菌效果的发酵培养基主成分;随后通过Plackett-Burman试验设计、中心组合试验设计和响应曲面法,优化T-500菌株高产脂肽类抗生素的发酵培养基成分和发酵条件。[结果]T-500菌株高产脂肽类抗生素的最佳培养基为:黄豆饼粉7.00 g·L~(-1),蛋白胨4.92 g·L~(-1),酵母粉1.90 g·L~(-1),小麦粉5.00 g·L~(-1),玉米糊5.00 g·L~(-1),NaCl 1.00 g·L~(-1),MgSO_40.20 g·L~(-1),MnSO_45.0 mg·L~(-1),FeSO_40.5 mg·L~(-1)。最佳发酵培养条件为:装液量500 mL三角瓶装105 mL,接种量0.87%,发酵时间41.35 h,温度28℃,转速180 r·min~(-1)。利用最佳摇瓶发酵工艺,T-500菌株所产生的脂肽类抗生素对纹枯病菌的抑菌带最宽,达(11.23±0.15)mm,菌含量达(7.41±1.18)×109CFU·mL~(-1)。经摇瓶发酵试验和抑菌活性验证,理论预测值与实际值无显著差异。质谱和色谱检测表明:优化发酵工艺后产生的Surfactin含量较基础培养基提高了48.2%,Iturin含量较基础培养基提高了180.9%;优化发酵工艺后检测到了Fengycin的产生,但优化前未发现Fengycin的产生。[结论]利用响应曲面法成功优化了枯草芽胞杆菌T-500产脂肽类抗生素的摇瓶发酵工艺;优化后,T-500产脂肽类抗生素产量增加,抑菌活性增强。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乔俊卿 刘邮洲 张荣胜 刘永锋
[目的] 枯草芽胞杆菌 (Bacillus subtilis) T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌，本研究通过优化其摇瓶发酵工艺，从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量，为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法] 本研究以水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）为指示菌，利用酸沉淀法提取T-500菌株发酵液中的脂肽类抗生素，并进行脂肽抗生素粗提液的抑菌效果分析，筛选影响抑菌效果的发酵培养基主成分；随后通过Plackett-Burman试验设计、中心组合试验设计（
[期刊] 中国农业科学
[作者]
向亚萍 周华飞 刘永锋 陈志谊
【目的】从解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）生防菌株Ｂ１６１９发酵液上清中分离脂肽类抗生素，分析其抑菌活性相关成分，为应用解淀粉芽孢杆菌Ｂ１６１９菌株防控番茄枯萎病提供依据。【方法】利用特异性引物对Ｂ１６１９中３种脂肽类抗生素合成相关基因ｓｆｐ、ｉｔｕａ和ｆｅｎＢ进行检测；通过盐酸沉淀、甲醇抽提法等方法提取脂肽类抗生素粗提物；用ｓｕｐｅｌｃｌｅａｎ～（ｔｍ） ｌｃ～（－１）８柱及ｐＨａｓｅ Ｈｆ－ｎＨ２柱对３种脂肽类抗生素粗提物进行分离；通过ｍａｌＤｉ－ｔｏｆ－ｍｓ和Ｈｐｌｃ分析、鉴定３种脂肽类抗生素；采用平板对峙培养分别测定３种脂肽类抗生素粗提物对番茄枯萎．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王雪 田佳 徐琳琳 卢宝慧 杨丽娜 高洁
【目的】提高生防枯草芽孢杆菌ＪＮ２０９的稳定性及生防活性。【方法】利用基因工程技术，构建含ｈｒｐＺｐｓｇ１２基因的分泌表达载体，采用电转化方法将从大豆细菌性斑点病菌（ｐｓｅｕｄｏｍｏＮａｓ ｓｙｒｉＮｇａｅ ｐｖ．ｇｌｙｃｉＮｅａ）中克隆到的ｈｒｐＺｐｓｇ１２基因转化至枯草芽孢杆菌ＪＮ２０９中，同时采用抑菌圈法测定宿主菌与基因工程菌抑菌活性的变化，评价其作为生物农药在田间对烟草病毒病的生防效果。【结果】成功构建了重组枯草芽孢杆菌基因工程菌ＪＮ２０９／ｐＷＢ９８０－ｈｒｐＺｐｓｇ１２。抑菌活性分析表明，基因工程菌株在保持原始宿主菌株抑菌活性的同时，对部分靶标菌的抑菌效果有明显提高。烟草病毒病田间．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王雪 田佳 徐琳琳 卢宝慧 杨丽娜 高洁
【目的】提高生防枯草芽孢杆菌JN209的稳定性及生防活性。【方法】利用基因工程技术，构建含hrpZPsg12基因的分泌表达载体，采用电转化方法将从大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)中克隆到的hrpZPsg12基因转化至枯草芽孢杆菌JN209中，同时采用抑菌圈法测定宿主菌与基因工程菌抑菌活性的变化，评价其作为生物农药在田间对烟草病毒病的生防效果。【结果】成功构建了重组枯草芽孢杆菌基因工程菌JN209/pWB980hrpZPsg12。抑菌活性分析表明，基因工程菌株在保持原始宿主菌株抑菌活性的同时，对部分靶标菌的抑菌效果有明显提高。烟草病毒病田间小...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王雪 田佳 徐琳琳 卢宝慧 杨丽娜 高洁
【目的】提高生防枯草芽孢杆菌JN209的稳定性及生防活性。【方法】利用基因工程技术,构建含hrpZPsg12基因的分泌表达载体,采用电转化方法将从大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)中克隆到的hrpZPsg12基因转化至枯草芽孢杆菌JN209中,同时采用抑菌圈法测定宿主菌与基因工程菌抑菌活性的变化,评价其作为生物农药在田间对烟草病毒病的生防效果。【结果】成功构建了重组枯草芽孢杆菌基因工程菌JN209/pWB980-hrpZPsg12。抑菌活性分析表明,基因工程菌株在保持原始宿主菌株抑菌活性的同时,对部分靶标菌的抑菌效果有明显提高。烟草病毒病田间...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
祝发明 刘辉 曹要玲 杨明明 曹斌云
从枯草芽孢杆菌1A 747菌株基因组克隆Am yX基因信号肽序列,构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pYGAm yX,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGAm yX)。采用重叠PCR技术,将Am yX基因信号肽突变,使其N端正电荷增加,H区疏水性降低,利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pYGMUT,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGMUT)。对W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT)的表达产物进行检测,研究Am yX基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响。结果表明,W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT均...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高学文 齐放军 姚仕义 王金生
研究了枯草芽孢杆菌Bs5 5和Bs90菌株分别与苏云金芽孢杆菌Bt1和Bt2菌株在共培养条件下的菌体生长、抗菌活性物质脂肽类化合物和杀虫活性物质伴孢晶体蛋白的产生状况。结果表明 ,Bs5 5与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs5 5相似 ,未检测到伴孢晶体蛋白 ,但有Bt特异性蛋白存在 ;Bs90与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs90有相对较大的差别 ,检测到伴孢晶体蛋白。说明Bs与Bt可以共生 ,组合适当时可以产生各自的生物活性物质
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄天培 姚帆 潘洁茹 邱思鑫 杨梅 黄必旺 黄志鹏
枯草芽孢杆菌内生亚种BS-1aiiA基因测序结果表明,该基因(GenBank登录号DQ000640)由753个碱基组成,其编码的蛋白质含有250个氨基酸残基,与10个已报道的具有减弱欧文氏菌胡萝卜亚种致病力的AiiA蛋白酶氨基酸序列总的相似性为82%.它们均含有相同的氨基酸序列保守区.Signal P分析结果显示,BS-1 AiiA没有信号肽序列,并利用Swiss-model预测、分析了BS-1 AiiA蛋白的三维结构.
[期刊] 华北农学报
[作者]
王文夕 孔建 赵白鸽 程红梅 申效诚 张桂芬
枯草芽孢杆菌Ｂ－９０３菌株是从郑州果园中筛选出的，它代谢产生的抗菌物质对多种植物病原菌具有强抑制作用。通过对其抗菌物质产生条件的研究认为，在ＮＹＤＡ培养液中，培养液初始ｐＨ值为７时，最有利于抗菌物质的产生；振荡培养１１２ｈ，培养滤波的抑菌活性可达最大值；不同初始接菌量对抗菌物质的产生时间影响不大；在２５０ｍｌ三角瓶中，随装液量减少，培养液抑菌活性有增大趋势；大米粉和豆饼粉是最适合产生抗菌物质的碳、氮源；调节培养滤液ｐＨ值至４为抑菌活性物质最简便的保存方法，振荡培养１１２ｈ的培养滤液的最低抑菌浓度为稀释２３１８倍。
关键词：
抑菌物质,抗菌素,枯草芽孢杆菌
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张西锋 李万芬 袁新宇 张炜炜 刘波 王俊 杨明明
为了克服生物素生物合成中的抑制作用,提高生物素操纵元基因本底水平的表达,分别构建了整合表达载体pGJj01和pGJj02,通过双交叉整合的方式先后将线性化的pGJj01和pGJj02整合到枯草芽孢杆菌AS1094的染色体上,构建了枯草芽孢杆菌GJZ01,用强启动子P43-1替换掉生物素操纵元自身的启动子Pbiotin,并在bioB和bioI基因间加入强终止子和强启动子P43-2。经PCR和Southern检测表明,整合构建正确。试验可为下一步研究生物素操纵元基因表达提供良好的宿主菌素材。
关键词：
枯草芽孢杆菌 生物素 同源重组
[期刊] 淡水渔业
[作者]
阎斌伦 王笃彩 李士虎 徐家涛 戴岩 徐国成 时冬晴
通过改变水体的盐度、温度、pH值等环境因子的药物敏感试验 ,观察环境因子的改变及不同抗生素对枯草芽孢杆菌生长的影响。结果表明 ,枯草芽孢杆菌的活性受环境因子及抗生素的影响较大 ,酸性环境、低温及多种常用抗生素对芽孢杆菌有明显的抑制作用 ,其最适生长环境是 :pH 7 5～ 8 5 ,温度 6～30℃ ,而盐度对枯草芽孢杆菌的生长影响较小。
关键词：
枯草芽孢杆菌 活性 环境因子 抗生素
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