以抗病家系与易感家系半滑舌鳎为材料,进行哈维弧菌感染实验,并对易感家系感染前(CsSU)、易感家系感染后(CsSC)、抗病家系感染前(CsRU)、抗病家系感染后(CsRC)4组进行转录组测序,根据RNA-seq数据挖掘半滑舌鳎长链非编码RNA信息;通过生物信息学分析,筛选出与抗哈维弧菌病相关的差异长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)。结果显示,共识别出4 584个lncRNA座位,包含5 714个转录本;其基本特征与编码基因的比较分析,lncRNA的GC含量低于编码基因,单外显子基因数多于编码基因,转录本的平均长度长于编码基因,基因表达量低于编码基因。对4组样品进行两两比较(CsRU vs CsSU、CsRC vs CsSC、CsRC vs CsRU、CsSC vs CsSU)分别筛选出818、813、261、140个差异表达lncRNA,其中CsRU与CsSU之间、CsRC与CsSC之间lncRNA数目差异最多,通过聚类分析确定了各实验组的表达模式之间的联系,CsRU与CsSU之间的表达模式最为相近。通过共表达分析,预测出lncRNA和274个编码基因可能存在14 539种相互关系,并进行了功能注释,进而筛选出7个关键lncRNA。qRT-PCR结果显示,差异表达lncRNAs的表达模式和转录组数据得到的基本一致。研究结果为揭示lncRNA在半滑舌鳎抗哈维弧菌免疫调控反应中的作用提供重要的参考数据。

【目的】探究调控具有不同产仔数的川乡黑猪和藏猪的猪子宫内膜妊娠过程的相关miRNA、lncRNA及靶基因，进一步揭示影响不同品种猪子宫内膜妊娠相关的非编码RNA富集的信号通路。【方法】对平均产仔数为11.35和6.7的川乡黑猪和藏猪第2、第5胎次的子宫内膜进行分离，提取RNA，质检合格后进行转录组测序，测序数据经过拼接、比对到miRNA和lncRNA、以及预测其靶基因，进一步进行GO和KEGG富集分析筛选到调控川乡黑猪和藏猪不同产仔数的候选基因以及信号富集通路。【结果】不同胎次的川乡黑猪和藏猪之间存在多个miRNA、lncRNA及靶基因的差异表达，其中第2胎次具有1571个miRNA和2042个lncRNA差异表达，第5胎次具有1042个miRNA和2096个lncRNA差异表达。进一步根据靶基因的GO和KEGG富集分析发现川乡黑猪在促性腺激素释放激素(GnRH)分泌、ECM受体互作以及Wnt信号通路等的富集程度高于藏猪。同时发现川乡黑猪相比于藏猪有醛固酮调节钠重吸收、谷胱甘肽代谢、果糖和甘露糖代谢等过程的富集。此外，已鉴定的关键候选调控基因包括FSHR(Follicle stimulating hormone receptor)、DBX1（Developing brain homeobox 1）、ARID2（AT-rich interaction domain 2）、TNC(Tenascin C)、NT5C2（Neuropilin 2）、LAMC3(Laminin subunit gamma 3)、MADD（MAP kinase activating death domain）等。【结论】高产仔数的川乡黑猪相比于低产仔数的藏猪在子宫内膜妊娠过程中有更高的促性腺激素释放激素(GnRH)分泌、ECM受体互作以及Wnt信号通路富集（GO分析结果），同时也有代谢途径的参与（KEGG分析结果）。涉及到的关键调控基因主要有FSHR、DBX1等，并且这些基因的表达差异进行了qPCR验证。总的来说，本研究为探究非编码RNA在猪子宫内膜妊娠过程中的功能及其分子调控机制提供了新的思路。

通过建立半滑舌鳎家系对其白化现象进行了初步研究。实验共建立半滑舌鳎家系17个,首先对这17个家系白化率进行了抽样统计和方差分析,并对部分家系的白化个体的眼睛异常率进行了统计;其次,选取其中白化率较高的4个家系,对白化个体和正常个体的生长情况进行了对比;最后,对白化率较高的4个家系白化个体和正常个体的抗鳗弧菌病能力进行了比较。结果发现,不同家系个体白化率有较大的差别,3号家系白化率最高,高达94.50%,15号、33号和37号家系白化率为0.00%;父本为养殖群体的家系的平均白化率最高,为19.68%,父本为野生群体的家系的平均白化率最低,为3.21%,父本为选育群体的平均白化率为7.50%,但...

为研究HIRA基因在半滑舌鳎胚胎发育中的作用及其组织差异表达,以半滑舌鳎为研究对象,采用同源克隆策略从其精巢中分离了长度为764bp的HIRA部分cDNA序列,该片段编码254个氨基酸,具有5个WD结构域。对氨基酸进行比较发现,半滑舌鳎HIRA与比较物种的氨基酸序列具有很高的同源性,与红鳍东方鲀亲缘关系最近。实时定量PCR分析发现,HIRA mRNA在多细胞期到原肠胚期的表达量较高,表明HIRA对胚胎发育起重要作用;HIRA在不同组织中表达差异显著,其中在性腺中表达最高,推测HIRA在维持性腺的功能方面有一定作用。

转录因子Runx2和Osterix在高等脊椎动物骨骼发育的调控过程中具有重要作用。本研究以Runx2和Osterix基因作为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术分析了两个转录因子在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)成鱼的组织表达分布及其在早期发育阶段的表达水平变化。研究结果显示,Runx2和Osterix在半滑舌鳎成鱼的13个组织中具有较广泛的分布,并在脾组织中表达量最高,在背鳍、脑等组织中次之,在肝、肠、胃等组织中仅有微弱的表达。在半滑舌鳎早期发育阶段(卵期、仔鱼、稚鱼和幼鱼),Runx2和Osterix的时序性表达特征如下:1)孵化前,Runx2在卵裂期与原肠期的表达...

转录因子Ｒｕｎｘ２和ＯｓｔｅＲｉｘ在高等脊椎动物骨骼发育的调控过程中具有重要作用。本研究以Ｒｕｎｘ２和ＯｓｔｅＲｉｘ基因作为研究对象，利用实时荧光定量ＰＣＲ技术分析了两个转录因子在半滑舌鳎（ＣｙｎＯｇｌＯｓｓｕｓ ｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）成鱼的组织表达分布及其在早期发育阶段的表达水平变化。研究结果显示，Ｒｕｎｘ２和ＯｓｔｅＲｉｘ在半滑舌鳎成鱼的１３个组织中具有较广泛的分布，并在脾组织中表达量最高，在背鳍、脑等组织中次之，在肝、肠、胃等组织中仅有微弱的表达。在半滑舌鳎早期发育阶段（卵期、仔鱼、稚鱼和幼鱼），Ｒｕｎｘ２和ＯｓｔｅＲｉｘ的时序性表达特征如下：１）孵化前，Ｒｕｎｘ２在卵裂期与原肠期的表达．．．

The tonguefish Cynoglossus semilaevis (G?nther) is a rare fish species in Chinese offing, inhabiting in the warm water bottom. The metaphase chromosome preparation of the fries has been got from their fins by hot air drying methods, while the metaphase chromosomes of one year old young fish which ha...

采用2216E和TCBS培养基分别从患溃疡病半滑舌鳎的肠道和体表病灶分离获得菌株40株,经血平板检验分离菌株的溶血活性,体外筛选并鉴定出3株潜在致病性菌株,即哈维氏弧菌、溶藻弧菌以及副溶血性弧菌。通过将3株潜在致病菌与健康半滑舌鳎的肠道上皮细胞共培养,检测病原菌刺激后半滑舌鳎肠道上皮细胞相关免疫基因的相对表达量及共培养后肠道上皮细胞的凋亡率,对病原菌的致病性进行细胞水平的筛选。结果显示,经哈维氏弧菌刺激后肠道上皮细胞白介素10基因(IL-10)表达量极显著上调,说明哈维氏弧菌引起的共培养上皮细胞免疫反应最为剧烈,且哈维氏弧菌与肠道上皮细胞共培养后导致细胞的凋亡率高达48.3%,其次为溶藻弧菌(36%)和副溶血性弧菌(34.5%),推测哈维氏弧菌为半滑舌鳎溃疡病高致病性弧菌。通过对半滑舌鳎进行浸浴回感实验,结果发现,哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血性弧菌人工回感后第6天半滑舌鳎的累计死亡率分别为100%、95%和75%,与细胞水平检测结果相吻合。实验表明,所筛选到的3株弧菌均具有较强的毒性和致病性,尤其以哈维氏弧菌致病性最强,并由此推测半滑舌鳎溃疡病可能由多种致病菌共同感染所致。

克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Dmrt4基因DNA全序列,得到的序列长度为2 271 bp,包含1个内含子,2个外显子,与其他鱼类的同源性在90%以上。Dmrt4基因在雌性和雄性半滑舌鳎的7个组织中都有表达,有差异表达的组织是脑、垂体和性腺,雄性的表达显著高于雌性(P0.05),但是甲基睾酮处理组的雄鱼和伪雄鱼的表达显著高于对照组的雌鱼和雄鱼(P<0.05)。Dmrt4基因的表达在胚胎发育过程中呈现先升高后降低的趋势,在原肠期表达量最高,显著高于其他几个时期(P<0.05),从...

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长具有明显的性别二态性，性成熟雌鱼体重显著高于雄鱼。鱼体肌肉占体重的40%～60%，肌肉生长是生长性状的核心，而myostatin (mstn)基因是肌肉生长发育的负调控因子，对成肌细胞的增殖具有抑制作用。本研究旨在探究肌肉生长发育过程中，mstn基因在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式及其与雌、雄鱼生长差异的关系。结果显示，在所检测的1龄鱼的9个组织中，mstn在肌肉中的表达量最高。不同发育时期的肌肉组织定量结果显示，1龄和2龄雄鱼中的表达量显著高于雌鱼(P<0.05)，而在选取的其他时期，雌、雄鱼之间的表达量不存在显著差异。原位杂交结果显示，mstn基因的表达位置在肌纤维边缘，即成肌细胞增殖分化的位置。本研究系统研究了肌肉生长发育的负调控因子mstn在半滑舌鳎雌、雄鱼中的时空表达模式，为深入研究半滑舌鳎雌雄生长差异的原因及其机制提供了基础。

采用静水压法处理半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)受精卵以抑制其卵裂并进行染色体加倍,筛选出有效的静水压处理起始时间、处理强度及其持续时间。结果表明,孵化水温(23±0.2)℃时,授精后21.5 min,采用40 MPa的静水压压力,休克处理4.5 min,四倍体诱导效果最好,鱼苗四倍体率达到68.3%。采用流式细胞仪分析了四倍体鱼苗细胞DNA含量,表明四倍体鱼苗细胞DNA含量为二倍体对照鱼苗的2倍。通过染色体制作分析表明四倍体鱼苗的染色体数为84条,而二倍体对照鱼苗的染色体数为42条。本研究采用静水压方法,在国内外首次建立了半滑舌鳎四倍体诱导方法。本项技术的建立旨在为...

对体色相关通路基因的9个错义突变位点进行了测序调查，在体色黑化、体色白化和体色正常的半滑舌鳎小样本群体中，发现其中3个突变位点与体色白化存在显著性相关，进一步通过扩大样本验证，显示B型内皮素受体第160位的C/T位点(ertB-160-C/T)与体色白化呈极显著性相关（P0.05），而在无眼侧皮肤中的表达明显高于有眼侧皮肤（P<0.01）。在白化半滑舌鳎中tyr在有眼侧色素部分和非色素部分的表达水平均显著高于无眼侧（P<0.01）。此外，白化半滑舌鳎中无眼侧alox5的表达水平均显著高于有眼侧（P<0.05），有眼侧白化区alox5的表达水平明显高于有眼侧白色皮肤（P<0.01），首次鉴定出与半滑舌鳎养殖群体体色白化相关的突变位点，为今后半滑舌鳎的体色选育提供了分子基础。

为探究dnmt3a基因在半滑舌鳎性逆转过程中的调控作用，开发适用于半滑舌鳎的DNA甲基化编辑系统，克隆了半滑舌鳎dnmt3a基因的CDS区序列，并通过生物信息学分析其结构域特点以及进化过程中的保守性，利用qPCR分析了其在半滑舌鳎不同性别中的表达模式，探究了DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-dC处理对dnmt3a基因表达的影响。结果表明，dnmt3a基因全长3063bp，编码1020个氨基酸，包括三个核心结构域（PWWP结构域、ADDz结构域和AdoMet＿MTases超家族），dnmt3a基因结合结构域（PWWP结构域、ADDz结构域）相对保守，催化活性结构域（AdoMet＿MTases超家族）与哺乳动物和爬行动物有较大差异。基因表达模式分析表明，雌性半滑舌鳎性腺组织dnmt3a基因表达量显著高于雄性和伪雄性。5-Aza-dC处理后，dnmt3a基因表达显著升高。本研究表明dnmt3a基因在DNA 甲基化调控半滑舌鳎性别决定与分化过程中发挥重要作用，为阐明半滑舌鳎性逆转机制和实现半滑舌鳎单基因靶向DNA 甲基化编辑提供参考。

对体色相关通路基因的9个错义突变位点进行测序调查，在体色黑化、体色白化和体色正常的半滑舌鳎小样本群体中发现3个突变位点与体色白化存在显著性相关，进一步通过扩大样本验证，显示B型内皮素受体第160位的C/T位点(ertB-160-C/T)与体色白化呈极显著性相关，酪氨酸酶第473的G/A位点(tyr-473-G/A)和花生四烯酸5-脂氧合酶的第1 178位的C/T位点(alox5-1178-C/T)与体色白化呈显著性相关。这3个突变位点分别位于蛋白Periplasmic＿Binding＿Protein＿type1、Tyosinase C-terminal和Lipoxygenase结构域。qRT-PCR检测表明：ertB在白化半滑舌鳎中有眼侧正常和白化皮肤表达没有显著差异，而在无眼侧皮肤的表达显著高于有眼侧皮肤；在白化半滑舌鳎中tyr在有眼侧正常和白化皮肤的表达水平均显著高于无眼侧；白化半滑舌鳎中无眼侧alox5的表达水平均显著高于有眼侧，有眼侧白化区alox5的表达水平明显高于有眼侧正常皮肤。这些与半滑舌鳎养殖群体体色白化相关的突变位点可为今后半滑舌鳎的体色选育提供分子基础。

利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列,设计RACE引物,克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列,全长为1 294 bp,5'端UTR为132 bp,3'端UTR为310 bp,开放阅读框(ORF)为852 bp,共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析,结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85%,与虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81%、83%和76%。雌、雄鱼不同组织StAR基因的表达分析表明,StAR基因在雄鱼性腺中高表达,在雄鱼的肝脏、脑及心脏中表达量较低,而在雄鱼的其他组织...