【目的】利用网络药理学和分子对接方法，系统预测芹菜素缓解奶牛热应激及低氧应激的作用机制。为芹菜素的应用提供参考。【方法】首先从TCMSP（中药系统药理学数据库）和Gene Cards（基因数据库）分别检索“Apigenin”“heat stress”“hypoxia”，获得芹菜素、热应激和低氧应激相关靶点，韦恩交集取得芹菜素缓解双重应激（热应激+低氧）的靶点集。利用STRING数据库构建双重靶点蛋白-蛋白互作（PPI）网络，使用Cytoscape 3.9.1软件的Cyto NCA插件分别对网络节点中心性进行计算，筛选得到核心靶点。利用David数据库的分析工具“Functional Annotation”对度值排名前30的芹菜素缓解双重应激靶点进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。同时，对以上靶点进行分子复合物检测分析（MCODE）得到核心基因簇，并进一步对核心基因簇进行GO和KEGG分析。根据KEGG通路富集结果与核心靶点信息构建芹菜素-双重应激靶点-信号通路网络。最后，使用Autodock vina程序将芹菜素与核心靶点逐一进行分子对接，利用Pymol软件和PLIP网站分析其相互作用模式并将结果可视化。【结果】TCMSP数据库检索得到芹菜素靶点68个，Gene Cards数据库中获得低氧相关基因6 661个，热应激相关基因9 046个，获得三者的交集靶点56个，即芹菜素缓解双重应激的可能靶点。靶点PPI网络的节点数为56，边数为436，平均节点度值为15.6，平均局部聚类系数为0.728,PPI富集P值<1.0×10~(-16)。核心靶点分别为AKT1(RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）、TP53（细胞肿瘤抗原p53）、TNF（肿瘤坏死因子）、CASP3（细胞凋亡蛋白酶3）、INS（胰岛素）、BCL2L1(BCL-2样蛋白1）、VEGFA（血管内皮生长因子A）、HIF1A（缺氧诱导因子1-α）、PTGS2（前列腺素G/H合酶2）和SREPINE1（纤溶酶原激活物抑制剂1），分子对接结果显示芹菜素与上述核心靶点均可稳定结合。GO功能富集分析（P<0.01）共获得54种生物进程（biological processes,BP）、6种分子功能（molecular functions,MF）和11种细胞组分（cellular components,CC),KEGG共富集到98条信号通路，MCODE分析得到两个主要基因簇。【结论】芹菜素主要通过PI3K-AKT、p53、HIF-1、NF-kappa B等途径调节细胞增殖、凋亡、氧气感知及炎症反应，进一步缓解热应激与低氧应激。研究利用网络药理学和分子对接方法挖掘了芹菜素缓解多重应激的潜力，为芹菜素及富含芹菜素的植物在奶牛生产上的应用提供了理论参考。

【目的】本研究旨在探究天麻的抗疲劳主要成分及其作用机制。【方法】通过中药系统药理学数据库与分析平台 (TCMSP)、Web of Science (WOS)及中国知网（CNKI）等数据库，对天麻活性成分进行检索；通过数据库SwissTarget Prediction对天麻有效成分的作用靶点进行预测。采用数据库Disgenet获取与机体疲劳相关的靶基因，通过Venny及Cytoscape等软件，建立天麻-药效成分-抗疲劳靶点相互作用的调控网络，对其有效成分进行筛选。通过数据库String建立蛋白质相互作用关系网络，对中药活性成分的作用靶点进行筛选，并对其作用机制进行探究。利用数据库DAVID执行基因本体（GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。通过软件Autodock Vina，将天麻中的主要活性成分与抗疲劳相关的靶点进行分子对接。【结果】共获得98个天麻活性成分，预测得到94个天麻抗疲劳靶点。筛选出5个抗疲劳的主要活性成分，分别为天麻素（gastrodin）、L-焦谷氨酸（L-pyroglutamicacid）、原儿茶酸（protocatechuicacid）、3， 4-二羟基苯甲醛（3， 4-dihydroxybenz-aldehyde）、4-乙氧基甲基苯酚[4-(ethoxymethyl)-glucopyranosyl-phenol]。蛋白互作网络拓扑分析结果表明，信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）、磷酸肌醇3激酶（PIK3CA）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基Β肽（PIK3CB）、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基δ肽（PIK3CD）、磷酸肌醇3激酶调节亚基1（PIK3R1）以及雌激素受体（ESR1）为天麻抗疲劳的关键靶点。GO和KEGG富集分析显示，天麻抗疲劳作用涉及110个条目和141个通路。分子对接结果显示，天麻的5个主要活性成分与抗疲劳关键靶点能够稳定结合。【结论】天麻抗疲劳作用涉及多种活性成分、多个信号通路以及多个作用靶点。天麻可能通过清除自由基、降低细胞炎症反应、促进能量代谢、加快细胞周期进程等多个生物学过程，进而发挥其抗疲劳功效。

随着温室效应加剧,奶牛热应激问题日益凸显,对乳业造成巨大经济损失。热应激是一复杂的生理应答过程,奶牛在温热环境下表现为呼吸和心率加快,直肠温度升高,采食量下降,对其内分泌系统和免疫系统造成负面影响,严重降低奶牛泌乳性能。目前关于奶牛热应激的报道多集中于生产试验,特别是饲喂功能性饲料添加剂对应激的缓解作用,但其具体作用机制尚不清晰。文章介绍了热应激对国内外不同地区奶牛产奶量和乳品质的广泛影响,并从能量代谢、内分泌、氧化应激、细胞凋亡和自噬等方面综述了热应激对奶牛泌乳性能的影响机制。能量代谢方面,从奶牛采食量减少、脂质分解和能量代谢紊乱等内在分子学机理角度解释了奶牛在热应激下处于能量负平衡状态的原因;内分泌方面,介绍了热应激对奶牛下丘脑-垂体-肾上腺轴/甲状腺轴/性腺轴/生长轴的调控,分析了激素变化对机体的影响及其作用机制;氧化应激方面,重点阐述了热应激通过影响机体内ROS水平从而产生氧化应激的分子机制及激活的相关防御信号通路;细胞凋亡和自噬方面,介绍了高温胁迫引起奶牛乳腺上皮细胞损伤,细胞凋亡相关基因表达引发的内源性和外源性细胞凋亡,而过度自噬引发的细胞损伤也对乳腺泌乳起负面调控作用。笔者指出,在可预见的未来,热应激将是奶牛养殖业面临的最大难题,应建立可控的奶牛热应激模型运用于生产实践研究,并加强奶牛乳腺上皮细胞水平的基础研究,结合高通量数据分析技术,系统揭示热应激的发病机制,为缓解热应激提供全面的理论依据。

将 33头泌乳中期荷斯坦奶牛随机分为 3组 ,试验Ⅰ组日粮中添加 1 .2mg/kg的F89,试验Ⅱ组日粮中添加 2 0mg/kg的瘤胃素 ,结果表明 :在热应激条件下 ,F89可以提高奶牛的粗饲料采食量和减缓产奶量下降 ;使用瘤胃素 ,奶牛产奶量比试前提高 8.32 % ,比对照提高 1 2 .86 % ;同时这两种物质都具有抗热应激和提高血清PRL及T4 水平的趋势

为研究饲粮中添加烟酰胺对热应激奶牛血液中激素水平、抗氧化能力和免疫功能的影响,采用完全随机区组试验设计,根据产奶量、泌乳时间、胎次将20头健康的泌乳早期荷斯坦奶牛随机分为对照组和烟酰胺处理组。对照组饲喂基础日粮,烟酰胺处理组饲喂基础日粮+8g/d烟酰胺,试验期10周。结果表明:1)日粮中添加烟酰胺能显著提高(P0...

用36头泌乳中期的荷斯坦奶牛按配对原则分为对照组、烟酸组和烟酸铬组,进行65 d的饲养试验。对照组为基础混合精料,烟酸组在混合精料中添加800 mg/kg的烟酸,烟酸铬组在混合精料中添加10 mg/kg的烟酸铬。结果表明:在夏季热应激条件下,烟酸和烟酸铬使奶牛的粗饲料采食量增加,产奶量分别比对照组提高4.86%和12.02%(P<0.05);烟酸铬组提高乳脂5.0%、乳蛋白2.8%、非脂固形物1.8%;烟酸和烟酸铬使血清PRL、T3、T4激素水平上升(P0.05);烟酸对血清COR水平无显著影响,烟酸铬使血清COR水平降低8.80%(P<0.05)。

为研究日粮中添加不同剂量甜菜碱对夏季热应激奶牛生产性能和HSP70及其mRNA表达的影响,根据年龄、胎次、泌乳期、产奶量相近的原则选取32头荷斯坦奶牛,随机均分为4组,对照组(C)不添加甜菜碱,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在日粮中添加10、15和20 g·d-1甜菜碱。结果表明:试验期牛舍平均温湿指数(THI)为78.68;试验Ⅱ和Ⅲ组奶牛产奶量比对照组和试验Ⅰ组显著提高(P<0.05);试验Ⅱ组乳糖含量显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅰ和Ⅲ组显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组乳蛋白率显著高于对照组(P<0.05);试验后期试验Ⅱ组奶牛外周血HSP70含量与对照组相比显著降低(P<...

将40头健康娟荷奶牛和荷斯坦奶牛分为2组,分别于冬季12月份(牛舍日平均气温10.35℃,温湿度指数为47.24)和次年夏季7月份(牛舍日平均气温31.07℃,温湿度指数为82.61)测定热应激对奶牛血液流变学指标及血清无机离子浓度和酶活性的影响.结果表明:除血沉外,全血比黏度、血浆比黏度、红细胞压积,荷斯坦奶牛、娟荷奶牛夏季都明显升高,与冬季间差异均极显著(P0.05);血清K+浓度,娟荷奶牛冬季与夏季间差异显著(P0.05);热应激极显著降低血清Na+、Ca2+浓度(P<...

为了研究日粮中添加不同剂量的柴胡(Radix bupleuri)提取物对热应激奶牛生理指标、生产性能和血液代谢的影响,采用完全随机区组试验设计,根据产奶量、泌乳天数、胎次将48头健康的泌乳后期荷斯坦奶牛随机分为4组,每组12头,在基础日粮中分别添加0、0.5、2.5、5.0g·kg(-1)的柴胡提取物,试验期10周。结果表明,添加柴胡提取物对直肠温度、采食量、产奶量、乳蛋白产量和体细胞评分呈二次方程的影响(P<0.05),采食量、产奶量和乳蛋白产量在0.5g·kg(-1)添加水平时数值最大,直肠温度和体细

以初始体重为(32.28±0.20) g红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)作为研究对象，实验随机分为3组，每组设置3个重复，通过在低鱼粉饲料中分别添加3个水平的牛磺酸[0% (T1，对照)、1.0% (T2) 和5.0% (T3)]，配制3组试验饲料，养殖56 d后，水温(28±0.3) ℃,急性热应激30 min。取肝脏，使用RNA-Seq测序技术对3组红鳍东方鲀肝脏转录组进行分析，并分别对3个样品测序文库进行两两比较，设置显著差异基因筛选条件为P<0.05，共获得167个差异表达基因，其中上调基因111个，下调基因56个。GO功能分析发现，在T3vsT1组中，差异表达基因(DEGs)显著富集在蛋白质分解过程、丝氨酸型内肽酶活性、丝氨酸型肽酶活性、丝氨酸水解酶活性、内肽酶活性、L-氨基酸肽的肽酶活性和肽酶活性，KEGG富集分析发现，T2vsT1组中，这些DEGs主要与细胞粘附分子、神经活性配体-受体相互作用通路；而T3vsT1组中，这些DEGs主要参与神经活性配体受体相互作用和代谢途径。选取3个显著差异表达基因进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证，结果证明，转录组测序分析可靠；饲料中添加牛磺酸后，在急性热胁迫条件下，红鳍东方鲀可通过细胞黏附分子和神经活性配体-受体相互作用通路调控机体对温度的响应；随着牛磺酸添加量的升高，红鳍东方鲀主要通过代谢调节、神经活性配体-受体相互作用通路调控机体对温度的响应。本研究旨为牛磺酸对红鳍东方鲀的热应激调控机制的影响和牛磺酸抗应激功能的发掘提供基础参考数据。

[目的]本文旨在研究芦丁对热应激下奶牛生产性能及机制的影响。[方法]选取生理情况相同的荷斯坦奶牛30头,随机分为3组,每组10头,对照组饲喂基础日粮,试验1组在基础日粮中添加2 g芦丁,试验2组在基础日粮中添加3 g芦丁,饲养期为60 d,采血测定生理指标,采集奶样分析指标。体外培养奶牛乳腺上皮细胞(BMEC),对细胞进行热应激处理,试验组在基础培养基(DMEM/F12+10%胎牛血清)添加40μg·mL~(-1)芦丁,RT-qPCR测定乳脂、乳蛋白及乳糖相关基因mRNA表达水平,以评估芦丁对热应激奶牛生产性能的影响。[结果]与对照组相比,日粮添加芦丁饲喂40 d后试验组奶牛产奶量均显著升高(P<0.05);试验期第40天开始,试验组乳蛋白率与乳糖率均显著升高(P0.05),但试验组乳中脂质质量显著升高(P<0.05),乳中体细胞数均显著降低(P<0.05);体外试验中对奶牛BMEC进行热应激处理后,添加芦丁显著提高BMEC乙酰辅酶A羧化酶基因(ACC)、脂肪酸合成酶基因(FASN)、二酰甘油酰基转移酶2基因(DGAT2)、固醇调节元件结合蛋白1基因(SREBP1)、酪蛋白αs1基因(CSN1S1)、酪蛋白β基因(CSN2)及葡萄糖转运蛋白1基因(GLUT1)mRNA的相对表达水平(P<0.05)。[结论]芦丁可通过提高乳脂、乳蛋白及乳糖相关基因mRNA表达水平来提高乳品质和奶牛产奶性能,是一种优秀的植源性饲料添加剂。

【目的】探究咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解氧化应激对猪精液的影响及其分子机制。【方法】选取8头成年（1—2岁）、健康状况良好长白种公猪进行鲜精采集，将质检合格的样品混池待用。试验设计如下：首先，在常温基础稀释液中分别添加0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10 g·L~(-1)浓度的CAPE，将精液样品与各个浓度组依次混合后放置室温平衡，随即转入17℃电子恒温冰箱进行常温保存。全自动精子分析仪（CASA）测定1—5 d精子运动学参数（总活率与渐进性活力），筛选出最佳适宜浓度为0.06 g·L~(-1)。其次，将0.06 g·L~(-1) CAPE与400μmol·L~(-1)的H_2O_2建立氧化胁迫模型，在第1、3、5天分别采用CASA测定精子总活率与渐进性活力，荧光探针技术评估质膜完整性与顶体完整性，抗氧化试剂盒检测过氧化氢酶（catalase,CAT）与超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性，在第5天利用实时荧光定量PCR技术测定AMPK/FOXO3a信号通路下游靶向基因（AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT）及凋亡基因BAX的mRNA表达水平，蛋白免疫印记技术测定AMPK、p-AMPK蛋白表达。【结果】（1）浓度筛选试验中，0.06 g·L~(-1)的CAPE在保存第3天显著提高精子的总活率并维持至第5天（P<0.05），不仅如此，精子的渐进性活力在第1天显著高于其他处理组（P<0.05）。（2）氧化胁迫试验中，H_2O_2处理组的精子质膜完整性、顶体完整性、总活率、渐进性活力、SOD与CAT活性在保存的第5天均极限显著低于空白组与CAPE+H_2O_2混合组（P0.05）。与CAPE+H_2O_2混合组相比，H_2O_2处理组AMPK、FOXO3a、SOD1、SOD2、CAT的mRNA表达水平显著降低（P<0.05),BAX的表达水平显著升高（P0.05）。在蛋白表达水平中，CAPE+H_2O_2混合组与H_2O_2组相比，AMPK、p-AMPK与p-AMPK/AMPK比率显著提升（P

选取８６８只２８０日龄产蛋率相近海兰褐蛋鸡，随机分为高温组（３３℃）、益生菌组（枯草芽胞杆菌＋３３℃）、室温组（２６℃），试验期为２０ ｄ，研究益生枯草芽胞杆菌ＨｄＲａ ＢＳ１缓解动物热应激的可行性及其机制。结果发现，与高温组相比，益生菌组在全期产蛋率、平均日采食量、平均蛋质量方面分别提高了２．６０％（Ｐ０．０５）和０．９６％（Ｐ＞０．０５），但没有达到室温组水平，且在腹泻率、蛋破损率方面均有降低；血清内毒素、ＩＬ－１水平分别降低了３７．４１％（Ｐ＞０．０５）和２０．９８％（Ｐ０．０５）；益生菌显著上调盲肠紧密连．．．

以小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖活性为指标,考察中药芪苓制剂血清药理学试验中的给药剂量、给药天数、血清添加剂量和孵育时间等最佳条件.结果表明:按小鼠每公斤体重给生药0、12.5、25.0、50.0 g连续3和6 d,25.0 g.kg-1的剂量对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进作用显著或极显著地优于0、12.5、50.0 g.kg-1(P<0.01或P

用流式细胞记录仪检测分析奶牛在夏季 (日平均气温为 37 5℃)、夏末 (日平均气温 26 5℃) 和冬季 (日平均气温 5 5℃) 时奶牛外周血淋巴细胞DNA含量, 统计细胞所处的分裂时期及淋巴细胞的凋亡率, 并通过荧光定量PCR分析上述时期外周血淋巴细胞bax α基因mRNA表达量。结果显示: (1) G2 /M期细胞和淋巴细胞增殖指数随温度降低而呈明显的下降趋势, 5 5℃时比例最低, 相对于其他两个温度条件差异显著 (P