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[期刊] 华北农学报
[作者]
王秋霞 马景周 宁长申 张龙现 菅复春
利用纯化的猪囊尾蚴重组蛋白M13h作为抗原包被酶标板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,初步建立了猪囊尾蚴病间接ELISA检测方法。确定最佳包被量为1μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,酶标二抗的稀释倍数为1∶1 000,二者的作用时间均为45 min;与猪弓形虫病、猪旋毛虫病、细颈囊尾蚴病、猪蛔虫病、包虫病阳性血清均不发生反应,且具有较好的重复性。为囊虫病的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。
关键词：
猪囊尾蚴 M13h蛋白 间接ELISA
[期刊] 华北农学报
[作者]
王秋霞 张美英 张改平 王选年 宁长申 鲁琨 张龙现 菅复春
研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.2mmol/L的IPTG和200mmol/L的氨苄青霉素在32℃过夜诱导培养,pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白表达量最大,表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的33%。SDS-PAGE表明pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白大小约为33 kDa,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与猪囊尾蚴多克隆抗体...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
苏文强 胡鑫宇 王秋霞 欧长波 郭爱疆 李辉 骆学农 余燕 张艳红 姜金庆 刘兴友 马金友 王松 才学鹏
【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
常正山 张永年 何显成 张永红 裘丽姝 方莹 朱显因 於永和 朱慧芬 陈平芳 林荣泉
猪囊尾蚴病目前仍是危害人体健康的重要寄生虫病。本实验探讨猕猴能否寄生猪囊尾蚴及其在猴体内的寄生数量、分布部位及临床表现,为临床诊治囊虫患者提供参考,为人畜囊虫免疫学、分子生物学的研究提供极宝贵的活体材料。分别给6只雄性猕猴人工定量(镜下计卵)接种猪带绦虫孕卵节片。生前用皮试酶标法检查,死后解剖,统计囊虫在不同解剖部位的寄生数目,并对部分猴用 MRI 对照检查脑部囊虫寄生部位与数目。人工感染猪带绦虫孕节的6只猕猴在相同的饲养管理条件下存活期有所不同(79～1299d).
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
唐金花 吴力人 冯云
猪囊尾蚴病危害人、畜,是肉品检验的重点项目之一.有猪囊尾蚴的猪肉不能作鲜肉出售供食用,常造成巨大的经济损失,如1980年伊盟某单位为职工谋福利购进猪肉4 ,职工发现猪肉有异样,经检验认为是猪囊尾蚴,再进一步检验带虫肉占1/3,导致4t 肉全部焚烧,按当时市价估算每斤猪肉4元,损失人民币16000元.人感染猪囊尾蚴时,寄生在脑内可招致癫痫以致死亡,如东胜市刘某某在84年误食猪囊尾蚴,
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨举 张西臣 尹继刚 何宏轩 李德昌 李建华
四月份以来,长春市暴发了多起猪急性死亡事件。患猪主要症状为:发热、食欲不振,减食或不食,两耳发紫,个别猪臀部发紫,重症猪于日内死亡.剖检可见肝脏肿大,表面有大量出血点和白色米粒样虫体寄生,腹腔有大量血色积液,并悬浮大量白色米粒样虫体,用手捞起虫体内眼可见乳白色头节.肝脏切面亦见有大量白色米粒样虫体.经解放军农牧大学寄生虫病学教研室诊断定为猪急性细颈囊尾蚴病,这是长春市首次发现的该病病例。患猪用驱绦灵注射液治疗一次后剖检病猪发现虫体死亡,其他用药猪于次日开始恢复正常.由于该病与猪食入犬泡状绦虫卵有关,因此敬告各养猪户,应严格杜绝猪食到犬粪和生的犬下水.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘振勇 吕志慧 郑亚东 窦永喜 乔军 骆学农 张艳 景志忠 才学鹏
【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵艳兵 李庆章 郝艳红
系统地研究了猪囊尾蚴发育过程中超微结构的变化。5头仔猪,分别经口服感染3节猪带绦虫孕卵节片,于感染后不同时期剖杀,剥离囊尾蚴。取囊壁和头颈部,作透射电镜观察。观察结果表明,随感染时间的延长,猪囊尾蚴细胞或组织的类型未发生明显变化,只在大小或发育程度上有所增加。头节和囊壁均由皮层和实质区构成,但二者的超微结构有差别。头节肌肉较发达,皮层外表面的微毛较短,基质区线粒体较少,实质区糖原颗粒不及囊壁贮存多,并且排泄管也较少。提示二者可能执行不同的功能:囊壁与营养吸收有关,而头节可能与将来的发育有关。
关键词：
猪囊尾蚴 发育 超微结构
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李庆章 郝艳红 高学军 刘永杰 高文学 赵冰
【目的】研究苯并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物对猪带绦虫囊尾蚴的作用靶点,为药物的类型衍化和新药开发提供理论依据。【方法】测定体外培养的和猪体内的囊尾蚴于阿苯哒唑和奥芬哒唑分别作用后能量代谢途径物质含量及其关键酶活性变化。【结果】阿苯哒唑和奥芬哒唑对体外培养猪六钩蚴、未成熟期和成熟期猪囊尾蚴,以及体内发育未成熟期和成熟期猪囊尾蚴的糖无氧分解途径、丙酮酸羧化支路与逆向三羧酸循环途径均有一定程度抑制作用,代偿性促进糖异生及蛋白质、脂类和核酸分解途径,葡萄糖吸收受阻。阿苯哒唑和奥芬哒唑体外非竞争性抑制延胡索酸还原酶复合体活性。【结论】并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物非竞争性抑制猪囊尾蚴FR复合体活性,抑制葡萄糖...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李靓如 张中庸 李万密 张京 马春燕 黎立 马云生 董志珍 哈斯 李建忠 吴秀云
采取猪囊尾蚴组织,经过体外培养已建立一株细胞系,命名为猪囊尾蚴 CC-97免疫细胞系.原代培养30d 形成单层细胞,以1:2分种率传代培养,相隔7d 传代一次,连传24次,历时8个月之久.细胞系由三肿类型细胞组成,以椭圆形细胞占优势,梨形、球形者数额略相等.放射自显影法测定细胞分裂、~3H-TdR 显示细胞生长指数,均证明细胞对数增殖期长达7d,细胞生长从12h 开始倍增分裂,第4,5天相继达到倍增分裂高峰,细胞增殖率达11倍,增效达6.32×10~6mL~(-1),细胞周期约32h,细胞系二倍体细胞为主,染色体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭爱疆 才学鹏 贾万忠 房永祥 乔军 刘红霞 潘小梅 景志忠
【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李淼 李春玲 叶严锋 宋帅 杨冬霞
旨在建立一种基于重组副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白(Omp)P2的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。将重组表达的Omp P2纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组P2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为1.5μg/mL,被检血清1∶80稀释,辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG(二抗)1∶4 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.231,阳性血清临界D450 nm值为0.280。将该ELISA方法与加拿大Biovet公司生产的副猪嗜血杆菌抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为88.9%。本试验建立的方法...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
庞文静 付明哲 张琪 何亚鹏 许信刚
【目的】原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的N蛋白,并以N蛋白为包被抗原建立血清间接ELISA检测方法。【方法】克隆PPRV N蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中进行重组N蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化复性,并进行Western-blot鉴定。用复性后的N蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清中PPRV抗体水平的间接ELISA检测方法,并对其进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后用该方法对临床样品进行检测,检验其应用效果。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田莉莉 李丽
【目的】建立一种快速检测猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)野毒抗体的方法。【方法】参照已发表的PPV基因组(AY502114.1)序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增PPV NS1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。以该蛋白作为诊断抗原,经过对间接ELISA条件的优化,建立检测PPV抗体的NS1-ELISA诊断方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行检测。用建立的PPV NS1-ELISA诊断方法和血凝抑制试验(HI)同时对临床送检的306份血清样品进行检测,比较二者的符合率。【...
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