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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
左斌 胡超 谢达平
为提高大肠杆菌单位发酵液中谷氨酸脱羧酶的产量,采用均匀设计,对培养基组成与发酵条件等9因素进行优化,后续分析以逐步线性回归、偏最小二乘回归建模并推论最优组合,结果表明:1)基于逐步线性回归模型,最优组合酶活性预测值(1.611)高于实测值(1.263),表明各因素与酶活性间更多地呈现非线性关系.2)基于二次多项式偏最小二乘回归和二次多项式偏最小二乘回归(考虑互作项)获得的最优组合相同,但酶活性预测值(2.090)高于实测值(0.927);基于二次多项式偏最小二乘回归(考虑平方项)获得的最优组合预测值(1.920)与实测值(1.933)接近.显示各因素与酶活性更多地呈现二次曲线关系,但各因素间的...
[期刊] 林业科学
[作者]
胡蕙露 蔡新玲
应用均匀设计法安排银杏体外培养试验。以3、4月份生长旺盛的银杏植株上的幼嫩部位为外植体,包括幼叶、茎段、顶芽,采用MS培养基,添加不同浓度植物生长调节剂2,4_D、6_BA、NAA,设置6个不同的水平数,按照均匀设计表U4(64)建立6个试验组合,运用均匀设计软件分析这些不同材料和不同激素及其各浓度水平配比下的愈伤组织诱导情况及植株的再生效果。通过建立试验方案、数据处理、回归分析以及优化拟合,得到了最佳配方并予以验证。结果表明以芽为外植体时,最佳的试验配比是NAA2.0mg.L-1+6_BA1.5mg.L-1+芽,激素2,4_D对试验结果没有显著影响,6_BA、NAA均以浓度适中为宜。
关键词：
银杏 均匀设计 培养基配比 优化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨胜远 陆兆新 孙力军 吕凤霞 别小妹 刘战民
从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性。当湿菌体与10 g.L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30℃和120 r.min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol.L-1。通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megateri-um)。同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析。B.megateriumEJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50℃和5.6。低于40℃,GAD在pH5-6范围内较稳定。2...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏冬 王涛 豆威 王进军
【目的】在测定橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)γ-氨基丁酸(GABA)含量和谷氨酸脱羧酶(GAD)活性的基础上,克隆获得橘小实蝇GAD基因(BdGAD1)全长序列,进一步解析GABA、GAD以及BdGAD1在橘小实蝇各发育阶段、成虫不同体段以及经阿维菌素刺激后的表达模式,分析橘小实蝇GAD对阿维菌素作用的应激反应,为系统解析GABA介导的阿维菌素抗药性机制提供基础数据。【方法】采用高效液相色谱法测定橘小实蝇体内GABA含量,分析阿维菌素刺激对GABA含量的剂量和时间效应;以谷氨酸为底物,采用微量滴度酶标板法测定橘小实蝇经阿维菌素刺激后GAD活力的变化;通过同源序列比对的方法,...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
穆小民 杨晓贺 吴显荣 沈黎明
林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的亚基分子为量70kD，天然分子量为140kD，是2个相同亚基组成的二聚体。N-末端氨基酸为丙氨酸。圆二色谱分析表明，该酶在207．5nm和215nm有一平缓的负峰，二级结构中α-螺旋占34．28％，β-折叠占33．24％，无规则卷曲占32．28％，紫外吸收表现一般蛋白质的特征吸收光谱，在278nm处有最大吸收。酶最适pH5．4，对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1,最适温度40℃，酶特异性地使谷氨酸脱羧，不能使门冬氨酸等其他氨基酸脱羧。比较结果说明该酶在已知结构和性质上与人及大鼠脑的谷氨酸脱羧酶接近，但和已知的几种植物的酶相差较远。
关键词：
林生山黧豆 谷氨酸脱羧酶 性质 比较研究
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
齐立辉 郑新艳 冉婷婷 徐朗莱 王伟武
为深入了解沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶的生化特性及功能,将该酶基因克隆到表达载体中,转入大肠杆菌中诱导表达,表达产物经monomeric avidin-Sepharose亲和层析分离纯化,获得了纯的沙门氏菌草酰乙酸脱羧酶。结果表明:纯化后的草酰乙酸脱羧酶经SDS-PAGE检测,呈现3条蛋白谱带,相对分子质量分别为65×103、46×103、8.8×103左右;该酶不耐高温,50℃温浴1h后活力几乎完全丧失;其最适pH为6.0左右;1mmol·L-1Zn2+、0.5mmol·L-1草酸和20mmol·L-1丙酮酸几乎完全抑制该酶的活力,10～20mmol·L-1NaCl对该酶有明显激活作用,但200～...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕莹果 张晖 马晓博 姚惠源
【目的】分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD),并对其酶学性质进行研究。【方法】通过(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱、Superdex 200凝胶过滤色谱和Glu SephroseCL 4B亲和色谱等分离纯化技术,对米胚芽GAD进行分离纯化。用体积排阻高效液相色谱测定米胚GAD的相对分子质量,SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量。测定米胚GAD的最适温度和pH,通过酶动力学试验测定其动力学常数(Km)和最大反应速度(Vmax),并测定KCl和MgSO4等化学物质对酶活性的影响。【结果】分离纯化得到了米胚G...
关键词：
米胚芽 谷氨酸脱羧酶 酶学性质分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
李明轩 刘颖 杨柏明 张帆 宋嘉欣 粟柴静 张卫华 吴颖
谷氨酸脱羧酶(GAD)是催化谷氨酸脱羧的裂解酶，对GABA合成通路起关键作用，并对植物抵御非生物胁迫有重要调控作用。前期通过代谢组和转录组关联分析筛选得到3个西瓜GAD基因家族成员(Cla97C01G007270、Cla97C01G007290和Cla97C04G079700)。在此基础上克隆了3个西瓜GAD家族基因，分别命名为ClGAD1、ClGAD2和ClGAD3,并对其进行生物信息学及表达模式分析。结果显示，ClGAD1、ClGAD2和ClGAD3的CDS分别为1 524,1 497,1 497 bp,其编码的氨基酸数量分别为507,498,498。3个蛋白均为亲水性蛋白；亚细胞定位于线粒体中；具有高度的保守性，保守结构域为谷氨酸脱羧酶；其启动子区域含有大量CAAT-box和TATA-box,以及与逆境胁迫相关的MYB、MYC等相应元件。3个GAD蛋白的二级结构均以α-螺旋、无规卷曲为主；三级结构均为同源六聚体结构。系统进化树显示，GAD基因家族成员与苦瓜、拟南芥的GAD亲缘关系最近。qRT-PCR分析显示，ClGAD1和ClGAD2在茎中表达量最高，而ClGAD3在花中表达量最高。ClGAD1、ClGAD2、ClGAD3分别在盐胁迫12,24,48 h表达量最高；冷和干旱胁迫下3个GAD基因的表达模式较为相似，均在胁迫早期发生大量表达，且ClGAD3在非生物胁迫下的表达量均高于其他2个家族成员。获得了西瓜3个GAD基因的cDNA全长，并对其进行生物信息学和表达模式分析，为丰富西瓜抗非生物胁迫基因资源提供了试验依据。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
许辉 廖攀 许明 黄志伟 程祖锌 董彦君 开国银
利用分子克隆技术从8个水稻品种中克隆到谷氨酸脱羧酶基因OsGAD3,并进行了相关的生物信息学及表达谱分析.结果表明,不同水稻品种OsGAD3的核苷酸序列差异性很小,都在1%以内,在氨基酸序列上都具有保守的结构域,在C末端均具有类似于OsGAD1结合CaM的关键氨基酸位点,但不同于OsGAD2.系统进化树分析表明,不同水稻品种的OsGAD3在进化上可以分为粳稻和籼稻两大类,与水稻常规分类相一致.此外,对不同水稻品种的谷氨酸脱羧酶基因的表达谱分析发现,OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3、OsGAD4和OsGAD5在测试的11种水稻叶片中都有表达,但表达特征存在一定的差异性,可能与品种特性相关...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
惠明 马晓娜 贾洁 牛天贵
从超高压灭菌的瓜汁中筛选出 1株产高分子聚合物的芽孢杆菌B53 。经紫外扫描、高效液相色谱分析及SDS PAGE分子量表征 ,确定该高分子是由谷氨酸单一成分组成的聚合物 ,最大吸收波长为 2 12nm ,分子质量集中在 5 70～ 6 6 9ku ,呈多分子质量聚集体形式 ,不具备典型肽或蛋白质特征。依据B53 的菌株形态、生理生化特征、G +C含量 (摩尔分数 )及 16SrRNA基因序列分析结果 ,将芽孢杆菌B53 菌株鉴定为枯草芽孢杆菌。
关键词：
芽孢杆菌 聚γ-谷氨酸 分离 鉴定
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
岳田利 王云燕 袁亚宏 高振鹏
【目的】优化产葡萄糖异构酶短乳杆菌(Lactobacillus brevis)培养基,提高短乳杆菌产葡萄糖异构酶的能力。【方法】采用基于非完全平衡块原理的Plackett-Burman法和响应面法(Response Surface Methodology,RSM),对短乳杆菌发酵产葡萄糖异构酶的培养基进行优化。【结果】①短乳杆菌产葡萄糖异构酶的3个主要影响因子为:木糖、玉米浆干粉和MgSO4.7H2O。②通过最陡爬坡试验、旋转中心组合设计及响应面分析确定的短乳杆菌最适发酵培养基组成为:木糖13.43 g/L、玉米浆干粉23.14 g/L、MgSO4.7H2O 2.54 g/L、MnSO4.4H...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘美 王刘庆 廖美德 陆亮
【目的】对杀蚊球形芽孢杆菌BS-10高产培养基进行优化,为该菌株的规模化生产提供理论依据。【方法】以菌株BS-10菌体生物量、干质量和芽孢数为考察指标,对培养基中添加的碳、氮组成成分进行正交试验优化,并对优化所得培养基进行发酵罐扩大培养试验和生物活性测定。【结果】菌株BS-10高产毒力最优培养基(NBFB)配方为胰蛋白胨3g/L,牛肉膏1g/L,鱼粉6g/L,麸皮4g/L;采用NBFB培养基,可将BS-10培养周期缩短至18h,芽孢数达4.12×109 CFU/mg,对致倦库蚊幼虫的毒力较基础培养基增大了100倍。【结论】菌株BS-10在NBFB培养基扩大培养中,不仅获得了高产量,而且缩短了发...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
唐家毅 刘婕 于铁妹 杨博 王永华 张毅
对从水产养殖环境中筛选出一株菌MM01进行了鉴定和培养条件优化研究。结果显示:此菌MM01能有效的降低养殖水水体中的氨氮和亚硝酸盐含量,经生理生化实验及16S rDNA测序鉴定其为枯草芽孢杆菌。单因素和正交实验结果显示:枯草芽孢杆菌MM01最佳发酵培养基配方为,玉米淀粉18 g/L、玉米浆12 g/L、NH4Cl6 g/L、MnSO4.H2O 0.2 g/L、KH2PO43 g/L、CaCl20.2 g/L、MgSO4.7H2O 0.2 g/L。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘美 王刘庆 廖美德 陆亮
【目的】对杀蚊球形芽孢杆菌BS10高产培养基进行优化，为该菌株的规模化生产提供理论依据。【方法】以菌株BS10菌体生物量、干质量和芽孢数为考察指标，对培养基中添加的碳、氮组成成分进行正交试验优化，并对优化所得培养基进行发酵罐扩大培养试验和生物活性测定。【结果】菌株BS10高产毒力最优培养基（NBFB）配方为胰蛋白胨3 g/L，牛肉膏1 g/L，鱼粉6 g/L，麸皮4 g/L；采用NBFB培养基，可将BS10培养周期缩短至18 h，芽孢数达4.12×109 CFU/mg，对致倦库蚊幼虫的毒力较基础培养基增大了100倍。【结论】菌株BS10在NBFB培养基扩大培养中，不仅获得了高产量，而且缩短了发...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
袁科平 邹世平 李谷 何力 周群兰
从水产养殖环境中分离、筛选得到一株菌CJ001,经菌落形态特征、生理生化特征及16S rDNA测序,鉴定其为地衣芽孢杆菌.地衣芽孢杆菌可有效降低养殖水体中的化学需氧量(COD),48 h内COD的降解率达86.8%,水温30℃时的降解率最高,达到85.7%.为优化培养基组成,选出由单因素试验确定的营养物质(红糖、玉米粉、豆粕、尿素)和NaH2PO4,进行5因素4水平的正交试验.结果表明,CJ001菌株的最佳培养基配方为:红糖3%、玉米粉1%、豆粕3%、尿素0.25%、NaH2PO40.15%,其活菌数可达11.15×109cfu.mL-1.
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