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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张杰 刘永生 马庆生
运用底物筛选法从地衣芽孢杆菌GXN151的基因文库中筛选到3类表达羧甲基纤维素酶活性的克隆。对克隆pGXNP11的测序表明其含有纤维素酶基因cel9A和cel48A的部分序列熏cel9A基因为1899bp熏可编码含633个氨基酸的内切葡聚糖酶cel9A熏cel9A的N-末端第21~456氨基酸形成家族9糖基水解酶催化功能域,第480~565氨基酸为家族3碳水化合物结合组件功能域,cel48A基因位于ce19A基因的下游,两者可能共用一个操纵子。cel48A基因编码一个外切纤维素酶熏通过染色体步移法将cel48A定位于4kbEcoRI片段上或10kbSalI片段上。
[期刊] 华北农学报
[作者]
蔡恒 陈忠军 万红贵 王涛 杜连祥
为使地衣芽孢杆菌信号肽序列实现异源基因在大肠杆菌中的分泌表达,将地衣芽孢杆菌中编码耐高温α-淀粉酶的基因克隆在大肠杆菌表达载体pET-22b的T7启动子下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,在上清液中能够检测到淀粉酶活性。表明该芽孢杆菌淀粉酶基因5′端信号肽序列能够将大肠杆菌中的重组α-淀粉酶引导到胞外,完成分泌表达。同时,用该信号肽序列还实现了甜蛋白monellin基因在大肠杆菌中的分泌表达。
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢凤行 张峰峰 周可 赵玉洁 刘韵娅
采用紫外诱变、化学诱变(DES诱变)及复合诱变的方法对产纤维素酶枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B6的原生质体进行诱变,选育出10个高纤维酶活突变株。摇瓶发酵试验结果表明,所选突变株酶活都显著高于B6,其中,紫外诱变处理的突变株Z12,化学诱变得到的突变株H1以及复合诱变处理的突变株F12的产酶能力相对较强,且产酶能力稳定,酶活值分别为448.3,450.9,491.8U/mL,分别为对照的176%,178%,194%。试验结果说明,对枯草芽孢杆菌的原生质进行诱变可以提高菌株产纤维素酶的能力,而原生质体的复合诱变可提高诱变效应。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
温冬灼 张智 魏罡 张晓彤
【目的】筛选沼气发酵液中高产纤维素酶菌株,并对产酶条件进行优化,为沼气发酵利用和纤维素酶的工业化开发提供高效菌株。【方法】利用刚果红平板染色法初筛,纤维素酶活测定进行复筛,从沼气发酵池中分离产纤维素酶菌株,并结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析进行鉴定。对菌株产酶培养基中碳源、氮源、硫酸镁和磷酸二氢钾添加量进行单因素优化,以滤纸酶活为指标,并在优化的基础上进行正交试验。对菌株接种量、培养时间、初始pH值、温度条件进行单因素优化,在单因素试验基础上采用响应面法Box-Behnken试验设计(BBD)优化纤维素降解菌产酶工艺的最佳工艺参数。【结果】初步确定该菌株发酵产酶培养基最佳条件为羧甲基纤维素钠含量0.75%、蛋白胨含量6%、硫酸镁添加量0.05%、磷酸二氢钾添加量0.2%;产纤维素酶最佳工艺条件为温度36℃,初始pH值为7.0,接种量4%,培养时间24 h,优化后其滤纸酶活达到98.49 U/mL,与优化前相比提高了约1.6倍。【结论】根据菌体的形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,表明该菌株为Bacillus amyloliquefaciens,本研究为沼气发酵利用和纤维素酶的工业化开发提供了高效菌株,建议进一步研究纤维素酶的生产利于其在工业水平上的应用。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄天培 潘洁茹 李今煜 洪永聪 黄志鹏
通过设计蛋白酶基因引物,对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)库斯塔克亚种菌株8010蛋白酶基因进行克隆,获得了6个蛋白酶基因片段,即中性蛋白酶A、色氨酸合成酶β链、色氨酸合成酶α链、碱性蛋白酶A、磷酸化水解酶和糖原磷酸化酶基因,以及1个未知功能的DNA片段(可能是编码蜡质芽孢杆菌组特有蛋白的基因).
关键词：
苏云金芽孢杆菌 克隆 蛋白酶 序列分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨婷 裴雁曦 王景雪
以液体PDA中培养的香菇菌丝体为材料,提取香菇总RNA,通过RT-PCR方法,克隆得到纤维素酶基因cel6B,并成功构建了原核表达载体pET28a-cel6B;将该载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建工程菌,用IPTG诱导蛋白质的表达。SDS-PAGE电泳结果表明:在IPTG诱导下,cel6B基因编码出46.4 kDa的蛋白质CEL6B。将工程菌在CMC-Na(羧甲基纤维素钠)为唯一碳源的刚果红液体培养基中培养7 d后,培养基红色变浅,初步证明纤维素酶CEL6B具有分解纤维素的能力。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张洪玉 王海波 赵明军 焦丽亭 胡鲲 杨先乐 夏磊
为研究地衣芽孢杆菌A1(Bacillus Licheniformis, Bli)在斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)肠道的定植规律,通过每周更换100%的循环水量以减少水体中的芽孢杆菌对实验的干扰,通过Co~(60)辐照灭菌杀灭饲料中的芽孢杆菌以消除其对实验的干扰。采用52℃高温选择性培养肠道Bli,研究外源Bli在肠道内的消长规律。使用嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermo philus)的芽孢作为惰性对照,通过洗涤肠壁去除非黏附菌,研究Bli对肠粘膜的黏附。使用灭菌处理的肠内容物体外培养Bli,研究其在肠道的增殖潜能。结果显示,每周100%换水量使水体Bli含量
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
潘风光 宋德群 任洪林 艾永兴 柳增善
地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α -淀粉酶(α -amylase)的优良菌株。在提取地衣芽孢杆菌基因组DNA基础上 ,通过PCR方法克隆了耐高温淀粉酶的全长基因1539bp ,与pUCm -T载体连接转化入克隆菌DH5α中 ,经过酶切鉴定筛选出阳性的克隆菌 ,再提取质粒与表达载体pET-28a( +)酶切后连接转化入宿主菌DE3中 ,其阳性重组子在37℃1.0mmol·L-1IPTG诱导下 ,α -淀粉酶的基因得到了较好的表达。表达产物经SDS -PAGE鉴定 ,确定表达蛋白的相对分子量为63000左右 ,与理论推导的分子量相一致。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈红歌 顾溯海 任随周 马向东 贾新成
从地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis )中分离到一α 淀粉酶组分 ,经PAGE及SDS PAGE检测为电泳均一的纯酶蛋白。该酶最适反应温度为 95℃ ,5 0和 70℃条件下酶活性稳定 ,90℃保温 30min残余酶活力为 2 8 9%。该酶最适作用pH为 6 0～ 6 5 ,在pH 5 0～ 8 0内稳定。酶的相对分子质量为 6 5 90 0 ,等电点 6 94 ,对可溶性淀粉的Km 值为 0 4 1mg·mL-1 。Ca2 + 、Mn2 + 、Cu2 + 、Co2 + 及Ba2 + 对酶具有激活作用 ,其中Ca2 + 激活作用最显著 ,且以 4～ 8mmo...
关键词：
耐高温α-淀粉酶 地衣芽孢杆菌 酶学特性
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈晓月 金宁一 邹伟 海洋 马海利 李昌
根据GenBank中枯草芽孢杆菌的P43启动子基因序列,设计合成了一对引物,用PCR方法钓取枯草芽孢杆菌AS.1655菌株的启动子基因,PCR产物经琼脂糖凝胶回收纯化后,连接到pMD18T-simple载体上,进行序列测定。测序结果表明:枯草芽孢杆菌AS.1655菌株的启动子全长427 bp,由两个叠加的启动元件组成,分别为5σ5和3σ7 RNA聚合酶识别的位点,与GenBank中的其他序列比较发现核苷酸的同源性为99.5%,氨基酸的同源性为98.6%,说明枯草杆菌P43启动子的基因序列高度保守。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张金 邹红 姚卫建 聂品
柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)是世界范围内危害淡水鱼类的柱形病的病原。目前对该病原菌遗传操作系统的研究进展较慢,而寻找高效稳定的启动子来调控外源基因在细菌体内的表达,有可能促进该细菌遗传操作系统的构建。本研究获得了柱状黄杆菌乙酰辅酶A合成酶基因(acetyl-coenzyme A synthetase gene,acs)的编码序列及其上游调控序列,该基因全长2 323 bp,编码635个氨基酸。通过序列分析,发现在该基因起始密码子ATG的上游存在核糖体结合位点(ribosome biding site,RBS)序列TAAAA,和启动子–7和–33的保守基序TAT...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
徐凤凤 向娟 李双桃 石锦 李殿波 连蔚然 赵冰 郭仰东
为研究甘蓝纤维素合成酶ＢｏＣｅｓＡ基因在干旱胁迫下的表达模式，通过同源克隆得到甘蓝纤维素合成酶基因的ＣＤＮＡ全长，利用生物信息学软件分析该基因的特征；构建含ＢｏＣｅｓＡ和ＧＦＰ的融合表达载体，通过基因枪转化洋葱表皮细胞试验对该基因进行亚细胞定位；利用荧光定量ＰＣＲ分析基因在不同组织中的表达情况及干旱胁迫下的表达模式。甘蓝纤维素合成酶ＢｏＣｅｓＡ基因的ＣＤＮＡ全长为２ ７２１ＢＰ，编码９０６个氨基酸，在Ｎ端含有锌指结构域和２个跨膜区，Ｃ端含有６个跨膜区，除包含植物纤维素合成酶基因共有的保守区外，还包含２个高突变区。通过氨基酸序列比对分析，发现甘蓝的该基因与拟南芥的ＡｔＣｅｓＡ３基因同源性较高。亚．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
臧超群 白元俊 宋飞 谢瑾卉 林英 梁春浩
由卵菌引起的植物病害大多难以控制,常因再侵染次数多,暴发流行而导致严重损失。卵菌细胞壁的主要成分为纤维素,因此具有产生纤维素酶能力的生防菌能够更好的用于防治卵菌门真菌引起的植物病害。SY286菌株对葡萄霜霉病菌具有较强抑制活性。纤维素酶活性检测试验结果显示,SY286菌株代谢产物中含纤维素酶,菌落周围透明带宽度达5.9mm。根据已报道的纤维素酶基因序列设计引物,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到了561bp纤维素酶基因相关片段,经Blast比对,该与内切β~(-1),4-葡聚糖酶基因序列相似性达99%,即为SY286基因的核心序列。根据此片段的序列设计特异性引物,通过交错式热不对称PCR(TailPCR)得到其上下游序列,经拼接获得完整的纤维素酶基因的开放阅读框(ORF)序列(命名为SY286基因)。该基因序列ORF长度为1494 bp,编码1个含497个氨基酸的蛋白质,预测其蛋白分子量为55.04k Da,理论等电点PI为8.12。经Blast比对,该序列与内切β~(-1),4-葡聚糖酶编码序列相似性达99%,确定SY286基因为内切β~(-1),4-葡聚糖酶基因。并利用SDS-PAGE电泳对该蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达结果进行了检测。经0.5mmol·L~(-1)的IPTG诱导下,重组菌在15℃、22℃、30℃和37℃条件下的表达产物均可在PAGE凝胶上出现特异性条带。经检测重组菌具有纤维素酶活性。试验结果为研究纤维素酶在植物病害生物防治中的应用,以及SY286菌株抑菌分子机理研究和菌株的遗传改良奠定了基础。
关键词：
苍白杆菌 纤维素酶 克隆 表达
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张仁义 陈家祥 蔡亚稻 杨贤芳妹 黄灿丽 王长康
选用300只1日龄麻羽肉鸡,随机分为5组,每组设4个重复,每个重复15只.Ⅰ组为空白对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加50、100、200 mg.kg-1地衣芽孢杆菌制剂,Ⅴ组为抗生素对照组,在基础日粮中添加30mg.kg-1杆菌肽锌和6 mg.kg-1硫酸抗敌素.结果表明:Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡全期的平均体增重均比空白组高,差异显著(P0.05);Ⅱ组肉鸡全期的料肉比比空白组低2.56%,差异不显著(P>0.05),比抗生素组低了6.56%,差异不显著(P>0.05);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡全期的成活率均高于空白组,略低于抗生素组,但差...
关键词：
地衣芽袍杆菌 肉鸡 生产性能 屠宰性能
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郝生宏 佟建明 杨荣芳 萨仁娜
【目的】研究耐制粒(制粒条件0.1 MPa,65℃)地衣芽孢杆菌对0~3周龄肉仔鸡生产性能、血液生化指标和粪便大肠杆菌数的影响。【方法】将自制地衣芽孢杆菌粉剂,按3 g/kg添加量与1~21日龄肉仔鸡无抗生素日粮混合,于0.1 MPa、65℃条件下制成试验颗粒料饲喂AA肉仔鸡,试验为期3周,探讨耐制粒地衣芽孢杆菌对肉仔鸡生产性能、血液生化指标和粪便大肠杆菌数的影响。【结果】与对照组相比,地衣芽孢杆菌可极显著降低1周龄肉仔鸡的平均采食量(P<0.01),显著提高3周龄肉仔鸡的血糖(GLU)水平(P<0.05),显著降低肠道大肠杆菌数(P<0.01)。地衣芽孢菌对肉仔鸡其他生产和血液生化指标无显著...
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