- 年份
- 2024(4506)
- 2023(6731)
- 2022(6063)
- 2021(5726)
- 2020(5205)
- 2019(12045)
- 2018(12037)
- 2017(22950)
- 2016(13344)
- 2015(15406)
- 2014(15836)
- 2013(15901)
- 2012(15449)
- 2011(14138)
- 2010(14647)
- 2009(13846)
- 2008(14453)
- 2007(13503)
- 2006(11648)
- 2005(10489)
- 学科
- 济(54954)
- 经济(54884)
- 管理(34492)
- 业(33350)
- 方法(27979)
- 企(26585)
- 企业(26585)
- 数学(24415)
- 数学方法(24065)
- 学(16414)
- 农(15430)
- 财(13929)
- 中国(13260)
- 贸(10794)
- 贸易(10791)
- 易(10448)
- 制(10273)
- 业经(10212)
- 地方(10175)
- 农业(9943)
- 理论(9064)
- 和(8911)
- 务(8610)
- 财务(8587)
- 银(8585)
- 财务管理(8557)
- 银行(8530)
- 融(8343)
- 金融(8337)
- 行(8081)
- 机构
- 大学(211307)
- 学院(207448)
- 济(76937)
- 研究(75234)
- 经济(75082)
- 管理(70921)
- 理学(60790)
- 理学院(59930)
- 管理学(58360)
- 管理学院(57987)
- 中国(54751)
- 科学(52888)
- 农(49306)
- 京(45989)
- 所(42394)
- 农业(39674)
- 研究所(39001)
- 业大(38790)
- 财(35884)
- 中心(33878)
- 江(33240)
- 北京(28626)
- 财经(28591)
- 范(28441)
- 师范(28007)
- 农业大学(26143)
- 州(25994)
- 院(25899)
- 经(25735)
- 省(24976)
- 基金
- 项目(135308)
- 科学(102189)
- 基金(95769)
- 研究(90141)
- 家(86612)
- 国家(85925)
- 科学基金(69993)
- 省(54042)
- 社会(53269)
- 基金项目(50664)
- 社会科(50162)
- 社会科学(50139)
- 自然(48457)
- 自然科(47302)
- 自然科学(47272)
- 自然科学基金(46413)
- 划(46160)
- 教育(42637)
- 资助(41004)
- 编号(36056)
- 重点(31606)
- 成果(31209)
- 部(29420)
- 发(28639)
- 计划(28341)
- 科研(26954)
- 创(26802)
- 科技(26192)
- 课题(25971)
- 创新(25269)
共检索到306336条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 华北农学报
[作者]
蔡恒 陈忠军 万红贵 王涛 杜连祥
为使地衣芽孢杆菌信号肽序列实现异源基因在大肠杆菌中的分泌表达,将地衣芽孢杆菌中编码耐高温α-淀粉酶的基因克隆在大肠杆菌表达载体pET-22b的T7启动子下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,在上清液中能够检测到淀粉酶活性。表明该芽孢杆菌淀粉酶基因5′端信号肽序列能够将大肠杆菌中的重组α-淀粉酶引导到胞外,完成分泌表达。同时,用该信号肽序列还实现了甜蛋白monellin基因在大肠杆菌中的分泌表达。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
潘风光 宋德群 任洪林 艾永兴 柳增善
地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α -淀粉酶(α -amylase)的优良菌株。在提取地衣芽孢杆菌基因组DNA基础上 ,通过PCR方法克隆了耐高温淀粉酶的全长基因1539bp ,与pUCm -T载体连接转化入克隆菌DH5α中 ,经过酶切鉴定筛选出阳性的克隆菌 ,再提取质粒与表达载体pET-28a( +)酶切后连接转化入宿主菌DE3中 ,其阳性重组子在37℃1.0mmol·L-1IPTG诱导下 ,α -淀粉酶的基因得到了较好的表达。表达产物经SDS -PAGE鉴定 ,确定表达蛋白的相对分子量为63000左右 ,与理论推导的分子量相一致。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈红歌 顾溯海 任随周 马向东 贾新成
从地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis )中分离到一α 淀粉酶组分 ,经PAGE及SDS PAGE检测为电泳均一的纯酶蛋白。该酶最适反应温度为 95℃ ,5 0和 70℃条件下酶活性稳定 ,90℃保温 30min残余酶活力为 2 8 9%。该酶最适作用pH为 6 0～ 6 5 ,在pH 5 0～ 8 0内稳定。酶的相对分子质量为 6 5 90 0 ,等电点 6 94 ,对可溶性淀粉的Km 值为 0 4 1mg·mL-1 。Ca2 + 、Mn2 + 、Cu2 + 、Co2 + 及Ba2 + 对酶具有激活作用 ,其中Ca2 + 激活作用最显著 ,且以 4～ 8mmo...
关键词：
耐高温α-淀粉酶 地衣芽孢杆菌 酶学特性
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈晓月 金宁一 邹伟 海洋 马海利 李昌
根据GenBank中枯草芽孢杆菌的P43启动子基因序列,设计合成了一对引物,用PCR方法钓取枯草芽孢杆菌AS.1655菌株的启动子基因,PCR产物经琼脂糖凝胶回收纯化后,连接到pMD18T-simple载体上,进行序列测定。测序结果表明:枯草芽孢杆菌AS.1655菌株的启动子全长427 bp,由两个叠加的启动元件组成,分别为5σ5和3σ7 RNA聚合酶识别的位点,与GenBank中的其他序列比较发现核苷酸的同源性为99.5%,氨基酸的同源性为98.6%,说明枯草杆菌P43启动子的基因序列高度保守。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张杰 刘永生 马庆生
运用底物筛选法从地衣芽孢杆菌GXN151的基因文库中筛选到3类表达羧甲基纤维素酶活性的克隆。对克隆pGXNP11的测序表明其含有纤维素酶基因cel9A和cel48A的部分序列熏cel9A基因为1899bp熏可编码含633个氨基酸的内切葡聚糖酶cel9A熏cel9A的N-末端第21~456氨基酸形成家族9糖基水解酶催化功能域,第480~565氨基酸为家族3碳水化合物结合组件功能域,cel48A基因位于ce19A基因的下游,两者可能共用一个操纵子。cel48A基因编码一个外切纤维素酶熏通过染色体步移法将cel48A定位于4kbEcoRI片段上或10kbSalI片段上。
[期刊] 华北农学报
[作者]
徐欢 冯湘沅 郑科 杨琦 段盛文 成莉凤
为了获得高酶活力的苎麻脱胶果胶裂解酶，为后续分子改造和新型苎麻生物脱胶酶制剂复配提供理论依据。将果胶裂解酶基因pel419从重组质粒pEASY-Blunt E1-pel419更换至pET28a载体中，转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达；用SDS-PAGE和Western Blot检验pel419基因的表达效果；用生物信息学软件分析Pel419理化表征和系统发育，预测其二级结构、高级结构及关键氨基酸位点。结果表明，工程菌pET28a-pel419/BL21的果胶裂解酶活力为434.4 U/mL,较pEASY-Blunt E1-pel419/BL21提高了1.7倍；Pel419含375个氨基酸，N末端前22个氨基酸为信号肽，理论pI值为6.59,有4个半胱氨酸，不稳定系数为18.20;其蛋白结构域含有典型的右手β-螺旋结构，属于Pec lyase C家族；Pel419的Ca~(2+)结合位点为ASP151、ASP153和ASP192,定位发现3个保守位点均暴露在三维空间的表面，并处于底物结合空间口袋。大幅度提高了Pel419表达量，并获得了Pel419关键结构信息。
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡苗清 姚明泽 张耀华 付月君 梁爱华
对分离得到的两个菌株(B.H和B.M)进行鉴定,并对它们在芽孢杆菌培养基和淀粉富集培养基上的形态进行观察,通过对其16S rDNA序列的分析,构建系统进化树,确定B.H为枯草芽孢杆菌,B.M为解淀粉芽孢杆菌。根据已报道的枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌淀粉酶基因保守区域设计引物,分别以两个菌株的基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法成功获得两个淀粉酶基因,其编码区的长度分别为1 434 bp和1 563 bp,为该菌株的进一步利用开发提供了数据支持。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
祝发明 刘辉 曹要玲 杨明明 曹斌云
从枯草芽孢杆菌1A 747菌株基因组克隆Am yX基因信号肽序列,构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pYGAm yX,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGAm yX)。采用重叠PCR技术,将Am yX基因信号肽突变,使其N端正电荷增加,H区疏水性降低,利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pYGMUT,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGMUT)。对W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT)的表达产物进行检测,研究Am yX基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响。结果表明,W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT均...
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢凤行 赵玉洁 周可 张峰峰 李亚玲
为提高枯草芽孢杆菌产生淀粉酶能力,从养虾池、混养池及污染河流的底质活性污泥中分离到12株枯草芽孢杆菌,通过淀粉降解试验筛选到产酶能力较高的菌株H4和H5,菌株淀粉酶活性分别为38.66,37.10 U/mL。以筛选到H4和H5为原始菌株,采用紫外诱变的方法对H4和H5进行连续诱变筛选产淀粉酶高的突变株。结果发现,第一次诱变后突变株的酶活分别为原始菌株的107%和111%;经过第二次诱变后,H4的突变株H4Ⅱa,H5的突变株H5Ⅱa和H5Ⅱb的产酶能力有很大程度的提高,分别为原始菌株的147%,136%和135%,酶活达56.95,50.47和50.02 U/mL,说明紫外连续诱变有利于突变株产...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
古英洪 汤浩茹 张义正
【目的】克隆桃(Prunus persica)多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase-inhibiting protein,PGIP)基因,并进行原核表达研究。【方法】根据李属植物pgip保守区域设计1对特异引物,以桃叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约1kb的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达质粒,转化到Escherichia coli Rosetta-gami(DE3)pLysS中进行表达。【结果】测序结果显示,桃多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白cDNA编码区...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄天培 潘洁茹 李今煜 洪永聪 黄志鹏
通过设计蛋白酶基因引物,对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)库斯塔克亚种菌株8010蛋白酶基因进行克隆,获得了6个蛋白酶基因片段,即中性蛋白酶A、色氨酸合成酶β链、色氨酸合成酶α链、碱性蛋白酶A、磷酸化水解酶和糖原磷酸化酶基因,以及1个未知功能的DNA片段(可能是编码蜡质芽孢杆菌组特有蛋白的基因).
关键词：
苏云金芽孢杆菌 克隆 蛋白酶 序列分析
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李国富 栗君 卢磊 潘俊波 赵敏 王天女 徐腾飞 王靖瑶
为获得性能优良的细菌漆酶,利用含铜富集培养基从森林土壤中分离到一株具有较好漆酶活性的细菌菌株LC03,经生理生化实验和16SrDNA序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌株培养6d后的芽孢漆酶活性最高,可达48.5U/g。菌株LC03的芽孢漆酶氧化底物2,2'-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)和丁香醛连氮的最适pH值分别为3.8和6.8,以丁香醛连氮为底物时的最适反应温度为60℃。该芽孢漆酶具有较好的稳定性,经70℃处理10h或pH9.0条件下放置10d仍能保持漆酶活性,同时对抑制剂SDS和EDTA具有一定的抗性。Li+、Na+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Al3+对漆酶活性...
关键词：
漆酶 解淀粉芽孢杆菌 酶学性质
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
栗君 李国富 卢磊 潘俊波 赵敏 王天女 徐腾飞 王靖瑶
解淀粉芽孢杆菌LC03的芽孢漆酶具有较好的稳定性,通过制备具有漆酶活性的芽孢悬液,研究了芽孢漆酶对4种合成染料RB亮蓝、活性黑、靛红和结晶紫的脱色效果,并筛选出促进染料脱色的漆酶介体,同时考察了酶浓度、介体浓度对模拟染料废水脱色的影响。结果表明:RB亮蓝﹑活性黑和靛红在无介体时不能被脱色,在乙酰丁香酮(ACE)介导下的脱色率都超过了60.00%;在pH9.0时,芽孢漆酶-介体系统对模拟染料废水脱色的酶浓度和介体浓度分别为88.64U/L和0.5mmol/L时,2h后脱色率可超过80.00%,表明该芽孢漆酶在染料废水的处理上具有较好的应用前景。
关键词：
解淀粉芽孢杆菌 漆酶 介体 染料脱色
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张建成 杜俊杰 刘和 王鹏飞 薛晓芳 穆霄鹏 陈俊奇
【目的】克隆、分析欧李[Cerasus humilis(Bge)Sok]八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)基因,并利用大肠杆菌异源表达体系验证其功能。【方法】以欧李果实中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增到PSY cDNA中间片段,再利用RACE技术获得该基因cDNA全长并分析其序列;然后利用PCR技术获得欧李PSY cDNA编码区全长,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+),获得重组质粒pET-ChPSY,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并利用工程菌株验证融合蛋白6×His-PSY的催化活性。【结果】欧李PSY cDNA全长1 559 bp,...
关键词：
欧李 八氢番茄红素合成酶 克隆 功能表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑朝朝 刘聚祥 李辉 刘静 李宏娟
为监测大肠杆菌的耐药性,了解不同动物源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因flor的差异及其对大肠杆菌耐药性影响,对从保定及其周边地区分离的23株鸡源、14株猪源大肠杆菌进行耐药性测定,并对其氟苯尼考耐药基因flor进行了变异性分析。结果表明,氟苯尼考耐药菌株检出率分别为62%和58%,不同动物源flor基因同源性为99.8%,与GenBank报道的flor基因比较存在3个氨基酸替代,鸡源flor基因在开放阅读框的第439,479,683等位存在点突变,猪源flor基因在开放阅读框的第439,683,1100等位出现点突变。
关键词：
氟苯尼考 耐药性 flor PCR
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
