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[期刊] 华北农学报
[作者]
张立荣 杨文香 刘大群
以大麦条纹花叶病毒(Barley stripe mosaic virus,BSMV)改造的VIGS(Virus induced gene silencing)载体在单子叶植物中能够介导基因沉默,因此BSMV在植物基因功能鉴定中具有广泛的应用。本试验通过在近等基因系TcLr24中对BSMV VIGS载体系统进行优化,以保证更方便地在小麦近等基因系(NIL)中实施VIGS功能验证。
关键词：
大麦条纹花叶病毒 VIGS 基因功能鉴定
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李萌晗 王威 邹积鑫 李东栋
以油棕八氢番茄红素脱氢酶基因（phytoene desaturase gene,PDS）作为报告基因，探索以病毒载体TRV为载体在油棕胚状体上应用病毒诱导基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）的可能性，并对油棕胚状体VIGS体系的相关参数进行优化。结果显示：以EHA105为菌种、侵染菌液OD600=0.5、侵染时间5 min、乙酰丁香酮（AS）质量浓度20 mg/L、共培养48 h、侵染后培养时间为12 d能取得最佳的基因沉默效果。在此基础上，利用优化后的VIGS体系对油棕二酰甘油酰基转移酶基因（diacylglycerol acyltransferase gene,DGAT）进行沉默，取得了预期的基因沉默效果。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张晓萝 张之为 娜仁 杨叔清 高婧 赵君
以马铃薯X病毒载体PVX为工具,探究不同马铃薯品种和不同侵染方式对PVX介导的VIGS沉默体系的影响,结果表明:马铃薯基因型的差异是影响VIGS沉默效果的主要因素。通过对VIGS沉默pds(八氢茄红素脱氢酶)基因的植株进行半定量RT-PCR检测,发现在所有供试的马铃薯品种中,乌盟601中pds基因的沉默效果最好,侵染后pds基因表达量下降了79.8%;而虎头、夏坡蒂和大西洋中的pds基因表达量也有不同程度降低,分别为64.1%,31.0%,4.5%。不同侵染方式即叶片注射和茎秆刺伤的试验结果表明,VIGS沉默效果和侵染方式的相关性不显著,采用叶片注射和茎秆刺伤接种马铃薯品种乌盟601,pds基...
关键词：
VIGS 沉默 马铃薯 接种方法
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李萌晗 王威 邹积鑫 李东栋
为开展油棕油脂代谢调控相关基因鉴定研究，以油棕八氢番茄红素脱氢酶基因（phytoene desaturase gene,PDS）作为报告基因，探索以病毒载体TRV为载体在油棕胚状体上应用病毒诱导基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）的可能性，并对油棕胚状体VIGS体系的相关参数进行优化。结果显示：以EHA105为菌种、侵染菌液OD600=0.5、侵染时间5 min、乙酰丁香酮（AS）质量浓度20 mg/L、共培养48 h、侵染后培养时间为12 d能取得最佳的基因沉默效果。在此基础上，利用优化后的VIGS体系对油棕二酰甘油酰基转移酶基因（diacylglycerol acyltransferase gene,DGAT）进行沉默，取得了预期的基因沉默效果。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘鹏 王帅帅 杨高山 张恒 韩胜芳 王冬梅
【目的】建立农杆菌介导的瞬时沉默小麦HCP1的方法,为简便、快速、高效地研究小麦基因功能提供一种可靠的技术支持。研究HCP1在叶锈菌侵染过程中对H2O2的清除作用,为阐明小麦抗叶锈菌侵染中信号转导机制奠定理论基础。【方法】采用农杆菌注射法,将携带有pe GFP载体的农杆菌注射到小麦叶片中,观察叶片中荧光强度及分布,分析外源质粒在小麦叶片中的表达情况。通过注射EHA105、LBA4404和C58C1 3种不同的农杆菌菌株,将HCP1的RNAi载体导入小麦叶片细胞中,利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测HCP1瞬时沉默效率,并结合Rohringer染色分析,明确不同农杆菌对寄主叶片侵染能...
[期刊] 企业管理
[作者]
仇勇 张耕墨
对包括员工建言在内的管理活动应强调"内在唤醒"而非"外在约束"。只有员工"由内而外"地将组织目标和个体追求相链接,才会主动进行高质量的建言。2019年新东方年会神曲瞬间引燃朋友圈,公开的"吐槽"直戳无数职场人的心窝:"只会为老板的朋友圈高歌,领导随口一说,立刻讨好跟着""干活的累死累活,有成果那又如何,到头来干不过写PPT的"。歌词中员工所"吐槽"的"职场怪事"
关键词：
职场沉默 员工建言 心理安全感 内在激励
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨彦君 丁磊 马欢 吴云锋
[目的]揭示小麦蓝矮植原体(WBD phytoplasma)的致病机理及其与寄主的互作关系,为植原体病害防治提供理论依据。[方法]以SWP16为诱饵,将SWP16构建到诱饵载体pBT3-STE和pBT3-SUC上,在小麦酵母双杂交膜系统cDNA文库中筛选与SWP16互作的蛋白,并确定最佳的筛库条件。通过α-半乳糖苷酶活性检测试验对筛选到的互作蛋白进行二次验证,并运用Uniprot对其进行Gene Ontology(GO)注释分析。[结果]以pBT3STESWP16作为筛库的诱饵蛋白,确定20 mmol/L 3-AT为筛选文库的最佳浓度,从小麦cDNA文库中筛选到20种互作蛋白,包括Rieske蛋白、细胞色素b5、CASP蛋白等。经过复筛和α-半乳糖苷酶活性检测试验进一步验证了互作关系,其中14种互作蛋白参与运输、pH调节、光合作用、内质网应激反应、蛋白质泛素化等生理过程;18种互作蛋白存在于线粒体、内质网、细胞膜、细胞质、叶绿体和细胞壁等6种细胞组分中;20种互作蛋白的分子功能主要包括几丁质酶活性、反转运蛋白活性、脱水酶活性、转移酶活性和转录因子活性等。[结论]筛选获得20种与小麦蓝矮植原体效应蛋白SWP16互作的蛋白,有助于推动小麦蓝矮植原体与寄主互作关系的研究。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王新博 任永哲 岳慧芳 李乐 吕伟增 史校艳 辛泽毓 王志强 林同保
为了进一步研究Ta EF-1α基因在小麦响应干旱胁迫中的作用,首先在正常灌水和干旱胁迫2个处理下对Ta EF-1α基因在转录水平上的表达量进行了验证,并利用VIGS(Virus induced gene silencing)技术将Ta EF-1α基因进行沉默,对其功能进行研究。结果表明,Ta EF-1α基因在m RNA水平上的表达量与其蛋白水平上的变化趋势一致,均受干旱诱导上调表达。与正常灌水且未进行VIGS沉默处理的植株相比,干旱处理且未进行VIGS沉默处理的植株中Ta EF-1α基因表达量极显著升高,其叶片相对含水量也极显著降低、相对电导率和丙二醛(MDA)含量则极显著升高;干旱条件下,与未进行VIGS沉默的对照植株相比,VIGS沉默后的植株中Ta EF-1α基因表达量极显著下降,其叶片相对含水量也极显著降低、相对电导率和丙二醛(MDA)含量则极显著升高,植株表现出叶片下垂、对干旱胁迫敏感的表型。综合干旱处理和VIGS沉默Ta EF-1α基因后小麦植株的表型和生理指标变化,说明干旱胁迫诱导小麦植株中Ta EF-1α基因上调表达,敲低Ta EF-1α基因表达后小麦抗旱性显著下降,因此,Ta EF-1α基因在小麦响应干旱胁迫中可能发挥了重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘晓彬 刘娜 李福宽 吴立柱 张洁 王冬梅
【目的】病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术已在植物基因功能研究领域得到广泛应用。建立以TRV为载体介导的大豆基因瞬时沉默体系,为将烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默技术在大豆与大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)互作体系中对大豆基因功能进行研究提供基础。【方法】从大豆品种冀豆7号(J7)叶片中特异性扩增八氢番茄红素脱氢酶基因(Gm PDS)的部分片段,并将该基因片段插入质粒p TRV﹕RNA2中;向J7的第一位真叶注射携带有TRV或TRV﹕Gm PDS的农杆菌,注射...
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
哀建国 杨勇
基因沉默是生物体基因表达调控的一种重要机制,在各种生物体中普遍存在。基因沉默可以分为转录后基因沉默(post transcriptionalgenesilencing,PTGS)和转录基因沉默(transcriptionalgenesilencing,TGS)。最近的研究发现,在植物中,TGS和PTGS都和RNAi有关。RNA介导的基因沉默为大规模植物生化代谢途径和基因功能的研究提供了一种高通量的反向遗传学手段。简要地介绍了RNAi和RNA介导的DNA甲基化的分子机制,并介绍了RNA介导的基因沉默在植物体中的作用及其在植物基因工程方面的应用。图1参31
[期刊] 华北农学报
[作者]
张怡 徐克东 杨松 李豪 曹鹏 魏森 韦丹丹 李成伟
构建蔊菜的病毒诱导基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系,旨在建立蔊菜的快速基因功能验证的方法。通过RT-PCR扩增出棉花、大豆、拟南芥的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)基因片段,并将其分别构建到烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的VIGS载体,通过农杆菌GV3101侵染蔊菜并观察蔊菜的表型变化。结果显示,3种不同的CLA基因所侵染的蔊菜均出现不同程度的白化现象,半定量RT-PCR检测显示CLA的mRNA被显著降解,表明成功构建了蔊菜的VIGS体系。
[期刊] 华北农学报
[作者]
方先文 张云辉 张所兵 林静 汪迎节
水稻稻瘟病是最具毁灭性的病害之一,严重地影响水稻的高产和稳产。在病原菌侵染水稻时,附着胞的形成对稻瘟病菌的致病性起着关键作用。研究证实一种P型ATP酶(P-ATPase)参与了附着胞的形成。在病原菌与寄主的互作过程中,寄主的一些小分子物质可以进入病原菌中,达到抗病原菌侵染的目的。以稻瘟菌致病关键的P-ATPase基因MgAPT2第一外显子上特异性好的232 bp的区域作为干扰片段,正反向插入干扰载体中,通过农杆菌介导,转化到感稻瘟病水稻品种日本晴中,通过苗期稻瘟病接种鉴定和MgAPT2基因的表达检测,结果表明:转基因植株稻瘟病抗性得到增强且稻瘟病菌MgAPT2基因的表达量下降,为水稻抗稻瘟病种...
关键词：
水稻 抗稻瘟病 基因沉默
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑璐平 谢荔岩 林奇英 谢联辉
对病毒诱导的基因沉默(VIGS)的发现、载体的开发、作用机理和优势的研究,以及VIGS在植物基因功能鉴定上的应用和展望进行了综述.
关键词：
病毒诱导的基因沉默 载体 功能鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
屈淑平 徐文龙 崔崇士
参照拟南芥WRKY33转录因子基因序列设计引物,利用RT-PCR技术从大白菜中克隆了WRKY33基因编码区460bp的序列,利用双链RNA介导的基因沉默技术,构建WRKY33基因沉默植物表达载体,为进一步研究该基因在植物与软腐病菌互作中的功能及其作用机制奠定基础。首先将WRKY基因片段连接至pUCm-T载体上,用PstⅠ/BamHⅠ和PstⅠ/XhoⅠ分别对pUCm-WRKY载体进行酶切,得到2个WRKY基因片段;先后将其连接到pBSSK-in载体上,构建成pBSSK-WRKY-in-WRKY载体,该载体中的2个WRKY片段大小一致,反向重复;并用SacⅠ/KpnⅠ酶切pBSSK-WRKY-i...
[期刊] 企业管理
[作者]
郑晓涛 郑兴山 石金涛
本文根据员工沉默动机的不同,提出了员工沉默的三种类型:默许沉默、漠视沉默和人际恐惧沉默,并认为通过培养组织信任的氛围可以改善员工沉默的行为。
关键词：
员工沉默 类型 改善方法 评估工具
文献操作()
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