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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈燕萍 陈美霞 徐建堂 陈晖 陶爱芬 祁建民
采用改良的CTAB法从圆果黄麻成熟叶片中提取基因组DNA,对DNA进行电泳检测、含量测定和SRAP分析,并对黄麻SRAP-PCR反应体系中主要影响因子进行了优化,建立了最佳反应体系.结果表明,改良的CTAB法能够提取高质量的DNA,DNA纯度和完整性都较好,经紫外分光光度计测定,D260 nm/D280 nm均在1.7-1.9之间,无降解现象,蛋白质、多糖类等去除彻底.所建立的SRAP最佳反应体系(25μL)中5种成分的适宜浓度及用量分别为:Taq DNA聚合酶1.75 U,Mg2+3.0 mmol.L-1,dNTPs 0.16 mmol.L-1,引物0.51μmol.L-1,模板DNA 80...
关键词：
圆果黄麻 DNA提取 SRAP反应体系
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡敏 徐凌飞 张军科 仇宗浩 丁勤 张静
【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDS-PAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1h,选用长17cm、pH 4～7的IPG胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100V30min、180V 6h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。
关键词：
梨 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
曹雅琴 刘峰 陈建荣 郭清泉
以湘苎2号、湘苎3号、新宁青麻、四川洪县园麻的叶片为材料,构建4个品种高效、稳定的不定芽再生体系.湘苎2号、湘苎3号、新宁青麻、四川洪县园麻最适诱导愈伤组织及分化不定芽的培养基分别为MS+0.7 mg/L TDZ+0.02 mg/L 2,4-D,MS+0.3 mg/L TDZ+0.01 mg/L 2,4-D,MS+0.3 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D,MS+0.9 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D;不定芽分化率分别为83.3%,81.7%,90.0%,86.7%;4个品种再分化时出现丛生芽,新宁青麻愈伤组织的平均再生不定芽数达2.62个,其他3个品种也都有数...
关键词：
苎麻 愈伤组织 不定芽 再生体系
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
闫允青 姜桦韬 谷超 吴俊
[目的]本文旨在获得高效的‘雪花梨’扩繁体系和叶片再生体系。[方法]以‘雪花梨’茎段为材料,通过调控培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)的配比,统计其芽增殖率和植株高度,筛选出适宜‘雪花梨’扩繁的培养基;以‘雪花梨’叶片为材料,通过比较基础培养基种类、叶片接种方式、激素种类和浓度配比及暗培养时间对‘雪花梨’叶片再生率、愈伤发生率、平均每叶再生芽数和褐化率的影响,以获得高效的叶片再生体系。[结果]适宜‘雪花梨’扩繁的培养基为MS+1.0 mg·L(-1)6-BA+0.3 mg·L(-1)I
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
徐建华 杨虹琦 杨程 周冀衡 段凤云 陈信波 詹莜国 赵世浩
以8个烤烟栽培品种为试验材料,对烟草基因组DNA的提取方法进行比较,并对建立烟草SRAP-PCR反应体系的影响因子设置梯度试验.结果显示:改进的CTAB法能较好地满足烟草基因组DNA的提取,在20μLSRAP-PCR的反应体系中,DNA模板40ng、Mg2+1.5mmol/L、dNTP0.25mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq聚合酶1.5U,8个烤烟品种的扩增多态性高,带型清晰,差异明显.
关键词：
烟草 DNA提取 SRAP 优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢欢 杨文香 彭巧慧 赵丽娟 刘力伟 张娜 刘大群
以Thatcher及23个以Thatcher为遗传背景的小麦抗叶锈病近等基因系为材料,开展了MITE扩增体系的建立研究,获得了适合小麦MITE分子标记的扩增体系及不同引物的退火温度,所用56对引物有27对获得稳定扩增。
关键词：
小麦叶锈病 抗病基因 MITE 分子标记
[期刊] 华北农学报
[作者]
齐靖 董祯 申连英 毛永民 陈亮
以冬枣DNA为研究对象,利用单因素试验,分析了Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,经优化建立了枣属植物最适ISSR-PCR反应体系,25μL反应液中包含1×PCR Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTP、1.5 UTaq酶、1.25μmol/L引物和50 ng模板,最适退火温度为58℃。PCR反应体系的建立为应用ISSR标记技术开展枣种群遗传变异分析和构建遗传图谱奠定基础。
关键词：
枣 ISSR 体系优化
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈慧洁 郭朦朦 冯丽贞 林燕萍 许诺 邹霖湘
对桉树(Eucalyptus spp.)叶片蛋白质的提取方法、溶解方法、溶解条件和上样量进行了优化.结果表明,TCA/丙酮沉淀/苯酚抽提法是桉树叶片蛋白质样品制备的最优方法;裂解缓冲液Ⅰ(7 mol·L-1尿素+2 mol·L-1硫脲+0.04 g·m L-1CHAPS+60 mmol·L-1DTT+0.5%(体积分数)IPG Buffer)可保证蛋白质样品的溶解,较适用于桉树叶片蛋白裂解;对于18 cm、p H 4-7的线性胶条,当每根胶条上样量为50μg时,采用银染可得到质量较高的2-DE图谱.
关键词：
桉树 叶片 双向电泳 优化
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
冯莹 赖钟雄
以石斛兰叶片为材料,建立了叶片外植体的离体再生体系.结果表明:KC+4 mg·L-16-BA+1 mg·L-1NAA是石斛兰叶片诱导原球茎的最佳培养基,诱导率为11.99%;原球茎适宜的增殖培养基为KC+2 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA,增殖倍数达到8.02;分化培养基为1/2 MS+0.5 mg·L-16-BA;最佳的壮苗生根培养基为1/2 MS+1 mg·L-1NAA,最佳移栽基质为棕树皮,成活率达到93.33%.
关键词：
石斛兰 原球茎 增殖 分化 小苗
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李佳 沈斌章 韩继祥 甘莉
一种有效提取油菜叶片总ＤＮＡ的方法李佳，沈斌章，韩继祥，甘莉（华中农业大学中心实验室武汉４３００７０；华中农业大学农学系武汉４３００７０）关键词ＤＮＡ，提取方法，试剂，国产，油菜ＡＥＦＦＥＣＴＩＶＥＰＲＯＣＥＤＵＲＥＦＯＲＥＸＴＲＡＣＴＩＮＧＴＯＴＡ...
关键词：
DNA,提取方法,试剂,国产,油菜
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李静 曾德贤 吴子欢 范林元 刘飞虎
用种子提取DNA可省却培育幼苗过程而加快实验进度,为此建立了麻疯树(Jatropha curcas L.)种子DNA提取方法。针对麻疯树种子富含蛋白质、多酚及多糖等次生物质的特点,基于CTAB法进行优化,在研磨种子时加入抗氧化剂PVP去除多酚,接着用核分离缓冲液去除多糖,再通过酚-氯仿-异戊醇(体积比=25∶24∶1)抽提去除蛋白质。所提取的麻疯树种子总DNA浓度和质量均较高,经琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增得到了非常清晰的DNA条带。
关键词：
麻疯树 种子DNA提取 改良CTAB法
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马庆华 王贵禧 梁丽松
【目的】建立和优化枣的选择性扩增微卫星(SAM)技术体系,丰富枣群体遗传学研究的方法,同时为枣利用SAM法开发SSR引物提供技术参考和模板。【方法】以冬枣、大荔龙枣和金丝小枣为试材,采用CTAB法提取样品DNA,对SAM试验过程中的酶切-连接、抑制性扩增、预扩增、选择性扩增等关键因子进行研究。【结果】利用PstⅠ和MseⅠ双酶切系统,分步法进行酶切-连接是后续试验成功的关键,抑制性扩增(20.0μL体系)模板取酶切连接液2.0μL,预扩增和选择性扩增(20.0μL体系)的模板分别取上步扩增的稀释产物各2.0μL;抑制性扩增和预扩增反应中,ExTaq取0.5U,反应25个循环,产物稀释20倍进行...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
孟现东 陈益泰
从SDS、CTAB、高盐低pH值3种方法中选择了CTAB法作为枫香适合的DNA提取方法,同时构建了枫香DNA的PCR扩增程序,并从Mg++浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、引物浓度、DNA模板用量等方面优化了PCR扩增程序。
关键词：
枫香 DNA提取 PCR扩增程序
[期刊] 林业科学研究
[作者]
郁萌萌 施国新 吕群丹 杨磊 唐仁杰 张洪霞
In this study,an efficient regeneration system of Broussonetia papyrifera was established.Using leaf disks and petiole fragments as explants,MS media supplemented with different concentrations of BA and NAA were investigated for shoot induction.Then regenerated shoots were transferred to MS medium c...
关键词：
光叶楮 组织培养 快繁
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨秀梅 瞿素萍 王丽花 崔光芬 彭绿春 王继华
以百合鳞片为材料,采用改良的CTAB法获得了高质量的基因组DNA。通过影响PCR反应各因子的优化,建立了适合百合的RGA-PCR反应体系:25μl体系中含30 ng模板DNA、2.5 mmol/L MgCl2、0.2 mmol/L dNTPs、0.6μmol/L引物及1.5 UTaq酶。扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,44℃退火1 min,72℃延伸2 min,40个循环;最后72℃延伸7 min。利用该体系对35个百合品种进行RGA-PCR,表明该反应体系具有较好的稳定性和可靠性。
关键词：
百合 DNA提取 RGA-PCR
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