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[期刊] 中国水产科学
[作者]
李宏俊 王娟 高祥刚 苏浩 刑坤 傅立元 赫崇波
通过表达序列标签法和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,分离和克隆了圆斑星鲽(Verasper variegatus)主要组织相容性复合体(MHC)IIB的全长cDNA序列,该cDNA全长为1144bp,5'UTR(untranslated region)为7bp,3'UTR为450bp,开放阅读框(ORF)长度为687bp,可编码228个氨基酸,包含信号肽、抗原结合域(β1)、IGC区(β2)、跨膜区和胞质区5个结构域。同源分析表明,圆斑星鲽MHCIIB氨基酸序列与其他硬骨鱼具有49%～79%的同源性,与鼠、人、红原鸡和护士鲨的相似性较低,分别为34%、33%、31%和30%。圆斑星鲽MH...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王晓冰 刘至治 李强 张璐菲 张俊彬
为探究金钱鱼（ＳｃａｔｏｐｈａｇｕＳ ａｒｇｕＳ）Ｍｈｃ Ⅱβ基因的结构和特性，采用同源克隆和ｒａｃＥ等技术，在获得ｃＤＮａ全序列的基础上，分析其内含子序列、基因多态性和组织表达情况。结果表明，金钱鱼Ｍｈｃ ＩⅡβ基因ｃＤＮａ序列全长１１７２ ｂｐ，其中５′ｕｔｒ长３４ ｂｐ，３′ｕｔｒ长３８８ ｂｐ，开放阅读框（ｏｒＦ）长７５０ ｂｐ，编码２４９个氨基酸，包含信号肽、β１结构域、β２结构域、连接肽（ｃｐ）、跨膜区（ｔＭ）和胞质区（ｃＹｔ）；Ｍｈｃ Ⅱβ基因由６个外显子和５个内含子组成，其中内含子３将β２结构域分开。从４３尾金钱鱼的２０９个有效克隆中，获得２０９条不同的核苷酸序列，可归为４８个．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
杨珍珍 边力 张岩 常青 陈四清 刘长琳 葛建龙 胡建成 张盛农
本研究采用RACE末端扩增方法,得到全长为3872bp的圆斑星鲽(Verasper variegatus)piwil2基因序列,命名为Vvpiwil2,开放阅读框(ORF)长为3192bp,编码1063个氨基酸,5’-UTR和3’-UTR的长度分别140 bp和540 bp。基于ExPASy、SMART、Signal4.1和NCBI的保守结构域(CDD)数据库在线分析对蛋白序列结构进行预测,推断Vvpiwil2编码的氨基酸分子量为118.6 kDa,理论等电点为9.02,无跨膜结构及信号肽,有3个结构域:ArgoL1结构域、PAZ结构域及PIWI结构域。利用实时荧光定量PCR技术对圆斑星鲽不同发育时期的胚胎、仔稚鱼以及雌雄成鱼的不同组织表达模式进行分析。结果显示,Vvpiwil2基因从胚胎发育早期至高囊胚期均大量表达,之后呈下降趋势,直至孵化阶段。由于胚胎从卵裂至囊胚时期的发育过程主要受细胞质成分引导,直至原肠早期,mRNA开始大量转录合成,实现由母源型向合子型的过渡,推断Vvpiwil2是母源性基因。孵化后仔稚鱼68 d时,Vvpiwil2基因表达量显著高于其他时期,表明Vvpiwil2的功能可能与圆斑星鲽性腺分化过程相关;Vvpiwil2基因在雌雄成鱼性腺中的表达量显著高于其他组织,且卵巢中的表达量显著高于精巢,推测Vvpiwil2基因在卵巢功能的维持中发挥重要作用。本研究结果为解析圆斑星鲽性别决定机制提供了新的靶标基因,为建立全雌化苗种繁育技术打下坚实的理论基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
郑风荣 郭湘云 刘洪展 李青 王波
为了研究星斑川鲽ＭＨＣⅡ类分子的作用及调控机制，实验通过ＳＭＡＲＴ－ＲＡＣＥ技术克隆得到了星斑川鲽ＭＨＣⅡ恒定链（ＭＨＣⅡＩＩ）的全长ＣＤＮＡ序列，其长度为１７６６ ｂｐ，包含１３５ ｂｐ的５′非编码区、８３７ ｂｐ的开放阅读框和７９４ ｂｐ的３′非编码区。该基因共编码２７９个氨基酸。理论分子量为３０．８４８ ｋｕ，等电点为６．８９。与已知物种ＭＨＣⅡＩＩ进行同源性比对，结果与狼鲈、紫红笛鲷和鳜关系较近，同源性均为７９％。利用ｑｕＡＮＴＩＴＡＴＩｖＥ ＲＥＡｌＴＩＭＥ ｐＣＲ（ｑＲＴ－ｐＣＲ）技术检测了ＭＨＣⅡＩＩ在星斑川鲽不同组织中的表达，以及爱德华氏菌感染前后对该基因在不同组织中表达水平的．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张乐乐 边力 常青 侯吉伦 陈四清 赵庆 刘琨 葛建龙 刘长琳
本研究筛选到圆斑星鲽(Verasper variegatus)的性别相关基因sox9,并通过RACE技术获得了全长序列,基因全长为3287 bp,包括1431 bp的ORF,编码477个氨基酸,368 bp的5’UTR和1488 bp的3’UTR。在3’UTR中有多聚腺苷酸尾和加尾信号AATAAA。通过荧光定量PCR测定了sox9基因在圆斑星鲽成鱼不同组织中的表达水平,发现sox9基因在圆斑星鲽的脑、眼、鳃、心、肝、胆、肠、精巢、卵巢、肾和肌肉等各个组织中都有不同程度的表达。在鳃、脑和精巢组织中检测到较高水平的sox9转录,其中精巢中的转录水平显著高于其他组织,sox9基因在性腺中的表达显示出性别两相性差异。其在精巢中的表达水平要显著高于卵巢,说明sox9基因与雄性性腺发育相关。通过测定sox9基因在圆斑星鲽幼鱼不同发育时期(20、30、40、50、60、70和80日龄)的表达水平,发现其在20～50日龄表达量逐渐下降,在60日龄时表达量上升,推测表达量上升可能与幼鱼性腺分化相关。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张天睿 刘至治 刘俊 赵雪锦 王成辉
以cDNA为模板进行PCR扩增和克隆分析,从7尾玻璃红鲤(Cyprinus carpio var.wananensis)的70个有效克隆中,获得长度为624 bp的MHC IIα/β不同编码序列25/31个,分属于7/10个不同等位基因,揭示玻璃红鲤MHC II类基因的多态性仍较丰富。其中Cyca-DXA17*01和Cyca-DAB1*1201、Cyca-DAB1*1301、Cyca-DAB3*1901、Cyca-DAB3*2001、Cyca-DAB3*2101、Cyca-DAB3*2201为新发现的7个基因。分析表明,α1/β1结构域的核苷酸/氨基酸变异位点数明显高于α2/β2结构域;α1、...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
沙珍霞 陈松林 田永胜
以圆斑星鲽(Verasper variegatusTemminck et Schlegel)头肾细胞为材料,采用PHA体内注射,空气干燥法制备了染色体,并对其染色体核型进行了分析。结果表明,圆斑星鲽的染色体为46条,全部为端部染色体,核型公式为:2n=48t,NF=46。在已进行过染色体核型分析的鲽形目鱼类中,只有圆斑星鲽具有该核型。
关键词：
圆斑星鲽 染色体 核型
[期刊] 水产学报
[作者]
周芬娜 董忠典 李同明 傅咏 王慧
为进一步了解鱼类MHC ⅡA基因的特点及其在免疫反应中的功能,采用同源克隆、RACE-PCR、巢式PCR等技术,从健康的尼罗罗非鱼体获得1 205 bp的MHC ⅡA基因cDNA全序列(Orni-DBA-0101,Genebank登录号:JF719813)及1 388 bp的基因组序列。序列分析发现,尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因含4个外显子和3个内含子,开放阅读框长720 bp,编码239个氨基酸。从4尾尼罗罗非鱼中共得到8条不同的cDNA序列,分别编码不同的氨基酸序列。氨基酸序列比对后发现,序列间存在丰富的多态性,且主要集中在α-1区,多态性位点数远远高于半滑舌鳎MHC ⅡA基因。生物信息学分...
[期刊] 水产学报
[作者]
张海琛 许保可 阿琳林 马清花 高强 田文根 俞录贤 梁健
主要组织相容性复合体（MHC）是机体中参与免疫应答的主要因子，在免疫功能调节过程中发挥了重要作用。为探究青海湖裸鲤中该基因可能发挥的作用，实验利用RACE技术克隆获得了青海湖裸鲤MHCⅡα/β基因和伴侣基因Ii全长cDNA序列以及花斑裸鲤MHCⅡα/β和Ii基因的编码区序列。将获得的基因序列进行对比分析，结果显示，两种鱼中该基因的序列特性基本一致。系统发生树结果表明，两种鱼的MHCⅡ与鲤科鱼类在进化地位上更接近，聚为一支。两种鱼中MHCⅡα/β氨基酸序列均包括信号肽、两个功能区、跨膜区和胞质区，且均在跨膜区发现一个不同物种中的保守结构。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明，青海湖裸鲤MHCⅡ主要在肾脏、脑、鳃、肝脏、臀皮中表达较高，而花斑裸鲤主要在脑、肌肉、眼、鳃中高表达。对比正常状态和感染水霉后青海湖裸鲤鳃、肾脏、肝脏、肠组织中MHCⅡ 基因的表达变化，发现MHCⅡ 3个基因在肾脏组织中的表达水平显著下调，而α， β基因在鳃、肝脏、肠组织中均显著上调。对青海湖裸鲤进行不同盐碱胁迫处理后，检测到鳃、肾脏组织中MHCⅡ 基因的mRNA水平均显著降低。对两种鱼中MHCⅡα， β基因的多态性进行分析，分别获得青海湖裸鲤和花斑裸鲤MHCⅡα 8种、12种等位基因型，编码23、24种氨基酸序列，且这种序列多态性主要集中在α1功能区；MHCⅡβ 分别获得12、14种等位基因型，编码22、23种氨基酸序列。青海湖裸鲤MHCⅡα/β 的多态性均低于花斑裸鲤，暗示其与青海湖裸鲤的盐碱耐受过程联系不紧密。遗传多样性分析结果表明群体多样性在两个物种中均较高，其单倍型多样性接近1，且核苷酸多样性之间的差异较小。花斑裸鲤MHCⅡ 基因的单倍型多样性和核苷酸多样性均略高于青海湖裸鲤，反映了青海湖裸鲤种群稳定性略低于花斑裸鲤。研究表明，MHCⅡ 分子不仅在青海湖裸鲤和花斑裸鲤的免疫防御应答中发挥着重要作用，还可能参与了青海湖裸鲤的盐碱耐受过程，而基因多态性与盐碱耐受的关联度不高。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
赫崇波 高祥刚 王效敏 刘卫东 周遵春 木云雷 葛陇利
利用圆斑星鲽(Verasper variegatus Temminck et Schlegel)和相关鱼类的部分线粒体基因序列,设计出6对扩增引物,通过PCR扩增产物直接测序和引物行走(Primer walking)法测定圆斑星鲽线粒体基因组全序列,并对其进行结构与进化分析。圆斑星鲽线粒体基因组序列长17273 bp,其基因序列及构成都与其他硬骨鱼基本相同,包括37个基因(2个rRNA基因、22个tRNA基因和13个蛋白质编码基因)和2个非编码区(控制区和WANCY区)。在22个tRNA基因中,tRNAGln、tRNAAla、tRNAAsn、tRNACys、tRNATyr、tRNASer(第2...
关键词：
圆斑星鲽 线粒体基因组 控制区 系统进化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳学周 徐永江 廖梅杰 潘传燕 王妍妍
采用RACE技术,在圆斑星鲽(Verasper variegatus)脑中克隆到3种GnRH基因的cDNA序列:cGnRH-Ⅱ、sGnRH和sbGnRH。每种GnRH都包括1个信号肽、1个Gly-Lys-Arg连接序列和1个GnRH相关肽。其中,cGnRH-Ⅱ的cDNA全长为568 bp,编码85个氨基酸,ORF为255 bp,5′UTR为141 bp,3′UTR为169 bp。sGnRH的cDNA全长为457 bp,编码90个氨基酸,ORF为270 bp,5′UTR为41 bp,3′UTR为143 bp。sbGnRH的cDNA全长为381 bp,编码98个氨基酸,ORF为294 bp,5′U...
关键词：
圆斑星鲽 GnRH 分子克隆 表达特性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
边力 刘长琳 陈四清 张乐乐 葛建龙 刘克奉 谭杰
圆斑星鲽(Verasper variegatus)作为中国鲽形目(Pleuronectiformes)养殖鱼类的重要代表种类,具有生长速度快,可食用部分多,肉质细嫩等特点。为了探究圆斑星鲽形态性状与体重的关系,本研究分别测定11月龄、14月龄和17月龄3个不同生长期圆斑星鲽的体重及全长(FL)、体长(BL)、体高(BH)、头长(HL)、头高(HH)、尾柄长(CL)、尾柄高(CH)、吻长(SL)共计8个形态性状,分别进行相关分析和通径分析,剖析形态性状对于体重的直接作用和间接作用;利用回归分析的方法,建立各
[期刊] 水产学报
[作者]
王妍妍 柳学周 刘新富 徐永江 孙中之 兰功刚
采用体内注射植物血细胞凝集素(PHA)和秋水仙素法制备圆斑星鲽染色体,研究其染色体C-带、Ag-NORs带及G-带的显带特征。结果发现,圆斑星鲽具有46条染色体,核型为2n=46t,染色体臂数为NF=46,所检个体全部为二倍体,未发现存在异型性染色体和随体染色体的现象。带型研究表明,C-带特征为46条染色体均有大小不一的C-带,其中第22对染色体整体呈阳性深染,第19对染色体具有端部C-带,其余均为着丝粒C-带;计算其异染色质含量为30%;Ag-NORs带型特征为具有1对Ag-NORs,位于2号染色体的长臂末端,为端部Ag-NORs;G-带特征为具有38条深染带,21条浅染带。研究结果为圆斑星...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 柳学周 刘君刚 赵明 王妍妍 曲建忠
研究了圆斑星鲽卵巢年周期发育的组织学规律及其数量形态特征变化。结果表明,圆斑星鲽产卵属1年1次成熟分批产卵类型,卵巢发育属非同步分批成熟类型。性成熟亲鱼在年周期发育中经历5个发育时期,同时可见5个发育时相的卵母细胞,不同发育时期的卵巢中卵母细胞类型和组成比例不同。性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)在亲鱼的年周期发育中呈现规律性的变化,与卵巢发育呈现密切的关联。亲鱼卵巢发育的有效积温为1 050日度。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王贞杰 陈四清 曹栋正 卢斌 常青 刘长琳 燕敬平
关键词：
圆斑星鲽 氨氮胁迫 组织结构 酶活性
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