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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李奎 康相涛 刘英 孙桂荣
【目的】探讨固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达。【方法】应用免疫组织化学技术和Leica显微图像处理系统,对细胞凋亡基因Fas和FasL在固始鸡免疫器官内的动态表达进行研究。【结果】Fas在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量均不相同,呈波浪样动态变化;Fas表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜和细胞质,不表达于细胞核;Fas表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布:法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴小结与淋巴小结之间区域、淋巴小结边缘,淋巴小结内少量淋巴细胞也有Fas表达;胸腺内主要分布于胸腺小叶髓质,极少出现...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张书霞 陈万芳 于勇 鲍恩东
用一步法从17 日龄来克亨SPF鸡胚和90 日龄成年鸡的法氏囊、脾脏和胸腺组织中提取总RNA(TRNA),用鸡B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因 (bcl-2) cDNA探针进行Northern blot杂交。发现bcl-2 在成年和胚胎鸡的不同免疫器官中表达量不同, 成年鸡bcl-2 的表达量多少依次为胸腺、脾脏、法氏囊, 而胚胎鸡则是胸腺、法氏囊、脾脏。同时用流式细胞法测定这些器官的细胞凋亡情况, 胚胎鸡法氏囊、脾脏和胸腺的细胞凋亡率分别是0.40% , 0.68% 和0.38% ; 成年鸡则是6.98% , 1.17% 和0.61% 。结果表明, 鸡bcl-2 基因通过阻抑细胞凋亡直接调控正...
关键词：
bcl-2 鸡 免疫器官 表达 细胞凋亡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李奎 李明 康相涛 刘英
为了探讨固始鸡脾脏内淋巴细胞自然凋亡的过程和超微结构的变化。应用透射电子显微镜技术,对固始鸡17日龄胚胎和4,19周龄固始鸡3组正常发育的脾脏内淋巴细胞自然凋亡的超微结构进行了研究。结果表明,脾脏内自然凋亡的淋巴细胞主要表现为细胞核的变化,其次是线粒体增多。核质凝集为新月形、C字形、圆环形、花瓣状等多种形态,凋亡细胞裂解为凋亡小体,最后被巨噬细胞吞噬;固始鸡胚胎和4,19周龄固始鸡脾脏内自然凋亡细胞有逐渐增加的趋势。由此可见,固始鸡脾脏内淋巴细胞存在着自然凋亡现象,凋亡细胞主要表现为细胞核的变化,其次是线粒体增多。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈琳琳 侯莹 丁胜利 施艳 李洪连
【目的】鉴定和克隆假禾谷镰孢（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）细胞凋亡相关基因ＦｐＴａＴｄ，分析ＦｐＴａＴｄ在假禾谷镰孢菌丝、分生孢子和侵染不同时期的表达，为探索细胞凋亡在假禾谷镰孢侵染过程中的功能提供理论依据。【方法】从ｇｅｎ Ｂａｎｋ获得模式物种已知的ＴａＴｄ氨基酸序列，利用ＢＬａｓＴｐ的方法在镰孢中鉴定ＴａＴｄ同源蛋白，并构建进化树；分别以假禾谷镰孢的基因组ｄｎａ和ｃｄｎａ为模板，通过ｐｃｒ方法克隆假禾谷镰孢ＦｐＴａＴｄ的基因序列和开放阅读框（ｏｒＦ）序列；利用实时荧光定量ｐｃｒ方法分析ＦｐＴａＴｄ在假禾谷镰孢生长、产孢及侵染不同时期的表达；利用转录组测序方法分析Ｆ．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王彦彬 卢中华 康相涛 宋素芳 孙桂荣 韩瑞丽 李国喜 李守义
参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的 20～35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段,IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒 pGEM-T-chIL-2。测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白细胞介素2基因与GenBank上已发表的序列相比,存在2 个核苷酸变异。重新设计表达引物,以克隆质粒pGEM-T—chIL一2为模板PCR扩增表达片段,对表达片段进行 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切,连接到作同样双酶切的pET28a表达载体上,鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行IPTG 诱导表达,然后对表达产物进行SDS-PA...
关键词：
固始鸡 白细胞介素2 原核表达 生物活性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
齐丽娜 蒋静乐 陶生祥 张婧菲 张莉莉 王恬
[目的]本试验旨在探讨宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation, IUGR)对猪胎盘细胞增殖、凋亡及抗氧化基因和蛋白表达的影响。[方法]从刚分娩的母猪中选择正常初生重(normal birth weight, NBW)和IUGR仔猪对应的胎盘各5个,分为对照组和宫内发育迟缓组。采用免疫组化法检测胎盘细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡,采用荧光定量PCR检测胎盘NRF2、HO-1、NQO1、SOD1、SOD2、GCLC和GCLM基因的表达,用Westen blot(WB)检测胎盘抗氧化蛋白NRF2和HO-1的表达。[结果]对照组可以观察到较强的PCNA染色,宫内发育迟缓组PCNA染色较弱。IUGR组和对照组凋亡细胞指数分别为19.63%与12.56%,IUGR组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05)。WB结果显示,对照组与宫内发育迟缓组NRF2和HO-1蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。[结论]IUGR会降低猪胎盘细胞增殖,增加猪胎盘细胞凋亡且降低猪胎盘抗氧化基因的表达。
关键词：
宫内发育迟缓 胎盘 增殖 凋亡 抗氧化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
蔡亚非 李莲 刘庆华 杜娟 徐世永 刘红林 王根林
用流式细胞记录仪检测分析奶牛在夏季 (日平均气温为 37 5℃)、夏末 (日平均气温 26 5℃) 和冬季 (日平均气温 5 5℃) 时奶牛外周血淋巴细胞DNA含量, 统计细胞所处的分裂时期及淋巴细胞的凋亡率, 并通过荧光定量PCR分析上述时期外周血淋巴细胞bax α基因mRNA表达量。结果显示: (1) G2 /M期细胞和淋巴细胞增殖指数随温度降低而呈明显的下降趋势, 5 5℃时比例最低, 相对于其他两个温度条件差异显著 (P
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨迪 黄玲巍 杨雅雯 乔自林 王家敏
表皮生长因子受体（EGFR）在许多实体肿瘤中过度表达，建立稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞株，有利于为研究犬或人类肿瘤疾病提供良好的细胞模型和研究基础。首先制备目的片段以构建EGFR基因过表达载体，与慢病毒包装载体共同转染至293T细胞中，48 h后提取上清液经纯化获得EGFR基因过表达慢病毒液。将其转染至MDCK细胞中，经嘌呤霉素筛选和单细胞克隆后观察感染效率，RT-qPCR和Western Blot、间接免疫荧光分别检测基因及蛋白的表达，建立EGFR蛋白过表达MDCK细胞株。使用流式细胞仪分别检测过表达及对照细胞株的细胞凋亡和细胞周期。犬EGFR基因位于18号染色体，由编码跨膜糖蛋白的30个外显子组成。经反应体系，PCR产物交换入线性化表达载体，获得了阳性转化子8个，大小为738 bp。所获EGFR基因过表达慢病毒滴度为3.5×108 TU/mL。转染MDCK细胞后在荧光显微镜下观察荧光效果显著，经检测EGFR基因及其蛋白在细胞中的表达量显著升高。间接免疫荧光试验显示，EGFR在细胞中表达明显增强。过表达细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率显著上升，且在G2/M期发生阻滞。成功建立一株稳定的犬EGFR过表达MDCK细胞株，犬EGFR的过表达催化了细胞分裂，使DNA复制加快，同时刺激了细胞凋亡。
关键词：
犬肾细胞系 表皮生长因子受体 慢病毒载体
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李连歌 曹哲明 陶易凡 张丽 马俊蕾 李鸣霄 包景文 朱昊俊 徐跑 强俊
钙敏感受体(calcium-sensing recceptor, CaSR)在Ca~(2+)刺激下可参与调控细胞凋亡等生理过程,在机体适应逆境胁迫中发挥重要作用。为研究吉富罗非鱼(Genetically Improved Farmed Tilapia, GIFT)CaSR基因的特点及其在缺氧胁迫下参与细胞凋亡的调控机制。本研究利用RT-PCR技术克隆了吉富罗非鱼CaSRcDNA全长序列,利用qRT-PCR技术分析了该基因在不同组织中的表达模式,并进一步检测了缺氧胁迫下(0.55mg/L)肝脏中该基因和细胞凋亡相关基因mRNA的表达变化,同时利用ELISA法检测了肝脏中抗氧化酶活性的变化,以及通过HE和TUNEL染色法分别观察了肝细胞的形态变化和凋亡情况。结果显示,吉富罗非鱼CaSR cDNA序列全长3265 bp,包括21 bp 5′非编码区、2823 bp开放阅读框和421 bp 3′非编码区,编码940个氨基酸。CaSR基因mRNA在不同组织中均有表达,其中肌肉中表达量最高,肾脏次之;组织切片观察发现缺氧可导致肝脏组织结构损伤,促进肝细胞凋亡;与对照组(5.0mg/L)相比,缺氧可增强SOD、CAT和GSH-Px抗氧化酶活性,上调CaSRmRNA的表达,并引起Bcl-2、Caspase-3和P53凋亡基因mRNA的表达变化。研究结果表明, CaSR可能通过介导Ca2+调控细胞凋亡,从而参与吉富罗非鱼的缺氧应对机制。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
段亚飞 刘萍 李吉涛 李健 高保全 陈萍
取健康脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)成体,体长(5.81±0.32)cm,体质量(1.18±0.35)g。根据本实验室已构建的脊尾白虾血细胞全长cDNA文库进行EST测序分析,获得脊尾白虾抗细胞凋亡因子DAD1基因的cDNA全长并命名为EcDAD1基因。该序列全长645 bp,包括5′非编码区184 bp,开放阅读框345 bp和3′非编码区116 bp,共编码114个氨基酸,预测分子量为12.85 kD,理论等电点为8.75。同源性分析表明,脊尾白虾抗细胞凋亡因子EcDAD1氨基酸序列与其他物种DAD1有高度同源性,与斑节对虾(Penaeus monodon)的相...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
龚文芳 喻树迅 宋美珍 范术丽 庞朝友 肖水平
【目的】克隆陆地棉抗细胞凋亡新基因GhDAD1,为陆地棉细胞凋亡的分子机制提供依据,为培育不早衰陆地棉品种提供理论基础。【方法】采用RT-PCR以及电子克隆获得陆地棉GhDAD1的基因组序列以及全长cDNA序列并进行生物信息学分析,然后通过荧光原位杂交(FISH)技术进行染色体定位,利用real-timePCR进行表达模式分析,分析6-BA、乙烯、H2O2、SA以及NO对GhDAD1表达量的影响。【结果】棉花GhDAD1编码阅读框全长354bp,包含5个外显子,4个内含子以及232bp的5′非编码区和280bp的3′非编码区。氨基酸序列分析表明,GhDAD1蛋白属于DAD家族,与柑桔、拟南芥G...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
左振华 唐建州 张钊 唐春华 陈韬 张东裔
利用快速扩增cDNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)技术获得草鱼细胞凋亡抑制蛋白基因全长cDNA序列为2093bp,含有1个1944bp的开放阅读框,5′非编码区长25bp,3′非编码区长124bp,可编码647个氨基酸.生物信息学分析表明,在IAP的N端无氨基酸残基组成的信号肽;与斑马鱼的同源性最好,其次是斑猫鲿;在系统进化上,与斑马鱼、斑猫鲿共聚为1支.用半定量RT-PCR分析正常及细菌诱导下草鱼细胞凋亡抑制蛋白基因在不同组织中的表达分布,正常情况下,凋亡抑制蛋白基因在所取的7种组织中均有表达,其中脑、肠和肾表达最高,肝和心脏次之,鳃和肌肉最低,但...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安磊 孙婵 解芸菲 王勇 吕彬 孙超
【目的】探讨SOCS3对3T3-L1细胞凋亡的影响。【方法】以小鼠脂肪组织提取的RNA为模板,用RT-PCR扩增SOCS3基因,将其克隆至pMD18-T Simple,构建pMD18-T-SOCS3重组质粒,经测序验证后,以pMD18-T-SOCS3为模板扩增SOCS3基因,将其克隆至pEGFP-N1,构建真核重组质粒pEGFP-N1-SOCS3,测序正确后,将重组质粒pEGFP-N1-SOCS3转染3T3-L1细胞,荧光下观察GFP的表达,RT-PCR和Western blotting检测细胞内SOCS3mRNA和蛋白的表达,观察细胞凋亡的变化。【结果】测序表明,pMD18-T-SOCS3和...
关键词：
细胞凋亡 SOCS3 pEGFP-N1
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李升和 范光丽 顾有方 王珏 彭克美 金光明 刘德义 陈会良
【目的】研究饮水硼对固始鸡胸腺和法式囊质量、器官指数及组织结构发育的影响,为硼在畜禽养殖业中的正确使用提供理论论据。【方法】将240羽1 d固始鸡随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,饮水中硼质量浓度分别为0,100,200和400 mg/L,试验期6周。每周末每组取鸡10羽解剖,取胸腺和法氏囊,称质量,常规石蜡切片制作,HE染色、显微观察与摄影。【结果】(1)试验Ⅰ组4~6周固始鸡胸腺器官指数显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅲ组胸腺和法氏囊质量及器官指数显著或极显著低于同周龄对照组(P<0.05或P<0.01)。(2)试验Ⅰ组1~2周胸腺和法氏囊组织结构轻微退化,3~6周逐渐恢复并表现较明显...
关键词：
硼 固始鸡 中枢免疫器官 组织结构
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵洁 梁爱华 付月君
为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),通过四唑盐比色法(MTT)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析了Bm K IT在Ac MNPV的3个启动子调控下对Sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 h Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同...
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