为寻找耐低氧相关SNPs分子标记辅助团头鲂优良品种选育,利用团头鲂低氧耐受和敏感群体的转录组数据,进行SNPs位点的开发和鉴定,获得52 623个可能的SNPs位点,其中碱基转换和颠换型位点分别占57.4%(30 192个)和31.9%(16 802个);同义SNPs占编码区总SNPs的99.7%,非同义SNPs仅有32～35个;使用PCR-RFLP技术对筛选出的5个非同义的多态性SNPs进行耐低氧性状关联分析。结果显示,Plin2-A1157G和Hif-3α-A2917G位点的SNPs在团头鲂亲本群体中与低氧耐受性状显著相关,但在子代群体中却与低氧耐受性状无显著相关性。这说明亲代中筛选出的分子标记并不一定适用于子代群体,在利用分子标记辅助育种时需要考虑标记在子代中的有效性。

为了指导团头鲂耐低氧群体的后续选育工作开展,利用筛选出的20对微卫星引物,比较分析了团头鲂耐低氧群体(TN)及其减数分裂(TNM)、有丝分裂(TNDH)雌核发育后代群体的遗传结构;结果显示,团头鲂TN、TNM、TNDH及团头鲂"浦江1号"(TPJ1)对照的平均等位基因数(N_a)分别为3.90、3.55、3.45、4.25,平均观测杂合度(H_o)分别为0.7853、0.3934、0.2768、0.8075,平均期望杂合度(H_e)分别为0.6491、0.5563、0.4870、0.6855,平均多态信息

为阐明斑石鲷(Oplegnathus punctatus)低氧耐受能力及低氧胁迫过程中血液生理生化指标变化规律，本研究通过生理学和生态学方法，查明了2种不同规格斑石鲷临界氧分压(critical oxygen tension， P_(crit))和失去平衡点(loss equilibrium， LOE)时的溶解氧浓度，观察了自然耗氧条件下其呼吸行为变化，分析了低氧胁迫和恢复溶解氧过程中血液皮质醇和葡萄糖含量、血红蛋白(hemoglobin，Hb)浓度、红细胞(red blood cell， RBC)和白细胞(white blood cell， WBC)数目，红细胞积压(hematocrit， HCT)变化。结果显示：在水温(23.0±0.5) ℃、氨氮浓度小于0.5 mg/L、亚硝酸盐浓度0～0.05 mg/L，盐度30、pH 7.80条件下，200 g和50 g斑石鲷P_(crit)值分别为(4.05±0.09)和(3.15±0.12) mg/L，LOE值分别为(1.16±0.08)和(0.93±0.11) mg/L，且50 g斑石鲷到达LOE值时间(t=480 min)晚于200 g斑石鲷(t=110 min)；自然耗氧过程中，2种规格斑石鲷呼吸频率均呈先升高后降低的变化趋势，且均在P_(crit)值处显著升高，达到最大值(P<0.05)。低氧胁迫导致血浆葡萄糖和皮质醇含量显著升高，在LOE值处达到最大值(P0.05)。综上，50 g斑石鲷与200 g斑石鲷相比，其低氧耐受能力更强，200 g斑石鲷对低氧胁迫应激反应更敏感，2种规格斑石鲷均可通过增加呼吸频率、提高血液WBC和RBC数目、皮质醇、葡萄糖和Hb浓度，增强对溶解氧的吸收利用，应对低氧胁迫导致的生理状态改变，相关结果为斑石鲷高效养殖提供了基础数据。

为开发三疣梭子蟹低盐耐受性相关甲基化标记，采用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法(methylation sensitive high resolution melting curve, MS-HRM)进行了三疣梭子蟹低盐耐受性相关甲基化位点的筛选和应用。结果显示，从三疣梭子蟹转录组数据库中共开发了8个甲基化标记，其中6个标记与低盐度耐受性显著相关，在低盐度条件下表现出显著的去甲基化或甲基化，这些标记分别位于V-ATP酶(V-type proton ATPase)、CLC型氯离子通道、琥珀酸脱氢酶、NAD(P)转氢酶(NAD(P)、磷酸乙醇酸性磷酸酶、NADH还原酶基因，为三疣梭子蟹耐低盐新品种的分子标记辅助选育提供候选工具。研究表明，“宁象1号”耐低盐能力显著高于野生群体，且选育群体中位点Pt-M1、Pt-M2的去甲基化率达到100%，可能有利于低盐条件下保持体内Na~+和Cl~-的平衡。

为开发三疣梭子蟹低盐耐受性相关甲基化标记，本研究采用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法(Methylation Sensitive High Resolution Melting curve， MS-HRM)进行了三疣梭子蟹低盐耐受性相关甲基化位点的筛选和应用。结果显示，从三疣梭子蟹转录组数据库中共开发了8个甲基化标记，其中6个标记与低盐度耐受性显著相关，在低盐度条件下表现出显著的去甲基化或甲基化，这些标记分别位于V-ATP酶(V-type proton ATPase)，CLC型氯离子通道，琥珀酸脱氢酶，NAD(P)转氢酶(NAD(P)，磷酸乙醇酸性磷酸酶，NADH还原酶基因，为三疣梭子蟹耐低盐新品种的分子标记辅助选育提供候选工具。通过以上标记在三疣梭子蟹“宁象1号”速生耐低盐新品系中的分型及耐低盐性状测试研究表明，“宁象1号”耐低盐能力显著高于野生群体，且选育群体中位点Pt-M1、Pt-M2的去甲基化率达到100%，可能有利于低盐条件下保持体内Na~(+)和Cl~(-)的平衡。本研究为三疣梭子蟹的耐低盐遗传改良提供基础资料及有利工具。

为探明许氏平鲉低氧耐受能力及低氧胁迫过程中其血液生理生化指标和鳃组织形态结构变化，本研究分析了许氏平鲉临界氧分压(Pcrit)和失去平衡点(LOE)时溶解氧含量，观察了低氧胁迫和恢复溶解氧过程中呼吸行为和呼吸频率的变化，分析了血液生理[红细胞数目(RBC)，白细胞数目(WBC)，血红蛋白(Hb)，红细胞积压(HCT)]、生化[葡萄糖、皮质醇]指标以及鳃组织形态学和鳃组织气体交换率(PAGE)变化。结果显示，在温度18 ℃、盐度30，pH值7.85的条件下，许氏平鲉[(88.01±5.34)g] Pcrit和LOE溶解氧含量分别为(3.96±0.11) mg/L和(2.60±0.21) mg/L。随着水体中溶解氧含量下降，血浆皮质醇和葡萄糖分别在LOE和Pcrit达到最高；许氏平鲉血液RBC、Hb和HCT在LOE达到最高，RBC无显著性变化。低氧过程中，许氏平鲉呼吸频率和PAGE分别于Pcrit和LOE达到最高，且低氧导致许氏平鲉鳃小片长度(SLL)、间距(ID)、周长(perimeter)显著增加；鳃小片宽度(SLW)则随水中溶解氧含量下降而变窄，在LOE处达到最小值。许氏平鲉鳃小片末端膨大、基质肥大、增生比例在低氧过程中显著增加。恢复正常溶解氧24 h后，上述各项检测指标恢复至正常，同对照组无显著差异。实验中对照组各项指标无显著性变化。综上，许氏平鲉对水体低溶解氧变化反应敏感，低氧应激导致其血液生理生化相关指标和鳃小片形态发生显著性改变，恢复正常溶解氧24 h后可以显著缓解低氧胁迫应激，相关结果为研究许氏平鲉低氧耐受生理调控机制和高效健康养殖，提供了理论依据和技术支撑。

以团头鲂为研究对象，采用ＨＥ染色及电镜方法观察低氧对心脏组织结构的影响。结果显示，低氧可导致团头鲂心脏组织结构的变化及线粒体损伤；通过ＴＵＮＥＬ及荧光定量ＰＣＲ检测发现低氧能诱导心肌细胞凋亡并引起抑凋亡基因ＢＣＬ－２表达量的变化；基于蔗糖梯度离心法提取心脏线粒体，并分析线粒体中ＭＤＡ含量及ＳＯＤ活性的变化，结果显示低氧（ＤＯ：（２．５±０．５）Ｍｇ／Ｌ）可引起团头鲂心脏线粒体中ＭＤＡ含量及ＳＯＤ活性的降低。

为探究急性低氧对团头鲂(Megalobrama amblycephala)鳃组织氧化还原稳态及细胞凋亡的影响,本研究通过测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutases,SOD)、过氧化氢酶(catalases,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,检测急性低氧胁迫下鳃组织的氧化应激水平,并采用Hoechst染色法观察了团头鲂鳃组织细胞的凋亡,同时还利用qRT-PCR技术检测了团头鲂鳃组织中凋亡相关基因Caspase 3、Caspase 8的表达量。结果显示,在溶解氧含量为(2.0±0.1) mg/L的低氧环境下,团头鲂鳃组织中SOD、CAT活性及MDA的含量均在6 h、12 h时显著增加(P<0.05)、2.32倍(P<0.05)及2.59倍(P

在水产养殖鱼粉鱼油供应相对紧缺的背景下，充分挖掘碳水化合物(糖类)的营养功能具有重要意义。低氧是水产养殖中一种常见的环境应激。大量研究表明，鱼类在低氧条件下主要利用糖来提供能量，但饲料糖源对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)的生长和急性低氧耐受性尚未见报道。本研究分别在饲料中添加玉米淀粉或糊精(玉米淀粉水解物)作为糖源，养殖8周后，测定生长、急性低氧存活率、代谢产物和低氧诱导因子(HIF)信号通路等指标。结果显示，与淀粉组相比，糊精虽然不会影响红鳍东方鲀的生长性能和鱼体成分，但显著提高了其在急性低氧条件下的存活率。在常氧条件下，淀粉组和糊精组肝脏的糖原和乳酸含量均无显著差异(P>0.05)，但在低氧条件下，糊精组肝脏的乳酸含量和乳酸脱氢酶基因表达量均显著高于淀粉组(P<0.05)。在低氧条件下，糊精组血清甘油三酯(TG)含量显著升高，但淀粉组血清和肝脏的TG含量在低氧后却显著下降(P<0.05)。综上所述，用易消化的糊精替代玉米淀粉激活了HIF信号通路介导的无氧糖酵解来为鱼体提供更多的能量，同时还可以抑制脂肪的分解和蛋白质的合成，减少了O_2的消耗，从而提高了红鳍东方鲀对急性低氧的耐受性。本研究结果为鱼类耐低氧饲料的设计和健康养殖提供了重要参考。

低氧是水产养殖过程中常见的胁迫现象， 而鱼类的低氧耐受能力是鱼类抗逆性的重要指标。为了研究棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus，♀)与蓝身大斑石斑鱼(E. tukula，♂)杂交后代(简称金虎石斑鱼)和棕点石斑鱼的低氧耐受能力， 采用封闭式呼吸室测定棕点石斑鱼和金虎石斑鱼幼鱼的耗氧率与窒息点， 并采用渐变式低氧的方式在正常溶氧[(5.71±0.31) mg/L]和下降到4 mg/L、3 mg/L、2 mg/L、1 mg/L、0.4 mg/L处1 h后以及恢复常氧水平3 h后采取棕点石斑鱼和金虎石斑鱼幼鱼的肝脏组织， 测定其部分抗氧化酶活性与能量利用相关的指标。实验结果显示， 在水温(31.18±0.38) ℃时金虎石斑鱼幼鱼的耗氧率为0.16 mg/(g·h)， 显著高于其母本棕点石斑鱼幼鱼(P

为了研究棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus,♀)与蓝身大斑石斑鱼(E.tukula,♂)杂交后代(简称金虎石斑鱼)和棕点石斑鱼的低氧耐受能力,采用封闭式呼吸室测定棕点石斑鱼和金虎石斑鱼幼鱼的耗氧率与窒息点,在正常溶氧[(5.71±0.31) mg/L]和溶解氧下降至4.0 mg/L、3.0 mg/L、2.0 mg/L、1.0 mg/L、0.4 mg/L处1 h后以及恢复正常溶氧水平3 h后,采取棕点石斑鱼和金虎石斑鱼幼鱼的肝脏组织,测定其部分抗氧化酶活性与能量利用的相关指标。研究结果显示,在水温(31.18±0.38)℃时金虎石斑鱼幼鱼的耗氧率为0.16 mg/(g·h),显著高于其母本棕点石斑鱼幼鱼(P0.05);溶解氧浓度下降和复氧的全过程中,棕点石斑鱼幼鱼肝脏中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性和乳酸(lactic acid, LD)含量以及金虎石斑鱼幼鱼肝脏中SOD、过氧化氢酶(catalase, CAT)、GSH-Px、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、LDH酶活性变化显著(P0.05);复氧3h后,棕点石斑鱼肝脏中的SOD活性升高16.7%,GSH-Px活性升高42.5%,LD含量升高2.8%,均显著高于常氧对照组水平(P<0.05),而金虎石斑鱼除GSH-Px活性没有恢复至对照水平外(P0.05);在溶解氧变动的过程中,金虎石斑鱼肝脏SOD、GSH-Px、CAT以及T-AOC活性激活程度分别达到29.1%、17.9%、42.4%、76.0%,均高于棕点石斑鱼肝脏中相应抗氧化酶活性激活程度的最大值。研究结果表明,金虎石斑鱼相对于棕点石斑鱼耗氧率略高,且其低氧耐受能力较好,可以进行大规模高密度养殖;在受到缺氧胁迫后,金虎石斑鱼较棕点石斑鱼能够更高效地激活抗氧化防御系统,且金虎石斑鱼在受到低氧胁迫后比棕点石斑鱼有更好的恢复能力。

脊椎动物Hox族基因是一类重要的生长和发育调控基因,它编码具有螺旋—转角—螺旋结构的转录因子,能与下游靶基因特定区域结合并激活表达,从而调节脊椎动物胚胎发育过程中前后轴的形态建成。利用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)HoxB1b基因的全长cDNA序列,并研究了该基因的表达模式。结果表明:(1)团头鲂HoxB1b基因cDNA全长为1 479 bp,其中包括一个编码306个氨基酸残基的921 bp阅读框,聚类分析结果表明,该基因与斑马鱼、红鳍东方鲀、青鳉的相似度分别为89%、45%、40%,在脊椎动物中具有一定的保守性;(2)RT-...

为明确鱼类咽齿发生发育的分子机制，以我国特有的经济鱼类团头鲂（Megalobrama amblycephala）为研究对象，通过团头鲂全基因组序列Blast获得团头鲂分泌型钙结合磷蛋白（secretory calciumbinding phosphoprotein,SCPP）家族基因的cDNA序列，采用实时荧光定量的方法比较分析SCPP家族基因在团头鲂咽齿发生发育关键时期第四、第五鳃弓中的表达情况，以及在1龄团头鲂不同组织中的表达情况，筛选调控咽齿发育的关键调控基因。研究结果显示，团头鲂enam、scpp1、ambn、scpp9、odam、spp1与斑马鱼具有较高同源性，进化树中距离较近；通过比对不同脊椎动物enam与odam这2个基因编码的氨基酸序列，发现在鱼类中均存在2段氨基酸序列的缺失。1龄团头鲂不同组织的SCPP家族基因定量表达结果显示，enam、scpp1、ambn、scpp9和spp1在第五鳃弓（有咽齿）和肋骨里面有很高的表达量，与其他组织中的表达水平大多存在显著性差异（P

用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染团头鲂(Megalobrama amblycephala)区分抗病和易感组,通过PCR扩增及测序在MHCⅡα基因上筛选单核苷酸多态位点(single nucleotide polymorphisms,SNP),利用高分辨率熔解曲线法和限制性内切酶酶切法对SNP进行分型,分析其多态性及与抗病性状之间的关系。在MHCⅡa基因上共筛选出35个候选SNP位点,占MHCⅡa基因总碱基的1.45%,包含30个转换位点、5个颠换位点。其中外显子部分有16个,