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[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨秋峰 蒋蔚 刘永杰 陆承平
【目的】构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性。【方法】以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体。将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上。通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定。光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化。【结果】成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王韵斐 陈秋菊 杨莎 崔易虹 杨明明 曹斌云
为研究人白介素-2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达,构建人白介素-2基因的山羊β-酪蛋白位点打靶载体。以质粒pBC1为模板扩增山羊β-酪蛋白上游2.5 kb和下游3.5 kb的序列作为5′和3′同源臂,将克隆得到的人白介素-2基因和neo基因插入到2个同源臂之间,获得山羊β-酪蛋白基因打靶载体pBNI53。利用脂质体将重组质粒转染奶山羊胎儿成纤维细胞进行G418筛选,并采用PCR和实时定量PCR方法对人白介素-2基因在稳定株中的表达进行验证。检测结果表明,本试验构建的打靶载体pBNI53成功转染奶山羊胎儿成纤维细胞,将人白介素-2基因成功整合至奶山羊胎儿成纤维细胞基因组中,为通过体细胞核移植...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡林勇 陈华涛 李倩 徐晓彬 王爱华 靳亚平
【目的】构建山羊β-乳球蛋白(BLG)基因打靶载体,以期用人乳白蛋白(hALA)基因的编码区置换山羊BLG基因的编码区,借助BLG的内源性调控序列指导hALA的表达。【方法】以山羊血液基因组为模板PCR扩增获得BLG基因的5′端侧翼序列(BLG5)、第5外显子和第5内含子的部分序列(E5)和3′端侧翼序列(BLG3),同时以人血液基因组为模板克隆了hALA基因的基因组序列(ALA),并将上述片段连接到克隆载体pMD18 T-simple或pBluescript KS(-),得到载体pB5T,pB3T,pAKS和pAEKS。对pB5T进行亚克隆,将BLG5连接到pAEKS中,构建载体pBAE;最...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
唐冬生 严霞 李芳 张细权 蒋泓 于辉 高东 李月琴 周天鸿
以鳜鱼(Sinipercachuatsi)为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料。先构建含TK和Neo基因的通用打靶载体pCTKNeo。采用LATaq高保真酶扩增获得左、右同源重组引导臂HRDS1、HRDS2,经T质粒克隆后,分别插入到pCTKNeo载体Neo基因的上下游,构建成鳜鱼专用的多位点打靶载体pCTKNeoHRDS1/2。同样将干扰素基因hIFN插入到pCTKNeoHRDS1/2载体的Neo基因与HDRS2之间。每次克隆均经PCR、酶切和测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向,最终构建成多位点基因打靶载体p...
关键词：
基因打靶 多基因座 载体 重复序列 鳜鱼
[期刊] 华北农学报
[作者]
李瑞国 苗朝华 侯健 关宏 安晓荣 陈永福
将带有新霉素基因(neo)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的质粒pEGFP-C1进行了改造,去掉neo基因的启动子(Psv40),在无启动子的neo和完整的GFP基因两侧分别加入一个LoxP位点。然后将带有LoxP位点、筛选标记基因和报告基因的结构装入左右分别为牛β-casein基因1590bp和5833bp的同源臂结构中,构建成无启动子基因打靶载体pT-1590-LoxP-GFP-LoxP-5833。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王向鹏 肖一红 刘园园 杜永坤 马玉萍 周恩民
【目的】利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。以pUC57载体为骨架载体,在其多克隆位点连接一段包括Frt序列在内的酶切位点的多克隆位点序列,在2个Frt序列之间连接正筛选标记嘌呤霉素基因和绿色荧光蛋白基因,在Frt序列两侧分别连接5.7和1.9kb的MSTN基因同源长、短臂;在同源短臂后连接负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,将目的片段与载体定...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵丽华 梁浩 云亭 李荣凤
【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出两套打靶载体的同源短臂和长臂,再分别插入到两套打靶专用基础载体pMCS-PLP和PⅢ中,构建两套用于牛MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN。【结果】经过PCR、T载体连接和DNA测序,证实载体pPLP-MSTN包含2.8 kb同源短臂和4.0 kb同源长臂,载体PⅢ-MSTN包含1.3 kb同源短臂和...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
余桂容 曹颖 杜文平 宋军 陈谦 徐利远
本研究对来自苏云金芽胞杆菌BT8的Cry1A(h)基因根据玉米密码子偏好性进行了优化。采用重叠PCR方法获得了优化的Cry1Ah基因与抗除草剂基因2m G2-epsps融合片段,并将其构建到植物表达载体p BI121上,构建p BI121-EPSPS-cryl Ah双元载体。将其转化根癌农杆菌菌株EHA105,获得基因工程菌。结果表明,玉米生产上使用的骨干优良自交系18599、综31等的幼胚作为转基因受体材料,以工程菌将抗虫抗除草剂双价基因转入上述玉米幼胚,经共培养、恢复、筛选、分化、生根、壮苗移栽等培养,苗期除草剂草甘膦涂抹,免疫试纸条检测、抗虫接种鉴定等初筛,再经PCR验证,获得了4株双抗...
[期刊] 林业科学
[作者]
田雨浓 马伟 韦庆慧 韩旭洋 罗帅 陈旭日 邱本军 马玲
当今人们的环保意识不断提高,寻找替代化学农药进行有害生物综合防治成为当今各国科研工作者关注的热门话题(Isman,2008;Rajendran et al.,2008)。随着精油类农药商品化的成功,这必将大力促进此类植物源农药的研制,可以预见植物精油用于植物病虫害的防治将是今后的发展趋势之一(袁海滨等,2007)。
关键词：
α-蒎烯 大麦虫 急性毒性 解毒酶
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈丽琳 陈伟华 史晓丽 包鸿俊
采用放射受体分析方法测定日本血吸虫体内γ─氨基丁酸（ＧＡＢＡ）受体．试验证实：日本血吸虫体内存在ＧＡＢＡ受体，其最大结合容量（Ｂｍａｘ）为３０．５８±１０．１９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，Ｋｄ值为１０．７２±６．２６ｐｍｏｌ；Ｓｃａｔｃｈａｒｄ图曲线下凹，说明ＧＡＢＡ受体与配体ＧＡＢＡ之间有较大结合容量和较高的亲和力，但其结合又可能存在不均一性和复杂性．
关键词：
日本血吸虫 GABA 受体 配体
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
贾琪 孙新立
本文分析了影响基因打靶效率的因素,并指出提高同源重组利用率和在靶基因位点处引入DNA双键断裂可以提高基因打靶效率,总结了近年来这两方面尝试在植物中的研究进展,并与一些其他物种中的研究作出比较.
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
马静 邹安革 王新星 常青 滕玉清 王文斌
以卤虫无节幼体作为试验材料,研究不同强化物质对卤虫体内游离氨基酸(FAA)含量的影响。试验分为4组,分别强化赖氨酸(Lys)、裂壶藻Schizochytrium、赖氨酸加裂壶藻以及空白对照组,试验进行16h,每4h取样1次。结果显示,试验结束时,赖氨酸组的卤虫体内游离Lys含量显著高于其他3个组,且较强化前相比增加了4倍多,裂壶藻组的含量最低。除苏氨酸(Thr)外,赖氨酸组其他游离必需氨基酸以及天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)、酪氨酸(Tyr)含量都显著高于其他3个组。赖氨酸加裂壶藻组,Thr、Ser、Gly、丙氨酸(Ala)、组氨酸(His)和脯氨酸(Pro)含量均有不...
关键词：
赖氨酸 卤虫 游离氨基酸
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马志卿 颜瑞莉 陈根强 李喜梅 张兴
以松油烯-4-醇处理粘虫5龄幼虫后,测定了兴奋期、痉挛期、麻痹期及复苏期4个中毒阶段试虫的保护酶活性。结果表明,超氧化物歧化酶(SOD)被明显激活,各中毒阶段的酶活力均极显著高于对照,其中兴奋期的酶活力最大,为对照的3.04倍;处理试虫的过氧化氢酶(CAT)在兴奋期和痉挛期与对照的差异不大,而在麻痹期和复苏期被明显抑制,酶活力分别为对照的78%和92%;过氧化物酶(POD)也被明显抑制,各中毒阶段的酶比活力依次为对照的81%,86.0%,65.0%和90.0%。分析认为,中毒试虫的复苏可能与POD和CAT活力的变化有关。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
余祖功 包鸿俊
用反相离子对色谱和同位素示踪技术研究了日本血吸虫体内５－ＨＴ的定量、合成与降解。结果表明：日本血吸虫体内５－ＨＴ的含量为２．９２±０．２９μｇ／ｇ。雌、雄虫分别为２．５７±０．３５和３．３２±０．１９μｇ／ｇ。用３Ｈ－Ｔｒｙ培养虫体，由ＨＰＬＣ分离收集，经液闪测定，有３Ｈ－５－ＨＴＰ、３Ｈ－５－ＨＴ、３Ｈ－ＨＩＡＡ生成；分别用３Ｈ－５－ＨＴＰ和３Ｈ－５－ＨＴ培养虫体，则有３Ｈ－５－ＨＴ、３Ｈ－５－ＨＩＡＡ和３Ｈ－５－ＨＩＡＡ生成。异丙异烟肼能增加虫体内５－ＨＴ的含量和降低５－ＨＩＡＡ的水平，而对氯苯丙氨酸，反苯环丙胺，赛庚啶等对虫体５－ＨＴ含量均无影响。以上结果显示：日本血吸虫体内存在５－ＨＴ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
江善祥 包鸿俊 戎耀方 沈丽琳
用 HPLC 及~3H-GA 和~3H-GABA 示踪技术,确认了肝片吸虫体内 GABA 及其前体 GA 和降解产物SA.其生物合成与降解的途径与哺乳动物相类似,酶的特性也与哺乳动物相应的酶相似.虫体内的 GABA来源除自身合成外,还能从周围环境中摄取。
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