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[期刊] 中国农业科学
[作者]
王妍入 李培武 张奇 丁小霞 张文
【目的】笔者实验室前期免疫并构建噬菌体展示纳米抗体库,应用此抗体库筛选、制备可以用作黄曲霉毒素无毒替代抗原的纳米抗体。本研究旨在探明已筛选出的噬菌体展示纳米抗体Phage 2-5用作黄曲霉毒素替代抗原的活性,为后续纳米抗体的合成以及黄曲霉毒素绿色免疫分析方法的建立奠定基础。【方法】前期,笔者实验室对羊驼免疫黄曲霉毒素抗原(AFB1-BSA),经过5次免疫后,取血,提取RNA,反转录为cDNA,并采用PCR技术对抗体可变区VHH区域进行扩增,与载体pComb3X偶联,构建噬菌体展示纳米抗体库;经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与黄曲霉毒素竞争结合抗黄曲霉毒素单克隆抗体1C11的噬菌体展示纳米抗体...
关键词：
黄曲霉毒素 模拟抗原 噬菌体展示纳米抗体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
袁芳艳 何玉龙 赵娜 聂芬 伍晓雄 龙良启 李奎 罗晓松
用生长抑素(somatostatin,SS)疫苗“激生1号”免疫日本大耳兔得到抗血清,经饱和硫酸铵粗提IgG,再经DEAE-sephadex-A50低压层析系统纯化后,以此IgG作为筛选配基,对随机十二肽库进行4轮淘洗。随机挑取22个噬菌斑进行双夹心ELISA,结果有6个克隆与SS抗体有较强的特异性结合力,竞争抑制ELISA进一步证明6个克隆有较好的抑制作用。将6个阳性克隆提取ssDNA进行测序,测序结果中有5个克隆的外源肽序列完全一致,经与SS氨基酸序列比对,发现两者有共同序列FWK,说明5个克隆模拟了生长抑素的抗原表位。
关键词：
生长抑素 噬菌体随机肽库 模拟表位
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵娜 王安华 何玉龙 聂芬 袁芳艳 龙良启 刘平
利用猪传染性胸膜肺炎灭活菌苗免疫日本大耳兔得到猪传染性胸膜肺炎抗血清,将血清用饱和硫酸铵粗提IgG后,经DEAE-sephadex-A50低压层析系统纯化,以此得到IgG作为配基包被酶标板,对噬菌体随机十二肽库进行3轮不同条件的富集筛选,通过改变筛选条件,噬菌体的回收率从5.76×10-5增加到了1.69×10-2,P/N值逐步提高;随机挑取10个噬菌斑进行扩增,用ELISA检测其免疫活性,结果有6个阳性克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力;对筛选到的6个阳性克隆提取ssDNA进行测序,并分析其氨基酸序列,其中5个克隆所递呈的序列一致,用Blastp软件进行分析,2种类型的氨基酸序列之间无...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
畅晓渊 刘国荣 李平兰 Magdy M.Osman 吴寒宇
通过抑菌活性试验、蛋白酶敏感性试验、菌株的动力学生长曲线测定、菌株的生理生化试验以及16S rRNA序列鉴定试验,对埃及传统Domiati奶酪中的产抗黄曲霉毒素的活性物质的菌株进行分离与鉴定。结果显示:分离得到的菌株的发酵上清液对多株受试真菌均有明显抑制作用,尤其对产生黄曲霉毒素的黄曲霉(Asper-gillus flavus)有很强的抑制效果;该菌株产生的抑菌活性物质不是蛋白类物质,也不同于一般细菌素;该菌鉴定为扩展短杆菌(Brevibacteriumlinens),命名为lpl-8菌。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苗向阳 邵建军 朱瑞良 王建民
【目的】构建单链抗体(ScFv)噬菌体表面展示文库,从中筛选抗羊抑制素单抗并进行表达,建立制备羊抑制素单抗的新方法。【方法】用未经免疫的多种小鼠脾细胞作为基因来源,采用噬菌体抗体库技术,构建天然噬菌体表面抗体文库。用羊抑制素对其进行3轮吸附-洗脱-富集,筛选抗羊抑制素单抗,用ELISA检测其抗原结合活性。【结果】构建了天然鼠源噬菌体抗体库,为筛选和制备各种单链抗体提供了一个平台。用羊抑制素对其进行筛选,制备抗羊抑制素单抗,经ELISA检测,55/96克隆具有与羊抑制素结合活性,阳性率为57%。【结论】制备的羊抑制素可溶性ScFv及其表面展示噬菌体抗体有很好的抗原结合活性,为羊抑制素单抗的制备提...
关键词：
噬菌体抗体库 单链抗体 羊
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
温凯 沈建忠 孟辉 吴聪明 王战辉 张素霞
本研究以兽药恩诺沙星为对象,构建噬菌体抗体库,为低成本、快速制备目的抗体提供新的途径。以恩诺沙星-鸡卵清蛋白(ENR-OVA)为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,取其脾细胞提取总RNA,并分别扩增全套抗体轻、重链基因,通过重叠延伸PCR技术,以编码柔性多肽(Gly3Ser)4的基因为接头,将轻重链基因组装为完整的scFv基因,将之克隆入pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13KO7对其进行超感染,构建噬菌体抗体库并进行富集、筛选和鉴定;构建了库容量约为2.2×106的抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库,并筛选出26株阳性克隆,为表达单链抗体、建立免疫检测方法奠定基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王臣 侯利华 张彦明 李建民 廖振林 杜桂鑫 陈薇 童贻刚
为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接,分别构建了鼠/人嵌合重链FD基因和轻链基因,将其克隆入pComb3,构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,用辅助噬菌体VCSM13超感染,间接ELISA及竞争抑制ELISA检测鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体活性。结果成功构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面展示了可结合人整合素ανβ3抗原的鼠/人嵌合Fab抗体。
关键词：
整合素ανβ3 嵌合抗体 噬菌体展示
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王莹 顾舒舒 何成华 王玉伟 任喆 施志玉 赵士侠 张海彬
从伏马菌素B1(FB1)杂交瘤细胞株F3中扩增出V H和V L基因片段,再经重叠延伸PCR(SOE-PCR)拼接扩增得到单链抗体(ScFv)基因,然后克隆到pCANTAB 5E噬菌粒载体上,转化感受态大肠杆菌TG1,并经辅助噬菌体M13K07超感染,构建FB1毒素噬菌体单链抗体库,ScFv基因插入率为100%,库容约为1.5×107,噬菌体的滴度为2.1×1015PFU·mL-1。免疫亲和筛选和富集后,经ELISA法最终筛选得到5株可分泌阳性噬菌体抗体的细菌。结论:伏马菌素B1噬菌体单链抗体库构建成功。
关键词：
伏马菌素B1 单链抗体 噬菌体抗体库
[期刊] 水产学报
[作者]
章晋勇 吴英松 汪建国
Phage display antibody library has been proven to be a powerful technique used in development of antibodies. Since it was established in 1990, the technology has made enormous improvement and played more and more important role in basic research of biology, immunology, oncology, protein engineering,...
关键词：
噬菌体抗体库 应用 前景 水产养殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苗向阳 丁淑燕 朱玉良 郝慧芳 邵建军
用猪脂肪细胞以免疫删减法免疫小鼠,取其脾细胞,RT-PCR扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,克隆入噬菌粒表达载体pCANTAB5E中,构建单链抗体(ScFv)文库。用猪脂肪细胞,对其进行3轮吸附-洗脱-富集,筛选抗猪脂肪细胞膜单抗。经ELISA检测,51/96克隆具有与猪脂肪细胞结合活性,阳性率为53%,与猪肝细胞则成阴性反应,初步证明了单抗的特异性,为猪脂肪细胞膜单抗的制备提供了一种新的方法。
关键词：
单链抗体 噬菌体抗体库技术 猪脂肪细胞
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
孔梓安 宋想胜 程如楠 甄思慧 吴竹青 吴清民 王真
为筛选牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）gP48蛋白的单链抗体，本研究利用噬菌体展示技术构建了gP48蛋白单链抗体克隆文库，通过微孔筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛，利用ELISA技术测定单链抗体的亲和力，对亲和力较高的克隆进行基因测序分析和结合活性测定，旨在获得gP48蛋白的单链抗体。结果表明：1）成功构建了库容量为4.3×107的噬菌体单链抗体库，其重组率为83.3%，经三轮筛选对噬菌体抗体库进行富集，富集倍数为1.43×104;2）优化了间接ELISA方法，筛选到3株与BVDV gP48蛋白具有高亲和力的单链抗体以及其基因序列，通过IgBLAST分析显示，3株单链抗体均为鼠源IgG。综上，从gP48蛋白的单链抗体库中筛选获得3个具有高亲和力的单链抗体，可用于后续BVDV检测方法的建立。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程安春 刘艳丽 朱德康 汪铭书 胡骑 陈孝跃
【目的】(1)建立单抗介导的、能够对黄曲霉毒素AFB1进行亚细胞定位的免疫组化方法;(2)探明AFB1侵染和分布于雏鸭靶器官(细胞)规律,为阐明AFB1对雏鸭的致病机理提供基础实验数据,为AFB1感染人类提供研究模型。【方法】(1)利用AFB1单抗、免疫组化理论和方法,结合石蜡切片技术,建立检测感染雏鸭组织器官和细胞中AFB1方法;(2)7日龄樱桃谷鸭饲喂黄曲霉毒素(AFB1)含量为150μg·kg-1的全价饲料,分别于6、12、24、48、72、96、120、144、168和192h各剖杀2只,取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、法氏囊、胸腺和胰腺等组织器官多聚甲醛固定、石蜡包埋,应用建立的...
关键词：
免疫组化 黄曲霉毒素 雏鸭 侵染
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘家国 赵圣 刘海舰 王宝琴 赵洪进 刘艳娟 王小龙
刚断奶SD大鼠 60只, 体重 50~60g, 随机均分成 4组, 每组雌性 7只, 雄性 8只。在组Ⅰ (正常对照组)、组Ⅱ(试验对照组) 和组Ⅲ (高亚硒酸钠组) 的基础饲料中分别添加亚硒酸钠, 使饲料硒含量分别为 0 1、0 1和 0 3mg·kg-1; 组Ⅳ (富硒麦芽组) 在基础饲料中添加富硒麦芽, 使硒含量达 0 3mg·kg-1。各组饲喂基础料, 至体重增长到150~200g(第 32天) 时, 除组Ⅰ外, 其余 3组大鼠实施“黄曲霉毒素B1 (aflatoxinB1, AFB1 ) 致肝癌短期实验模型程序”, 并测定肝、肾组织和血中硒含量及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
陈敏 张志毅 卢孟柱
本文综述了噬菌体展示技术的研究现状和发展趋势 ,着重描述了噬菌体展示技术的筛选方法及其在生命科学研究领域的广泛应用 ,结合目前我国天牛防治存在的问题 ,分析了噬菌体展示技术在天牛防治技术研究中的应用潜力
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噬菌体展示 天牛 防治方法
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