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[期刊] 水产学报
[作者]
王亚娓 黄真屹 杨博雅 游富 张新党 杨国坤 常绪路 冯世坤 孟晓林
为探究巴氏灭活的阿克曼菌(Akk)调控鲤糖代谢的分子机制，实验通过不同糖水平(20%、30%、40%、50%葡萄糖)探究体重(10.5±1.0) g的鲤4周和8周时胰高血糖素样肽-1 (glucagon-like peptide-1,GLP-1)分泌及阿克曼菌定植的时空变化；在不同糖水平实验基础上，设置含有40%葡萄糖的3个不同Akk浓度(10~8、10~9和10~(10) CFU/g) P-Akk组，探究添加P-Akk 4周后对鲤(16.38±0.39 g)糖代谢及GLP-1的调控；通过P-Akk孵育鲤原代肝脏、肠细胞实验，共同探究不同糖水平下鲤肠道Akk、GLP-1对糖代谢的调控机制。结果显示，(1)随着饲料中葡萄糖含量的升高，鲤血清中GLP-1b含量显著降低，4周时高糖组鲤肠道GLP-1a、GLP-1b以及肠道内容物中Akk丰度均显著降低，但8周时无显著性差异。(2) P-Akk处理后，鲤血清中葡萄糖、GLP-1含量显著减少；中肠绒毛高度、肌层厚度显著增加，GLP-1含量减少，短链脂肪酸含量增加，muc2 mRNA表达水平升高；此外，P-Akk上调肝脏中ampk、pi3k、akt及糖酵解基因gk、pfk mRNA表达量，下调糖异生基因pepck mRNA表达量。(3)原代肝脏、肠细胞孵育结果显示，P-Akk处理肠细胞后GLP-1含量显著减少，而gpr40的mRNA表达量升高；此外肝脏细胞中糖酵解基因gk、pfk mRNA表达量显著升高。综上，外源添加P-Akk可以缓解高糖饲料引起的血糖升高，维持葡萄糖稳态。该研究结果可为Akk作为益生菌在水产饲料中的应用提供理论基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
张秋爽 叶彩媚 牛银杰 林强 梁红茹 罗霞 李宁求 付小哲
为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc (Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制，本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白，初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白)；Co-IP结果显示，SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc存在相互作用。通过PCR扩增获得了带有Flag标签序列的SCRV-N基因的ORF片段，并构建了SCRV-N蛋白过表达载体pcDNA-N-Flag；将pcDNA-N-Flag质粒转染鳜脑组织细胞系(CPB细胞系)，荧光共定位结果显示，Sc-c-Myc与SCRV-N在细胞质内存在共定位现象；通过逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印记(Western blot)检测转染pcDNA-N-Flag的CPB细胞系中Sc-c-Myc及谷氨酰胺代谢通路关键酶(GLS1、GDH和IDH2)的表达变化，发现Sc-c-Myc、GLS1的转录水平和蛋白水平均显著上调。综上表明，SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc互作促进Sc-c-Myc的表达，进而调控宿主细胞谷氨酰胺代谢途径，为SCRV防控提供了新的靶点。
[期刊] 华北农学报
[作者]
文静 卜登攀 王建发 孙鹏
乳蛋白合成受多种因素影响,例如日粮氨基酸组成、机体激素水平及乳腺内环境稳态等均能影响乳蛋白的合成。神经调节和内分泌调节协同作用,不仅对维持机体内环境的稳态具有重要作用,而且对乳蛋白合成关键物质代谢也具有极为重要的调节作用。研究主要神经内分泌轴调节乳蛋白合成过程,筛选出关键神经内分泌因子和细胞因子及重要信号转导通路也是潜在的改善乳品质的重要措施。作者对国内外相关研究进行了综述,期望能为提高乳蛋白含量提供有益帮助。
关键词：
激素 乳蛋白合成 分子机制
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨智翔 赵红月 殷海成 陈莹
为探讨糖基化大豆分离蛋白(GSPI)替代鱼粉对黄河鲤(Cyprinus carpio haematopterus)幼鱼生长和糖代谢的影响,用GSPI替代0%(GSPI 0,对照组)、20%(GSPI 20)、40%(GSPI 40)、60%(GSPI 60)、80%(GSPI 80)和100%(GSPI100)的鱼粉配制6种等氮、等能(粗蛋白35.77%、粗脂肪6.07%)的饲料,分别饲喂6组(每组3个重复,每个重复30尾),体重为(13.44±0.27) g的幼鲤,进行8周养殖试验。结果表明,对比GSPI 0组, GSPI 60、GSPI 80和GSPI 100组幼鲤的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)及血清中生长激素(GH)、类胰岛素生长因子(IGF–I)含量均显著降低,而GSPI 40组幼鲤的饲料系数(FCR)显著增加(P0.05)。对比GSPI0,GSPI100组幼鲤前肠和中肠的淀粉酶活性显著降低,而肝脏的丙酮酸激酶活性显著增加(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高星 李欣 李铮 杜曼婷 张彩霞 张德权 丁武
【目的】研究宰后肌肉中肌球蛋白磷酸化与肌动球蛋白解离之间的关系，分析其磷酸化水平的变化对肌动球蛋白解离的影响，探究肌球蛋白磷酸化对宰后肌肉肌节长度与嫩度的作用。【方法】取宰后３０ ｍｉｎ内的羊背最长肌，在４℃条件下分别成熟６、２４、４８和７２ ｈ，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｐｒｏ－Ｑ染色和蛋白质免疫印迹测定肌球蛋白的磷酸化水平和肌动球蛋白解离程度随宰后时间的变化；测定肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性，分析宰后不同时间点肌球蛋白与肌动蛋白结合作用力的强弱；采用透射电镜分析宰后肌节长度随时间的变化。【结果】研究发现宰后肌肉中肌球蛋白轻链２的磷酸化水平在０．５—４８ ｈ快速降低（Ｐ
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨林 张兰威 蒙琦 王士磊 渡辺令子 門脇基二
选用蛋白水平(CP)为14%的"春阳"大米蛋白(RP)、大豆蛋白(SP)、酪蛋白(CAS)为食物蛋白源,喂养雄性20周龄Wistar大鼠。经2周饲养后,各试验组间大鼠的生长性能、蛋白质功效无显著差异。与CAS组相比,RP及SP显著降低了大鼠血浆总胆固醇、血浆非高密度胆固醇(LDL-C、VLDL-C)水平及肝脏总脂质、肝脏胆固醇、肝脏甘油三酯含量。RP及SP显著阻碍大鼠的肠道胆固醇吸收,其肝脏胆固醇酯化率均显著低于CAS组。数据显示,RP显著刺激大鼠中性粪固醇、粪胆固醇的排泄,但大鼠粪胆汁酸的排泄与CAS组无显著差异。对比CAS,RP能够有效降低成熟期大鼠动脉硬化指数。结果表明,富含醇溶蛋白的"...
[期刊] 水产学报
[作者]
吴谋胜 彭宣宪
采用蛋白质组学的方法之一二维电泳技术 ,对嗜水气单胞菌生长周期中各不同阶段的蛋白质组成进行了分析。结果显示 ,在不同生长阶段 ,其蛋白质组成均发生明显变化。发现了与细菌生长代谢各阶段生理活动有关的差异蛋白质 ,有助于深入了解嗜水气单胞菌生长周期中不同阶段的基因组表达情况。同时 ,还对二维电泳和普通SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行比较。结果表明 ,二维电泳技术是研究蛋白质组学的有效工具
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
卫福磊 王朝溪 师园 王辰龙 史建全 祁洪芳 李长忠
青海湖裸鲤是青海湖及其周边流域唯一的经济鱼类,在鱼-鸟-草地生态系统中处于核心地位。核糖体蛋白S3a(RPS3a)是真核细胞中核糖体40S小亚基的组成成分,为一种多功能性蛋白。开展青海湖裸鲤高盐适应机理的研究,有助于揭示青海湖裸鲤的基本生命活动规律,为该鱼种的资源保护和人工增殖放流提供理论依据。我们通过RT-PCR和RACE技术,得到了青海湖裸鲤RPS3a的完整编码序列[KC818610.1]。通过实时荧光定量检测胚胎发育不同阶段和不同盐度胁迫条件下RPS3a表达水平的变化,显示其在盐度胁迫条件下和胚胎发育过程中表达水平逐步上升,初步表明RPS3a对于青海湖裸鲤胚胎发育和盐度适应性生理机制的变...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
任燕 陆承平 姚火春
根据已发表的人源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)温敏胞外蛋白酶基因eprA1的核甘酸序列,设计合成一对引物,以嗜水气单胞菌鱼源株Ah J-1基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1 005 bp的胞外蛋白酶基因eprJ1,将该基因片段连接到pMD18-T载体中,构建克隆载体pMD-eprJ1。序列分析发现,其与发表的Ah AH1的胞外蛋白酶eprA1基因的同源性有91%。根据测序结果在保守区重新设计一对引物以增强特异性,扩增片段大小为387 bp。对1990~2004年15年间从浙江、福建、湖北及江苏等地不同患病水产动物肝肾等脏器分离到的23株Ah检测结果显示,从...
[期刊] 华北农学报
[作者]
叶飞 张培君 田德雨 徐慧 孙慧玲 王宏俊 龚玉梅 贺云霞
副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis)是规模化猪场的重要细菌性疾病之一。对已发表的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子量大约为41 kDa,利用基因工程的方法将该基因片段定向克隆至表达载体pGEX-6p-1中,诱导表达后的分子量约为67 kDa。该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。
关键词：
副猪嗜血杆菌 ompP5 克隆 表达
[期刊] 水产学报
[作者]
欧阳岁东 林天龙 陈孝煊 俞伏松 龚晖 陈红燕 方勤美
A pair of primers were designed according to the published nucleotide sequence of a putative outer membrane protein gene(omp) of Aeromonas hydrophila.With the specific primers,a target fragment about 1.1 kb was amplified from Aeromonas hydrophila ML316 via PCR.The target fragment was inserted into t...
[期刊] 水产学报
[作者]
储卫华 陆承平
根据已发表的气单胞菌胞外蛋白酶基因核苷酸序列,设计和合成了一对引物,以嗜水气单胞菌AhJ-1的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增到约900bp的丝氨酸蛋白酶基因片段,并克隆到质粒载体pGEM-T中进行测序和分析,结果表明扩增的丝氨酸蛋白酶基因片段与已发表的嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶Ahe2的同源性有87％,扩增片段编码343个氮基酸,推测的分子量为35700,计算机软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性,可作为核酸疫苗的侯选基因片段。
关键词：
嗜水气单胞菌 丝氨酸蛋白酶基因 克隆
[期刊] 水产学报
[作者]
黄晓 叶巧真 何建国 谢俊峰 王顺强
根据已发表的外膜蛋白基因ompII的核苷酸序列设计引物 ,从分离自患红底板病的中华鳖的嗜水气单胞菌中扩增得到了ompTS基因。对ompTS基因进行序列分析 ,发现其与ompII基因的核苷酸序列有 83.5 %的同源性。ompTS基因最长的开放阅读框 (ORF)为 10 6 8nt,编码由 35 5个氨基酸组成 ,分子量为 38.9kDa的蛋白质OmpTS ,其氨基酸序列的前 2 0个氨基酸残基可能组成信号肽。由ompTS基因推导的编码氨基酸序列与其它细菌外膜蛋白的氨基酸序列的比较结果 ,进一步证实细菌外膜蛋白氨基酸序列的N端存在高度保守区。根据序列分析结果推测 ,ompTS基因很可能是一个新的...
关键词：
嗜水气单胞菌 外膜蛋白 ompTS基因
[期刊] 中国水产科学
[作者]
董传甫 林天龙 俞伏松 龚晖
用十二烷酰肌氨酸盐抽提结合超速离心纯化,制备了19株典型嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和1株温和气单胞菌(A.sobria)的主要外膜蛋白(MOMP)。根据SDS-PAGE图谱,将其中的14株菌分为3个MOMP组,Ⅰ组的主要蛋白带为40 kD和43 kD,Ⅱ组的主要蛋白带为40 kD和50 kD,Ⅲ组的主要蛋白带为40 kD、46 kD和50kD。MOMP组和血清型间没有严格的关系。用兔抗嗜水气单胞菌体抗原为第一抗体进行免疫印迹实验,结果显示,所有被试菌株都能产生强阳性反应,其中40 kD的蛋白带为大多数菌株所共有,且具有相似的免疫原性,是构成菌体抗原的重要免疫原。用...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈怀青 陆承平
用甘氨酸缓冲液处理对鱼类致病的嗜水气单胞菌代表菌株 Ah J-1菌体细胞,可使该菌表层蛋白(S层)成片脱落。电镜观察发现,S 层是由四边形的蛋白亚单位呈晶格样排列而成。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,该蛋白的分子量约50k;免疫印迹显示,它是 Ah J-1的主要表面抗原。另将 Ah J-1用 Triton X-100选择性抽提,经 SDS-PAGE,在考马斯亮蓝染色图谱中显示其外膜蛋白(OMP)为3条主要蛋白带,分子量分别为34,46和58k.
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