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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
汤倩 张淑静 郭蔷薇 王永宏 张兴
【目的】通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌（Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ）Ｙｌ００１中ｃｐＸｒ基因，为进一步研究ｃｐＸｒ调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】通过融合ｐｃｒ技术，将ｃｐＸｒ基因的上、下游同源片段及质粒ｐＪｃＶ５３上的卡那抗性基因Ｋｍｒ ３个片段连接，克隆到自杀载体ｐｄｍ４中，将重组质粒转化到大肠杆菌ｓ１７－１λｐｉｒ中，经接合转移导入嗜线虫致病杆菌内，通过同源重组敲除ｃｐＸｒ基因；采用琼脂扩散法和抑制菌丝生长速率法分别测定突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用。【结果】从Ｘ．ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ Ｙｌ００１基因组中成功敲除ｃｐＸｒ基因，得到了．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭树奇 许鹏 鲁梅 王泽宇 王永宏 张兴
【目的】研究初始培养ｐＨ对ＸｅｎｏｒＨａｂｄｕｓ ｎｅａｍａｔｏｐＨｉｌａ Ｙｌ００１发酵液抑菌活性的影响，为进一步提高Ｙｌ００１的抑菌活性提供理论依据。【方法】采用生长速率法、琼脂扩散法、活体组织法，分别测定了初始ｐＨ ４．５，５．５，６．５，７．０，７．５和８．５培养条件下，Ｘ．ｎｅａｍａｔｏｐＨｉｌａ Ｙｌ００１发酵液及其乙酸乙酯提取物的抑菌活性；同时采用ＨｐｌＣ、ｌＣ－ｍｓ分析了乙酸乙酯提取物中代谢物的差异。【结果】随着初始ｐＨ的升高，共生菌发酵液及其乙酸乙酯提取物的抑菌活性也逐步提高。ｐＨ８．５时，Ｙｌ００１发酵液对水稻瘟疫病菌（ｍａｇｎａｐｏｒｔＨｅ ｇｒｉｓｅａ）、辣椒疫霉病菌（．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨保军 杨怀文 杨秀芬 刘峥 邱德文 袁京京
【目的】分离和纯化嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophila var.pekingensis)CB6菌株胞内和胞外杀虫蛋白,鉴定其蛋白种类。为进一步利用此类杀虫蛋白奠定基础。【方法】采用硫酸铵沉淀、DEAESepharoseFF离子交换柱层析、Butyl SepharoseFF疏水柱层析和SephacrylS-200HR凝胶过滤对该类蛋白进行分离和纯化,采用Native-PAGE和SDS-PAGE技术对所纯化蛋白进行组分分析。【结果】获得达电泳纯的胞内杀虫蛋白E1和胞外杀虫蛋白E2。以2.58μg·ml-1含量E1、以4.21μg·ml-1含量E2喂饲棉铃虫初孵幼虫...
[期刊] 华北农学报
[作者]
史翠红 宋萍 王勤英 杨君 崔龙 孔繁芳
毒素Ⅱ是从嗜线虫致病杆菌HB310菌株分离得到的一种具有胃毒杀虫活性的复合蛋白毒素。本研究以该毒素口服饲喂棉铃虫4龄幼虫,检测了毒素Ⅱ对棉铃虫生长发育的影响,并通过生化分析研究其对棉铃虫幼虫体内几种酶活力的影响。结果表明:饲喂拌有毒素Ⅱ人工饲料的棉铃虫4龄幼虫-化蛹历期为6.65 d,比对照明显推迟2d,毒素Ⅱ对棉铃虫幼虫化蛹有明显的影响,毒素Ⅱ饲喂的幼虫化蛹率为62%,取食对照幼虫的化蛹率为98%,并且处理组蛹的平均体重也受到明显的抑制,比对照蛹的平均体重降低106.47 mg,两者差异显著;在饲毒12 h后棉铃虫幼虫中肠弱碱性类胰蛋白酶、强碱性类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶和总蛋白酶活性分别受...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王大鹏 吴家强 于江 丛晓燕 杜以军 孙文博 张玉玉 时建立 李俊 周顺 王金宝
本文对副猪嗜血杆菌血清5型生长曲线进行了研究。结果表明:种子液接种后6 h开始进入对数生长期,培养24 h后活菌数达到最高峰,20～30 h活菌数维持在同一个水平,进入稳定期,30 h后活菌数呈现下降趋势,进入衰退期。该曲线提供了副猪嗜血杆菌生长规律,为疫苗研制提供了理论基础。
关键词：
副猪嗜血杆菌 血清5型 生长曲线 致病力
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯纪年 李玉凤 王永宏 张兴
为了准确克隆昆虫病原线虫共生菌YL001菌毛蛋白亚基基因,根据已报道的菌毛蛋白亚基序列设计引物,以昆虫病原线虫共生菌YL001的总DNA为模板进行PCR扩增,获得1条大约500 bp的特异性片断,将此片断克隆到T-easy载体上,获得了重组子pGEM-PSYL001,序列测定和结构分析结果表明,PSYL001阅读框全长537bp,编码179个氨基酸,预测分子量和等电点分别为18.9 ku和6.94,GenBank登录号为DQ537944。与GenBank(AY140909)上公布的Xenorhabdus nematophilus菌毛蛋白亚基核苷酸序列的同源性为99%,氨基酸序列的同源性为98%...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱文 杨志荣 刘世贵 侯若彤
采用石蜡组织切片和电镜超薄切片技术，对苏云金杆菌亚种Ｂ．ｔ．７侵染蝗虫后，在宿主中肠组织的病理变化和细胞病理超微结构的变化进行了研究。结果表明，这株苏云金杆菌感染蝗虫１８小时后，宿主中肠组织开始出现病变，４８小时以后中肠上皮细胞开始溃烂。宿主中肠细胞器如线粒体、内质网、核糖体和细胞核等均有不同程度的病变，其中以线粒体病变最为严重，中肠细胞表面的微绒毛也有的呈现空泡状突起、脱落等病症表现。
关键词：
苏云金杆菌,蝗虫,组织病理,细胞学病变
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋娜 戴青青 宋娜 黄丽丽 韩青梅
【目的】利用反向遗传学方法构建苹果树腐烂病菌(Valsa mali)中表达GTP-环化水解酶II基因Vmgtp1的敲除载体,通过同源重组的方法进行基因敲除分析目标基因的功能,为全面解析苹果树腐烂病菌致病的分子机制奠定基础,并为有效控制苹果树腐烂病的方法技术和药剂研制提供理论依据。【方法】通过对笔者实验室苹果树腐烂病菌转录组数据的分析比对得到GTP-环化水解酶II基因Vmgtp1(暂命名),该基因在接种5 d后,在病组织中表现出一定的上调表达,推测该基因可能与苹果树腐烂病菌致病相关。采用Double-joint PCR方法,将目标基因Vmgtp1的上游片段UP、下游片段DOWN及筛选标记潮霉素磷...
关键词：
苹果黑腐皮壳 同源重组 PEG 致病性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚红燕 陈利锋 孙枫 陈官菊 俞刚
Tri12是镰孢菌Fusarium编码单端孢霉烯族毒素(trichothecenes,以下简称“单族毒素”)输出泵的基因,而产毒基因Tri5编码的单端孢霉二烯合酶催化毒素生物合成中的第一步反应。以禾谷镰孢FusariumgraminearumSchw.野生型菌株NRRL29169为亲本,获得Tri12敲除的转化子MT12。与NRRL29169相比,MT12在PDA培养基上生长慢,生长量小(P<0.01),大分生孢子较长。致病力测定结果显示,NRRL29169致病力最强,所致病害可以自接种点向上下扩展至其他小穗,而MT12的致病力极弱。我们由此推测,Tri12的敲除导致病菌产生的毒素不能被泵出体...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
龙菊英 张桂英 王金生
wxocA、wxocB、wxocD、wxocE和wzt是水稻条斑病菌(Xanthom onas oryzaepv.oryzicola,Xooc)的脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)合成基因,avrXa3是水稻白叶枯病菌(Xanthom onas oryzaepv.oryzae,Xoo)的一个无毒基因。利用pBCSK(-)和pKNG101两个质粒的复制起点不被水稻黄单胞菌识别的特点,把wxocA、wxocD、wxocE和wzt的中心区域克隆在pBCSK(-)上,获得突变转化单元pBCSK∷ΔwxocA、pBCSK∷ΔwxocD、pBCSK∷ΔwxocE和pBCSK∷Δwzt...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晓柱 李银凤 于志海 刘晓辉 黄名正
以菜豆晕疫病菌(Pseudomonas syringae pv.phaseolicola)NPS3121株系为出发材料,根据Gen Bank中登录的1448A甘油激酶(glycerol kinase,GK)氨基酸序列设计同源引物,通过PCR克隆NPS3121 GK基因,序列全长为1 506 bp,可编码1条含501个氨基酸的多肽。生物信息学分析表明,NPS3121 GK包含469个氨基酸,相对分子质量为55 800,富含α–螺旋结构,等电点为5.44。通过整合突变的方式构建了NPS3121 GK敲除突变体,敲除突变体与野生型相比,在M9培养基中生长速率降低18%,在KBM培养基中生长速率降低16%。敲除突变体中甘油浓度较野生型提高了6倍。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
田李 刘娜 徐荣旗 曲志才 刘乾
【目的】验证大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)非同源末端连接途径关键基因Vdku80的功能,构建高效的大丽轮枝菌基因敲除受体菌株。【方法】利用常规基因敲除的方法,构建大丽轮枝菌Vdku80基因缺失的突变体菌株ΔVdku80。即将Vdku80的同源重组DNA片段(Vdku80的基因组上下游DNA片段之间连接潮霉素抗性基因)通过农杆菌介导的转化转入大丽轮枝菌,通过同源区段的重组,潮霉素抗性基因便会替换掉野生型Vdku80,从而获得突变体菌株ΔVdku80。对突变体菌株ΔVdku80的生物学表型,即生长速率、产孢量和对棉花的致病性进行测试。分别以大丽轮枝菌野生型菌株和ΔVdku8...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
肖罗 杨秀芬 戴良英 邱德文 刘峥 袁京京
CB43菌株是中国农业科学院环境与可持续发展研究所从采自中国东北地区的昆虫病原线虫新种拟双角斯氏线虫(Steinernemaceratophorum)肠道内分离的菌株.用CB43菌株发酵液对灰葡萄孢进行了平板抑菌活性测定和防治番茄灰霉病盆栽试验,并对CB43菌株抗菌物质的理化性质进行了测定.结果表明,CB43菌株产生的抗菌物质对灰霉病菌菌丝有较强的抑制作用,125mL/L发酵液能完全抑制菌丝的生长,62.5mL/L的发酵液72h后菌丝抑制率仍达83.35%;盆栽防治灰霉病效果达67.3%.CB43代谢物的理化特性表明,抗菌物质为极性,两性化合物,在酸性和碱性及高、低温条件下均较稳定.
关键词：
致病杆菌 抑菌活性 理化性质
[期刊] 林业科学
[作者]
汪来发 杨宝君 李传道
用南方根结线虫卵作接种试验，证明从根结线虫成虫及卵上分离７６个菌株中大部分菌株有寄生能力，种间及株间寄生率差异明显，表明这种方法是检验寄生真菌寄生能力的一种良好方法。通过测定，７６个菌株中有１０个菌株对南方根结线虫卵的寄生率超过５０％，种间及菌株间对卵的寄生能力存在很大差异；Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｌｉｌａｃｉｎｕｓ，Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｉｕｍ及Ｖ．ｌａｍｅｌｉｃｏｌａ对Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａ，Ｍ．ａｒｅｎａｒｉａ和Ｍ．ｊａｖａｎｉｃａ卵的寄生能力进行比较，在３种线虫之间没有明显差异，说明这３种真菌对这３种根结线虫有进行防治的可能性。首次研究了寄生真...
关键词：
根结线虫,生物防治,根结线虫寄生真菌
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
赵博光 郭道森
从患松材线虫病致死的黑松和马尾松病树组织及松褐天牛虫体中分离的松材线虫虫体上均分离到同一细菌菌株 .经致病性、革兰氏染色、菌体形态、培养性状和生理生化反应等测定 ,将致病菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌 .ATBExpression自动鉴定仪的鉴定结果与上述结果相同 .在分离过程中该菌出现频率较高 ,说明是松材线虫携带的主要细菌 .人工接种试验结果显示 ,用无菌线虫或洋葱伯克霍尔德氏菌菌株分别接种的黑松无菌苗不发病 ,而用二者混合接种则使无菌苗迅速发生褐变和萎蔫 .林间利用 6年生黑松进行的接种试验结果证明 ,用无菌松材线虫和洋葱伯克霍尔德氏菌菌株混合接种的黑松与使用野生松材线虫接种的黑松都 10...
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