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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李绍戊 王荻 刘红柏 尹家胜 卢彤岩
【目的】探讨鱼源嗜水气单胞菌菌蜕系统的可行性和应用性。【方法】以ＰｈｉＸ１７４基因组ＤＮＡ为模板，对ＬｙｓｉｓＥ基因进行ＰＣＲ扩增，并将纯化的ＰＣＲ产物与原核表达载体ＰＢＶ２２０双酶切后连接，构建溶菌质粒ＰＢＶ２２０－ＬｙｓｉｓＥ。将ＰＢＶ２２０－ＬｙｓｉｓＥ转入嗜水气单胞菌ＬＮ０９２５株中，构建ＬＮ０９２５（ＰＢＶ２２０－ＬｙｓｉｓＥ）菌蜕疫苗（ＡｈＧｓ），进而通过溶菌动力学过程检测、电镜下细菌形态观察和动物免疫保护试验等评价所制备的菌蜕疫苗。【结果】ＰＣＲ扩增成功获得长度为２７６ＢＰ的噬菌体ＬｙｓｉｓＥ基因；成功构建ＰＢＶ２２０－ＬｙｓｉｓＥ重组质粒及ＡｈＧｓ。在４２℃诱导６０ｍｉＮ后，Ｌ．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
贺路 曾令兵 杨先乐
以绵羊红细胞为载体，建立了检测银鲫血清抗体的间接血球凝集试验。用该方法研究了银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答一般规律。研究结果表明，疫苗免疫组在免疫７天后可以测到血凝抗体，２１天达到高峰值４０９６，然后开始下降，３５天时抗体滴度降为１６。加弗氏不完全佐剂疫苗免疫组亦在７天时可以测到血凝抗体，２１天达到１０２４，３５天时为２０４８，抗体维持在较高的水平。对鱼体免疫后的保护力进行测定，结果表明，两个免疫组分别在７天左右和１４天左右开始产生保护力。免疫保护力在鱼体免疫初期随着抗体滴度的增加而加强，随后在一段时间内保持在较强的水平，并不随抗体滴度的下降而减弱。浸泡免疫试验的结果亦表明，银鲫可以通过...
[期刊] 水产学报
[作者]
时云朵 任燕 张德锋 付小哲 林强 李宁求 石存斌 吴淑勤
为研究山莨菪碱作为佐剂在细菌灭活疫苗浸泡免疫中的作用,将山莨菪碱和嗜水气单胞菌全菌灭活疫苗联合浸泡免疫异育银鲫,首次浸泡免疫7 d后加强免疫1次。通过实时荧光定量PCR检测第2、4、7、11、14和21天脾脏中Ig M、IL-1β、C3、C-凝集素以及溶菌酶的mRNA表达量,并在第21天进行同源菌株活菌攻击实验。结果显示,山莨菪碱组第4天Ig M和IL-1β的表达量达到最高值,分别为28.3和332.7;而无佐剂疫苗组第11天Ig M和IL-1β达到最高值,分别为56.1和791.8。山莨菪碱组的补体C3、C-凝集素以及溶菌酶的表达量都显著高于无佐剂组和对照组,且表达持续时间长。活菌攻击实验表...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郭玉娟 陈学年
为了探讨 A_(3α)肽聚糖对灭活嗜水气单胞菌疫苗免疫效果的影响，用添加肽聚糖的饲料投喂注射接 种经甲醛灭活的嗜水气单胞菌菌苗的彭泽鲫，测定鲫鱼白细胞吞噬活性、血清和体表粘液溶菌酶活性、抗体 效价以及活菌攻毒后的免疫保护率。结果表明，肽聚糖与灭活菌苗联合使用，鱼体表粘液和血清溶菌酶活性、 白细胞吞噬活性、抗体效价以及活菌攻毒后的免疫保护率显著提高，表明 A_(3α)肽聚糖可增强灭活菌苗的免疫效 果。
[期刊] 水产学报
[作者]
吴宗福 龚晖 陈红燕 杨金先 刘晓东 林天龙
应用嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物作为抗原,制备成免疫刺激复合物(β-hemA-ISCOMs),通过浸泡途径免疫鳗鲡,测定免疫鱼细胞和抗体应答水平和免疫效力。试验结果表明:(1)β-hemA-ISCOMs在电镜下呈笼格状颗粒,直径约40nm;(2)一免后第44天,β-hemA-ISCOMs免疫组淋巴细胞转化率显著高于非β-hemA-ISCOMs免疫组(P<0.05);(3)免疫浓度在30～120mg.L-1时,β-hemA-ISCOMs免疫组血清抗体效价与浓度正相关,且显著高于ISM1312佐剂组与无佐剂组(P<0.05);(4)免疫浓度在30～120mg.L-1时,β-hemA-IS...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张吉红 储卫华 陆承平
将热灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)生物被膜(biofilm,BF)菌苗和浮游(freecell,FC)菌苗口服免疫小鼠和剑尾鱼,通过测定抗体效价、相对保护率、小鼠的淋巴细胞转化和肠道sIgA浓度,评价免疫效果。免疫20d后,BF菌苗组50尾剑尾鱼的相对保护率为68%;FC菌苗组为42%。BF菌苗组12只小鼠的相对保护率为70%;FC菌苗组为50%;对照组为17%。BF菌苗组小鼠外周血淋巴细胞转化率是7.28、FC菌苗组为3.87、对照组为2.36。BF菌苗组小鼠肠道sIgA浓度是1.22μg/mL;FC菌苗组为0.73μg/mL;对照组为0.465μg/mL。免疫...
关键词：
嗜水气单胞菌 生物被膜疫苗 免疫
[期刊] 淡水渔业
[作者]
贺路 李杜 徐文
用嗜水气单胞菌9120株制备了鱼类出血性败血症疫苗。用该疫苗分二组对白鲢进行免疫，检测免疫后白鲢血清中的抗体水平，其中加佐剂免疫组获得了较高滴度的凝集抗体，不加佐剂免疫组产生的凝集抗体滴度较低，但用间接血球凝集试验可以检出。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周勇 史玉恒 赵建青 代建丽 范玉顶 刘文枝 江南 曾令兵
为了研究嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫施氏鲟(Acipenser schrenckii Brandt,1869)后的免疫应答反应与保护效果,本研究采用福尔马林灭活法制备嗜水气单胞菌灭活疫苗。通过腹腔注射途径免疫健康施氏鲟,对施氏鲟外周血的红细胞和白细胞数量、白细胞组成、吞噬活性、吞噬指数、血清酸性磷酸酶活性、血清溶菌酶活性、血清中和抗体效价等免疫指标及疫苗保护效果进行测定。结果显示,免疫组红、白细胞数量迅速上升,于免疫后第4天达峰值,分别为(8.50±0.17)×108个/mL和(8.96±0.44)×106个
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾亚东 汪成竹 陈昌福
将采用温酚法从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)和叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)中提取的粗脂多糖(crude lipopolysaccharide,LPS)作为免疫原,注射接种中华鳖(Pelodiscus sinensis)后,通过测定受免鳖的交叉凝集抗体效价、肾脏和血液中吞噬细胞的吞噬活性和对A.hydrophila活菌细胞内杀菌活性,比较了3种致病菌的粗LPS对中华鳖的免疫原性。试验结果表明,从3种致病菌中提取的粗LPS对中华鳖均具有较强的免疫原性,受免鳖的血清中存在对3种致病菌的...
关键词：
中华鳖 嗜水气单胞菌 粗脂多糖 免疫应答
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘振兴 陈昌福 高宇 王美珍 谭晶晶 李革雷
将嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)用灭菌生理盐水调节至1.5×104cfu/mL(Ⅰ组)和1.5×106cfu/mL(Ⅱ组)的浓度后,注射法接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii)(人工感染),定时检测供试克氏原螯虾的总血细胞数量(THCs)、淋巴液中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶活性和抗菌活力等免疫相关因子活性的变化状况。结果表明,注射不同浓度的A.hydrophila后的8~48 h之间,供试克氏原螯虾的免疫相关因子的活性发生了显著变化。2个试验组的克氏原螯虾在注射A.hydrophila后8~48 h内,THCs和SOD活性显著...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范红结 陈怀青 姚火春 陆承平
将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代［Ｊ－１（５）］在产毒素培养基上连续传代至第３５代［Ｊ－１（３５）］，并分别检测Ｊ－１（６）和Ｊ－１（３５）的生化特性。另取Ｊ－１（６）、Ｊ－１（１５）、Ｊ－１（２５）和Ｊ－１（３５）分别制备嗜水气单胞菌灭活疫苗，用其分别免疫鲫鱼，之后用Ａｈ强毒攻击；同时用Ｊ－１（６）经腹腔注射或浸泡各免疫组鲫鱼，测其最低免疫剂量。结果显示，从第５代传至３５代，Ａｈ菌株的培养特性和免疫原性没有显著差异；腹腔免疫和浸泡免疫的最低有效剂量分别为１×１０７ｃｆｕ／尾和５×１０７ｃｆｕ／ｍＬ。表明ＡｈＪ－１株可作为理想的疫苗生产株。
关键词：
嗜水气单胞菌 免疫原性 生化特性 稳定性
[期刊] 水产学报
[作者]
赵林辉 田佳鑫 孔祎頔 彭思博 单晓枫 王桂芹
为构建嗜水气单胞菌OmpA、flaA基因重组干酪乳杆菌并分别检测其表达产物的对鲤的生长及免疫效果的影响；实验将目的基因克隆至乳酸菌穿梭表达质粒pPG612中，并电转至干酪乳杆菌中，经诱导后包被饲料对鲤进行饲养56 d，称重并采集血清及组织，分析生长指标及免疫指标变化。在56d饲养免疫结束后结果显示，生长指标表明重组干酪乳杆菌与对照组相比无显著性差异，其表明对生长无影响；免疫效果分析显示，血清中IgM 表达水平显著上升；血清中AKP、LZM、SOD、CAT、C3和C4也均有显著性升高，荧光定量PCR检测发现免疫后肝、脾、肾及肠组织中的细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α、NF-kB、TLR5及MYD88的基因表达水平有明显的不同程度提升；其TLR5及MYD88表达量Lc-mcs-flaA组高于Lc-mcs-OmpA组；攻毒后Lc-mcs-OmpA与Lc-mcs-flaA免疫保护率分别为59%与54%，显著高于对照组。研究表明，本实验构建的重组干酪乳杆菌Lc-mcs-OmpA与Lc-mcs-flaA免疫鲤能刺激机体产生免疫应答反应，进而提高自身存活率，其为预防鱼类嗜水气单胞菌感染的口服免疫制剂的研发奠定了基础并提供科学理论依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
龚晖 林天龙 张晓佩 罗土炎 吴宗福 宋铁英 杨先乐
将嗜水气单胞菌气溶素(AerA)基因定向连接到pET32a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE分析表明,硫氧还蛋白-气溶素融合蛋白(Trx-AerA)表达量占重组菌总蛋白量的65.5%。将上述融合蛋白与商品化的QuilA混合,分别添加Mega-10、卵磷脂、胆固醇获得Trx-AerA ISCOMs。其中同时添加Mega-10、卵磷脂、胆固醇组蛋白回收率最高为10.46%,仅添加QuilA组蛋白回收率为1.82%,两者差异显著(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张秋胜 陈昌福
采用福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)菌苗免疫接种异育银鲫 ,通过测定受免鱼血清中凝集抗体效价 ,溶菌酶活性 ,血液中吞噬细胞的吞噬活性 ,杀菌活性并通过鱼体攻毒试验 ,探讨了异育银鲫对福尔马林灭活的嗜水气单胞菌菌苗的免疫应答状况。结果表明 ,接种 2 8d后 ,受免鱼血清中凝集抗体效价和溶菌酶活性均值分别为 1∶18.89和 15 6 .36U/ml,相应的对照组则为 1∶0 .83和 138.6 8U/ml;受免鱼血液中白细胞吞噬百分比和吞噬指数分别为 6 3.38%和 6 .0 2 ,而对照组的分别为 47.95 %和 5 .0 8;免疫组和对照组白细...
关键词：
异育银鲫 嗜水气单胞菌 免疫应答
[期刊] 水产学报
[作者]
王彦波 任真真 张岩 傅玲琳
为了筛选能提高水产动物对嗜水气单胞菌抗病性的益生菌，并研究其免疫调节的作用机制。将５种乳酸菌与斑马鱼ＺＦ－４细胞共培养后通过荧光定量ＰＣＲ方法检测细胞因子ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的表达量，并用流式细胞仪检测被嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒后的细胞凋亡率来筛选对ＺＦ－４细胞保护性最显著的乳酸菌，将其添加至模式生物斑马鱼饲料中饲喂２８ ｄ后，用嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒并检测斑马鱼肠道中促炎性细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和抗炎性细胞因子ＩＬ－１０的表达情况，并计算斑马鱼被攻毒后的累积死亡率。结果显示，５种乳酸菌分别与细胞共培养后，芽孢乳酸菌０９．７１２能明显提高ＺＦ－４细胞ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和．．．
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