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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
严亚贤 孙建和 陈怀青 陆承平
用电镜观察嗜水气单胞菌Ｊ－１株，见有两种不同的菌毛，一种为短而硬直的Ｒ菌毛，另一种为长而易弯曲的Ｗ菌毛。Ｒ菌毛数量多，周身分布；Ｗ菌毛数量少，一个菌体仅４～６根。搅拌菌体悬液可使菌毛脱落，低速离心的上清液经ＰＥＧ沉淀、硫酸铵盐析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析后，获得纯化的Ｒ菌毛。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，在有２－巯基乙醇存在时，Ｒ菌毛的亚单位分子量为１７０００。氨基酸组分分析表明，Ｒ菌毛含有４１％的疏水性氨基酸。用纯化的Ｒ菌毛免疫家兔获抗血清，建立菌体凝集试验和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法，检测５０个待检样本的Ｒ菌毛，两法检出率均超过６０％，符合率为８８％。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李焕荣 陈怀青 陆承平
嗜水气单胞菌（Ａｈ）Ｊ－１株的液体培养物上清在５６℃或与乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）作用，其胞外蛋白酶（ＥＣＰａｓｅ）的活力有不同程度的下降。将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后，加ＡｈＪ－１上清作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，３７℃原位消化，染色，显示上清中存在至少５种分子量不同的蛋白酶。ＡｈＪ－１株的培养上清经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析，获得一种纯化的蛋白酶。不经２－巯基乙醇处理后，分子量约为５４０００，而经２－巯基乙醇处理的样品，分子量为３５０００，且酶活性丧失。该酶对热稳定，ＥＤＴＡ可抑制其活性，ＰＭＳＦ对其无影响。...
关键词：
嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 纯化 特性分析
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈红燕 林天龙 陈日升 杨金先 陈强
利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特性,腹水抗体效价在1∶104～1∶106,其中单抗4G4、2H4、GH9具有免疫荧光特性。ELISA特异性分析结果表明,4G4、2H4、FA4、GH9、CF2为嗜水气单胞菌血清型特异性单抗,4G4、2H4识别同一种血清型的嗜水气单胞菌分离株,而FA4、GH9、CF2却识别另外一种血清型的嗜水气单胞菌,并且与其他血清型的嗜水气单胞菌、温和气单胞菌以及...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
严亚贤 孙建和 陈怀青 陆承平
从南京某无病鱼塘水体中分离到一株革兰氏阴性、有运动力的短杆菌，定名为Ｗ－１株。其生化特性为氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸产气，发酵甘露醇、水杨素和阿拉伯糖，不发酵肌醇。从该菌株培养物的上清中提取的外毒素，具有细胞毒性与溶血性；用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素的单抗进行检测，乳胶凝集试验及ＤｏｔＥＬＩＳＡ均呈阳性结果。电镜观察未发现该菌株有晶格样排列的Ｓ层和菌毛，与Ｊ－１株Ｓ蛋白抗血清及Ｒ菌毛抗血清作免疫转印亦为阴性结果，表明该菌株无菌毛及Ｓ层。细胞粘附试验表明，该菌株不能粘附于ＨＥｐ－２细胞。毒力试验显示，除去上清的Ｗ－１菌株对小鼠和鲫鱼的ＬＤ５０均大于１０１０，可确认其无致病力。以上结果提示：嗜水气单胞...
关键词：
嗜水气单胞菌 致病性 结构 粘附
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱兴国 范红结 陆承平 陈怀青
以EPC细胞和HEp 2细胞为细胞模型 ,用嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila ,Ah)J 1株进行粘附试验 ,同时以Ah4型菌毛的抗血清作粘附抑制试验 ,用以分析AhJ 1株的粘附素及其受体。EPC细胞粘附和粘附抑制试验证实 ,AhJ 1株粘附素受体具有甘露糖、胆固醇成分 ,有少量半乳糖成分 ,无葡萄糖成分。HEp 2细胞粘附和粘附抑制试验证实 ,与其它非菌毛粘附素如S层及外膜蛋白相比 ,Ah 4型菌毛的粘附作用较为显著。抗 4型菌毛抗体抑制细菌的粘附力达 80 %以上。抗S层、外膜蛋白抗体也能使细菌的粘附力下降 ,表明Ah的粘附作用由菌毛粘附素与非菌毛粘附素共同参与。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
朱鑫海 张紫瑞 周丽颖 汤环宇 敖士奇 周一凡 高晓建 姜群 张晓君
嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是严重危害翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)养殖生产的主要病原之一，为揭示嗜水气单胞菌感染翘嘴鳜后宿主基因表达水平的变化，筛选免疫相关基因，解析翘嘴鳜应答病原细菌感染的分子机制，本研究以病原嗜水气单胞菌感染翘嘴鳜，于感染24 h后，采集感染组与对照组翘嘴鳜头肾组织，采用Illumina Hiseq 2000进行了RNA-Seq分析，原始数据拼接后组装共获得53，040个单基因(unigene)。基因差异表达分析结果显示，感染组和未感染组翘嘴鳜存在526个差异表达基因，包括254个上调基因和272个下调基因，其中免疫相关的显著上调的差异基因主要有炎症和免疫原性细胞因子白介素、补体系统、MHCⅠ型抗原提呈、溶菌酶、丝氨酸蛋白酶抑制因子、泛素蛋白连接酶等。GO富集分析发现，差异基因主要涉及免疫应答反应和炎症反应等，经KEGG富集分析显示，89个通路富集显著，免疫相关的代谢通路主要有内吞作用和吞噬体等。此外，实时荧光定量PCR验证结果表明，所选取7个差异表达免疫相关基因与RNA-seq结果具有相似的表达趋势。本研究为揭示翘嘴鳜对病原微生物感染的防御分子机制奠定了理论基础。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
朱鑫海 张紫瑞 周丽颖 汤环宇 敖士奇 周一凡 高晓建 姜群 张晓君
嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是严重危害翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)养殖生产的主要病原之一，为揭示嗜水气单胞菌感染翘嘴鳜后宿主基因表达水平的变化，筛选免疫相关基因，解析翘嘴鳜应答病原细菌感染的分子机制，本研究以病原嗜水气单胞菌感染翘嘴鳜，于感染24 h后，采集感染组与对照组翘嘴鳜头肾组织，采用Illumina Hiseq 2000进行了RNA-Seq分析，原始数据拼接后组装共获得53，040个单基因(unigene)。基因差异表达分析结果显示，感染组和未感染组翘嘴鳜存在526个差异表达基因，包括254个上调基因和272个下调基因，其中免疫相关的显著上调的差异基因主要有炎症和免疫原性细胞因子白介素、补体系统、MHCⅠ型抗原提呈、溶菌酶、丝氨酸蛋白酶抑制因子、泛素蛋白连接酶等。GO富集分析发现，差异基因主要涉及免疫应答反应和炎症反应等，经KEGG富集分析显示，89个通路富集显著，免疫相关的代谢通路主要有内吞作用和吞噬体等。此外，实时荧光定量PCR验证结果表明，所选取7个差异表达免疫相关基因与RNA-seq结果具有相似的表达趋势。本研究为揭示翘嘴鳜对病原微生物感染的防御分子机制奠定了理论基础。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
单晓枫 张洪波 郭伟生 钱爱东
用平板划线法或点种法对212株分离自养殖水体和水产动物胃肠道的细菌进行筛选,得到1株对嗜水气单胞菌(Aerom onas hydrophila)有拮抗作用的细菌MLS-7。经过生理生化的初步鉴定,该菌为粪肠球菌(Entero-coccus faecalis)。MLS-7上清液抑菌试验和共培养试验表明其对嗜水气单胞菌有较强的抑菌作用。进一步对MLS-7抑菌谱进行测定,确认其对鱼源的病原菌有一定的抑菌作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
毛秀秀 覃映雪 邹文政 郭松林 苏永全 鄢庆枇 纪荣兴
应用改良的微孔板法研究了致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)B11的生物膜形成特性。结果显示,嗜水气单胞菌B11能够在聚苯乙烯酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,其生物膜的OD590值在6h即达到小高峰,于22h达到峰值,其后随着培养时间的延长而降低;随着初始菌液浓度的增加,生物膜的OD590值逐步降低;25℃的生物膜的OD590值显著高于其他温度的生物膜生成量(P0.05);培...
关键词：
嗜水气单胞菌 生物膜 形成特性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张吉红 陆承平
建立嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)的生物被膜(BF)体外形成模型,用银染法及扫描电镜观察检测Ah致病株J1、N1及非致病株W1、4332株产生BF的情况,同时研究温度和消毒剂对AhJ1株的游离(FC)细菌(以下简称FC细菌)和具有BF的细菌(以下简称BF细菌)的影响。实验表明:致病株AhJ1、N1株均可形成BF,而非致病株AhW1、4332株均不形成BF。AhJ1株的BF细菌经85℃30min、-20℃80d、0.01%新洁尔灭处理后均有存活,而FC细菌无存活细菌。根据已发表的AhA1株的转录调节蛋白基因(AhyR)核苷酸序列,设计并合成了一对引物,对AhJ1、N...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
许冬青 陆承平 陈怀青
致病性嗜水气单胞菌(Aerom onashydrophila, Ah) J-1 株具有S层结构。用甘氨酸缓冲液处理AhJ-1 株菌体细胞,离心, 上清即为粗提的S蛋白。用自制兔抗AhJ-1 株S蛋白抗体建立间接ELISA法, 检测结果显示, 20～30 h S蛋白表达量较高。粗提的S蛋白经离心、Sephadex G100 凝胶层析获纯化的S蛋白。经SDS-PAGE电泳分析为单一多肽, 相对分子质量51 500。等电聚焦分析为单一条带, 等电点 (pI) 为5.01。氨基酸组分分析表明, S蛋白由天门冬氨酸等16种氨基酸组成, 其中疏水性氨基酸占42.1% , 不含半胱氨酸。N端序列分析结果为A...
关键词：
嗜水气单胞菌 S蛋白 N端测序
[期刊] 中国水产科学
[作者]
董传甫 林天龙 俞伏松 龚晖
用十二烷酰肌氨酸盐抽提结合超速离心纯化,制备了19株典型嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和1株温和气单胞菌(A.sobria)的主要外膜蛋白(MOMP)。根据SDS-PAGE图谱,将其中的14株菌分为3个MOMP组,Ⅰ组的主要蛋白带为40 kD和43 kD,Ⅱ组的主要蛋白带为40 kD和50 kD,Ⅲ组的主要蛋白带为40 kD、46 kD和50kD。MOMP组和血清型间没有严格的关系。用兔抗嗜水气单胞菌体抗原为第一抗体进行免疫印迹实验,结果显示,所有被试菌株都能产生强阳性反应,其中40 kD的蛋白带为大多数菌株所共有,且具有相似的免疫原性,是构成菌体抗原的重要免疫原。用...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
祖国掌 余为一 李槿年 李郁
从鲫鱼肌肉和脏器先后分离到四株嗜水气单胞菌Ｄｙ、ｘＡ、ｘＡ５和ｘＡ６。与南京农业大学惠赠的嗜水气单胞菌Ｊ—１株进行了系统的比较鉴定。结果表明：１．五株细菌在培养特性、生化特性和药敏特性方面，除在分解水杨素和蔗糖能力以及新生霉素和新霉素敏感性等指标外，其他均基本一致；２．Ｄｙ、ｘＡ５和ｘＡ６同Ｊ—１一样能致死小白鼠和鲢鱼，而ｘＡ却不能；３．在与兔抗Ｊ—１抗血清的凝集反应中，Ｄｙ、ｘＡ５和ｘＡ６呈强阳性反应，而ｘＡ呈弱反应。这些结果表明，从不同地区分离的四株气单胞菌在致病性和抗原结构方面均存在差异。
关键词：
嗜水气单胞菌,致病性,抗原结构
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