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[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈红燕 林天龙 陈日升 杨金先 陈强
利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特性,腹水抗体效价在1∶104～1∶106,其中单抗4G4、2H4、GH9具有免疫荧光特性。ELISA特异性分析结果表明,4G4、2H4、FA4、GH9、CF2为嗜水气单胞菌血清型特异性单抗,4G4、2H4识别同一种血清型的嗜水气单胞菌分离株,而FA4、GH9、CF2却识别另外一种血清型的嗜水气单胞菌,并且与其他血清型的嗜水气单胞菌、温和气单胞菌以及...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈琼 陆承平
以福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 HEC 毒素免疫 Balb/C 小鼠,取其脾细胞与 SP2/O 细胞融合,用间接ELISA 筛选,获得9株分泌 HEC 毒素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,腹水 ELISA 效价为1∶640～1∶20 480。其中8株能特异性抑制 HEC 毒素的溶血活性,溶血抑制效价为1∶32～1∶256。用1B4和5E3两株细胞制备的腹水混合,建立了检测嗜水气单胞菌 HEC 毒素的点酶法。用单抗点酶法对95株临床病鱼分离菌进行检测,有72例阳性,敏感性较多抗点酶法高。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭晓 汪远 范红结 马喆
[目的]本试验旨在制备抗鼠伤寒沙门菌Pag C蛋白的单克隆抗体并初步分析其特异性和识别的抗原表位,为沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的建立奠定基础。[方法]原核表达并纯化Pag C蛋白,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体;用生物信息学分析法获得Pag C蛋白在沙门菌属内保守的区段,合成相应多肽P1及P2用于单克隆抗体筛选和结合表位鉴定;最后采用免疫印迹方法对单克隆抗体与肠杆菌科其他细菌的交叉反应进行检测,评价其特异性。[结果]纯化后的Pag C蛋白相对分子质量约23×103;免疫小鼠后经2次亚克隆最终得到稳定分泌抗体的细胞株6株,标记为A、B、C、D、I、J;单克隆抗体的反应性试验结果显示6株单克隆抗体均能够识别Pag C蛋白;单克隆抗体的结合表位分析显示,J细胞株分泌的单克隆抗体可特异性识别P1序列;采用免疫印迹方法对J细胞株上清液进行特异性检测,证实该株单克隆抗体与变形杆菌、大肠杆菌O1和宋内志贺菌Pag C蛋白均无结合反应。[结论]成功获得1株与Pag C蛋白有良好结合活性且具有高度特异性的单克隆抗体,该株单克隆抗体的识别表位位于Pag C中沙门菌属内保守区段,可作为建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的候选单克隆抗体。
[期刊] 水产学报
[作者]
宋晓玲 黄倢 史成银
小鼠骨髓瘤细胞系SP2 / 0与经溶藻弧菌 (1.15 87)免疫的BALB/C雌鼠脾细胞在PEG条件下融合 ,有4 5 .8%的培养孔有杂交瘤细胞生长 ,其培养上清液抗体阳性率为 77.4 %。经反复有限稀释法克隆杂交瘤细胞 ,获得 7株抗溶藻弧菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别为 :AC1-C9,AC1-C11,BB4-D4,AD1-A3 ,AD1-F3 ,AD2 -E7,AD2 -F7。取AD1-F3 扩大培养 ,注射小鼠 ,制备了抗溶藻弧菌的单克隆抗体腹水 ,滴度为 1∶10 0 0。该腹水与其他 3株溶藻弧菌菌株有强交叉反应 ,与其他 13株标准菌株无交叉反应。利用制备的单抗腹水 ,...
关键词：
单克隆抗体 溶藻弧菌 酶联免疫吸附试验
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张鸯 陶明亮 路保通 靳亚平
【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单...
[期刊] 水产学报
[作者]
王凡 林天龙 潘厚军 吴淑勤 杨金先 李巧苹
This paper described the preparation and characterization of monoclonal antibodies(Mab) against mandarin fish(Siniperca chuatsi) immunoglobulin(Ig),using the Mabs as a tool for analyzing the structure of S.chuatsi Ig,and monitoring the humoral immunity level of S.chuatsi.The purified serum Ig of S.c...
关键词：
鳜 免疫球蛋白 单克隆抗体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王莹 郑浩 何成华 张爱华 冯璐璐 皇超英 张海彬
【目的】真菌毒素可导致严重的食品安全问题。本试验旨在制备可用于检测伏马菌素B1的特异性单克隆抗体。【方法】制备伏马菌素B1人工抗原,杂交瘤细胞法筛选杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,并对其特性进行鉴定。【结果】筛选得到杂交瘤细胞株F3,分泌的单克隆抗体亚类为IgG1,轻链类型为κ链;10%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗蛋白重链分子质量约为50 kD,轻链分子质量约为25 kD;间接酶联免疫吸附法测定杂交瘤细胞F3细胞培养上清和腹水效价分别为1:3 200和1:51 200;亲和力常数为1.60×10-8 mol.L-1;IC50值可达3.589ng.mL-1;对其它真菌毒素不存在交叉反应;免疫...
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡骁飞 魏凤仙 李青梅 职爱民 王方雨 孙亚宁 柴书军 付晓鹤
通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 01...
关键词：
植酸酶 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蔡勤仁 曾振灵 杨桂香 陈杖榴 方炳虎
碳二亚胺法合成了2种恩诺沙星(enrofloxacin,ENFX)人工抗原ENFX-BSA和ENFX-OVA,用紫外扫描和分析载体蛋白的氨基酸组成等方法对人工抗原进行鉴定,ENFX与BSA的结合比约为48∶1。用ENFX-BSA免疫BALB/C小鼠,采用显微克隆技术最终筛选出2株特异性分泌细胞2C5和5D5并获取腹水,纯化后腹水效价分别为1∶3200和1∶6400。2C5和5D5均属IgG2a型抗体。单抗5D5间接竞争ELISA(Ci-ELISA)的工作浓度为1∶1000,ENFX的抑制曲线在0.13～10 000 ng·ml-1之间线性关系良好(r =-0.9782),检测限(LOD)为0....
关键词：
恩诺沙星 单克隆抗体 交叉反应
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡春华 龙桂友 戴素明 马先锋 谢玉明 李娜 邓子牛
【目的】制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体并构建其单链抗体(single chain variable fragment,ScFv)基因,为从PthA角度进一步研究柑橘溃疡病致病机理创造条件,并为构建单链抗体基因植物表达载体,尝试利用转基因和植物抗体技术创制抗溃疡病柑橘新种质奠定基础。【方法】利用PthA-NLS重组多肽免疫Balb/c小鼠,制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体,从分泌抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR和重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)法构建其单链抗体基因,并克隆到p...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈琼 陆承平 陈怀青
用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过一次性杂交瘤融合，在筛选ＨＥＣ毒素单克隆抗体（ＭｃＡｂ１）的同时，用兔抗ＨＥＣ毒素血清（ＰＡｂ）包板的ＥＬＩＳＡ方法，筛选到两株抗ＨＥＣ毒素的单克隆抗独特型抗体（ＭｃＡｂ２）。两株ＭｃＡｂ２腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：２０４８０和１：５１２０，属于ＩｇＧ１亚类。ＨＥＣ毒素的模拟抗原ＭｃＡｂ２不能溶解人的Ｏ型红细胞，但能与相应的ＰＡｂ反应，并能阻断ＰＡｂ与ＨＥＣ毒素的结合。将ＭｃＡｂ２连接到同源小鼠红细胞（ＭＲＢＣ）后免疫小鼠，用ＨＥＣ毒素包板的ＥＬＩＳＡ检测其血清，呈阳性结果，说明ＭｃＡｂ２能模拟ＨＥＣ刺激机体产生抗ＨＥＣ毒素的抗体（Ａｂ３）。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱春华 刘荭 刘晓东 杨金先 郑在予 林天龙
以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明,M ab2A4属IgA,M ab8E1是IgG2a,其他的6株单抗M ab1D3、M ab2H1、M ab3A1、M ab4B5、M ab5E1和M ab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定(ELISA)分析表明,8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒,与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应,腹水抗体的ELISA效价在105~106。IFA分析表明,8株单抗中仅M ab5E1没有免疫荧光反应特性,其余7株单抗均能对...
关键词：
中华鳖 虹彩病毒 单克隆抗体 抗原
[期刊] 中国农业科学
[作者]
职爱民 李青梅 刘庆堂 刘宣兵 杨继飞 杨苏珍 柴书军 杨艳艳 邓瑞广 张改平
【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性...
关键词：
庆大霉素 单克隆抗体 杂交瘤 初步应用
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李晓 兰向莉 徐晓彬 杨延周 赵宝玉 靳亚平 王爱华 LU Ray
【目的】制备抗Luman募集因子N端(Luman-recruiting factor N terminal,LRF-N)蛋白的单克隆抗体。【方法】PCR扩增LRF-N端的194bp序列,构建LRF-N重组质粒pGEX-LRF-N,转染BL21(DE3)菌,诱导表达并纯化GST-LRF-N融合蛋白,以其作为抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,免疫4次,每次间隔10d,第4次加强免疫3d后采取小鼠脾脏,分离脾细胞,与SP2/0细胞融合,用ELISA和Western blot进行阳性细胞株的筛选和鉴定,对获得的杂交瘤细胞的细胞核型、分泌稳定性以及所分泌的单克隆抗体进行鉴定。【结果】pGEX-LR...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴贤福 陈溥言 蔡宝祥
马立克氏病病毒(MDV)的分子生物学研究已有20多年的历史,新技术的应用为病毒的分类、疾病的诊断和防治提供了有效的手段。MDV 通过琼脂扩散试验可被分为 A、B、C 三种主要抗原。目前已证明 B 抗原既可引起宿主的体液免疫,又可引起宿主的细胞免疫,是一种重要的中和性抗原。本试验利用提纯的 MDV B 抗原基因的大肠杆菌表达产物制备单克隆抗体,试图为 MDV 亚型的区别和真核生物系统中 B 抗原表达的鉴定提供帮助。
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