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[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨春林 席亚东 胡强 李洪浩
【目的】优化哈茨木霉UN-2菌株产β-葡聚糖酶的培养基组分及发酵参数，提高其产酶能力，研究β-葡聚糖酶粗酶液对水稻纹枯病病原菌的拮抗作用及田间防效，阐明哈茨木霉菌株UN-2在水稻纹枯病生物防治中的应用潜力。【方法】采用单因素试验考察不同碳源、氮源和金属离子对哈茨木霉菌株UN-2产β-葡聚糖酶的影响，利用正交试验确定木霉菌株产β-葡聚糖酶的最适温度、pH、接种量、瓶装量、摇床转速和发酵时间，优化哈茨木霉菌株UN-2产β-葡聚糖酶诱导发酵条件；通过体外拮抗试验和田间防效试验研究β-葡聚糖酶粗酶液对水稻纹枯病的抑菌防病作用。【结果】哈茨木霉菌株UN-2发酵产β-葡聚糖酶最佳碳源和氮源分别为麦麸和硫酸铵，金属离子Ca~(2+)和Mg~(2+)对木霉产β-葡聚糖酶活性具有明显的促进作用。哈茨木霉UN-2菌株以10.0 g/L麦麸、0.5 g/L β-葡聚糖、4.0 g/L硫酸铵、1.5 mmol/L Ca~(2+)、0.5 mmol/L Mg~(2+)为培养基，在温度32 ℃、起始pH 6.5、接种量8 mL（10~(6 )cfu/mL）、瓶装量30 mL/250 mL、摇床转速160 r/min条件下发酵64 h获得β-葡聚糖酶活性最高。木霉菌株UN-2产β-葡聚糖酶粗酶液对立枯丝核菌和禾谷丝核菌的菌丝生长和菌核萌发具有明显的抑制作用，对由立枯丝核菌引起的水稻纹枯病的田间防效达70.45%，与5%井冈霉素处理相当，β-葡聚糖酶粗酶液处理可提高水稻结实率和稻粒充实度。【结论】哈茨木霉菌株UN-2在最优发酵条件下产酶活性达97.68 U/mL，β-葡聚糖酶粗酶液对水稻纹枯病具有较强的抑菌防病效果，并对水稻植株具有一定的促生作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭田 王刘庆 廖美德
【目的】研究类芽孢杆菌PS04菌株及其代谢物对水稻纹枯病的预防和治疗效果,探索PS04对水稻纹枯病的防治机理,为PS04菌株生物制剂的研发提供理论依据。【方法】以水稻幼苗为供试材料,用带菌谷粒接种法接种水稻纹枯病菌,分别以PS04菌株发酵液、浓缩液和乙醇粗提物为药剂,保护性试验于接种前24h施药,治疗性试验于接种后24h施药,施药10d后调查统计防效;同时喷施发酵液与接种水稻纹枯菌进行防御性酶诱导试验,分别于接种后1,2,3,5,8d测定水稻叶鞘过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性,并分析其动态变化。【结果】药效试验表明,PS04菌株发酵液兼具保护性和治疗性作用,其防效分别达93.6...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
魏林 梁志怀 曾粮斌 罗赫荣 罗敏
为探明木霉代谢产物对植物病害的拮抗机制,用哈茨木霉T2-16菌株发酵代谢产物对豇豆种子进行了浸种处理,并在温室条件下于幼苗期注射法接种枯萎病菌,结果表明,该代谢产物可诱导豇豆幼苗产生对枯萎病的获得抗性.其叶片中的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均增强,并在某一时段显著高于未经木霉代谢产物浸种的对照,枯萎病发病率也极显著低于对照,对该病的防效可达73.6%.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杜婵娟 付岗 潘连富 叶云峰 黄志君
为了明确拮抗木霉在土壤中的定殖动态，采用稀释分离法，测试了木霉ｇｚ－２菌株随时间推移在土壤中垂直及水平方向的数量变化情况。结果表明，在垂直方向上，２６ ｃｍ深度以内，ｇｚ－２菌株的定殖数量总体呈先上升后下降的趋势，深度越深，其数量达到峰值的时间越短；深度超过２８ ｃｍ，其数量不再上升；５６ ｄ内，ｇｚ－２菌株的最大定殖深度为４０ ｃｍ。在水平方向上，ｇｚ－２菌株呈阶梯式扩散模式，其定殖数量总体呈先上升后下降趋势，并在接种后第３５ ｄ达到峰值；６３ ｄ内，最大定殖半径为２４ ｃｍ。土壤含水量和ｐ Ｈ对ｇｚ－２菌株在土壤中定殖数量的影响测试结果表明，当土壤含水量为２５％，ｐＨ为７．８时，该菌株在土．．．
关键词：
木霉 空间定殖 土壤含水量 pH
[期刊] 华北农学报
[作者]
李欣 高俊明 马丽娜
通过在SMCS培养液中加入不同的碳源、氮源,改变培养时间、温度及培养液的pH值,研究了盾壳霉产葡聚糖酶的培养条件。结果表明:盾壳霉接种在改良的SMCS液体培养基中置于恒温摇床(200 r/min,20℃)上培养15 d,可以诱导产生大量的葡聚糖酶。改良的SMCS培养液配方为:KH2PO4680 mg,K2HPO4870 mg,KCl 200 mg,NH4NO31 g,Mg-SO4.7H2O 200 mg,CaCl2200 mg,FeSO42 mg,ZnSO42 mg,MnSO42 mg,蔗糖10 g,加水1 000 mL,调pH值到6.5。
关键词：
盾壳霉 葡聚糖酶 培养条件
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张黎 牛向丽 张惠莹 刘永胜
【目的】利用转基因技术对水稻XTH(OsXTH11)进行分析,了解其在水稻生长发育调节和逆境应答中的作用。【方法】构建OsXTH11过表达载体,利用农杆菌介导法将其导入水稻品种日本晴,通过对转基因植株进行表型分析和分子检测验证OsXTH11功能。【结果】Real-time PCR分析结果表明,转基因植株中OsXTH11表达水平明显提高。对T1转基因幼苗的表型分析显示,在正常生长条件下,转基因幼苗生长速度快于野生型;对赤霉素(GA)和生长素(IAA)的响应程度强于野生型;在黑暗和深水条件下,茎伸长速度均显著快于野生型;对100 mmol·L-1 NaCl的耐受能力也优于野生型植株。【结论】过量表...
[期刊] 林业科学
[作者]
牛庆霖 王迎 罗磊 黄艳艳 刘静 冯殿齐 曹帮华
以欧美杨107杨为受体材料,利用根癌农杆菌介导法转化β-1,3-葡聚糖酶基因(BG2),经卡那霉素筛选,PCR和Southern检测显示有4个转基因阳性株系,初步证明外源目的基因已整合到107杨基因组中。离体抑菌试验表明转基因107杨(T-107杨)细胞粗提液的抑菌能力明显强于未转基因对照107杨(C-107杨)。在接种杨树溃疡病菌的培养基上培养,T-107杨长势明显强于C-107杨;T-107杨可明显抑制丙二醛(MDA)在植物体内的快速积累,其苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量也明显高于C-107杨,PAL含量T-107杨和C-107杨都有先升后降的趋势;15天后C-107杨完全死亡,T-107杨...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
范晓静 杨瑞先 邱思鑫 胡方平
【目的】克隆植物内生解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BS2的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(β-1,4-endoglucanase gene,eglS),探明BS2中该基因与定殖的相关性。【方法】以枯草芽孢杆菌BS168基因组为模板扩增组成型启动子rpsD。依据芽孢杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶基因的同源序列设计1对引物,以BS2基因组为模板扩增eglS。将rpsD启动子基因和eglS片段用T4连接酶连接,并对连接产物进行PCR扩增,得到eglS表达盒片段。将表达盒片段插入穿梭载体pGFP4412用以构建eglS过表达质粒。设计引物扩增eglS的同源重组片段,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
尹丹韩 高观朋 夏飞 王伟
【目的】评价生防菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)T4对根围土壤细菌群落的影响,为生防菌田间应用的生态安全提供依据。【方法】结合DGGE技术与T-RFLP方法,综合考察引入生防菌哈茨木霉T4后黄瓜根围土壤细菌群落变化。【结果】在引入生防菌的14—56 d内(黄瓜整个生育期),木霉对根围土壤细菌群落可产生显著影响,并持续一段的时间,随后逐渐减弱。表现为对蓝细菌、β-变形细菌、葡萄球菌、伯克霍尔德菌、沙雷氏菌、酸杆菌和一些不可培养细菌的有效抑制作用,对芽孢杆菌、土壤杆菌、芽单胞菌的明显促进作用。但到70 d时,即收获后2周,检测不到木霉对细菌群落影响。【结论】DGGE和T-R...
[期刊] 草业科学
[作者]
谢琳淼 常春丽 姚志红 王洪瑞 赵冬雪 张荣沭 敖红
为研究哈茨木霉(Trichoderma harzianum)对紫羊茅(Festuca rubra)和草地早熟禾(Poa pratensis)生长的影响和抗性的诱导作用,以不同浓度的哈茨木霉提取液对两种草进行种子萌发及盆栽试验。结果表明,哈茨木霉可以提高两种草种子的发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数,其中以1×10~4cfu·mL~(-1)哈茨木霉提取液的提高效果最为显著(P<0.05)。此外哈茨木霉处理后两种草幼苗的胚根、胚芽长度显著高于对照(P
[期刊] 草业科学
[作者]
刁桂萍 杨帅 遇文婧
从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536中克隆获得一个葡聚糖酶基因Glu1,其cDNA全长984bp,编码327个氨基酸。该葡聚糖酶属于Glyco-hydro-12家族,推测为β-1,4-葡聚糖酶,与深绿木霉IMI 206040的Glycohydro-12家族蛋白(XP_013940397.1)有91%相似性,且亲缘关系较近。运用qRT-PCR技术检测9种诱导条件下棘孢木霉Glu1基因的表达水平,结果表明,Glu1基因能参与棘孢木霉对山新杨(Populus davidiana×P.alba var.pyramidlis)或杨树病原菌的识别。构建原核表达载体并获得重组蛋白rGlu1。酶活特性分析结果表明,该酶最适pH为4.5,最适温度为45℃,且酶活性随诱导时间延长逐渐升高,在5h达到稳定。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
闫建英 张智 冯丽荣 汤华京 杨可心 魏罡 张晓彤
【目的】在枯草芽孢杆菌中表达绿色木霉(Trichodoma vivide,T.viride)内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ。研究内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ的生物信息、基因克隆与表达及重组酶学性质。【方法】提取纤维素酶生产菌株绿色木霉AS3.3711的总RNA，通过反转录合成cDNA，并以之为模板利用PCR技术扩增获得内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ，并进行生物信息学分析；构建了重组表达载体pMA5-Eg Ⅶ，并利用热激转化法将其转入枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,B.subtilis）WB600感受态细胞中，成功进行表达。【结果】生物信息学分析表明，内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ编码249个氨基酸，蛋白质的分子量为26.8002 KD，理论等电点7.62，属于胞外蛋白；预测蛋白质三级结构与二级结构一致，由ɑ-螺旋、延伸链区、β-转角和无规则卷曲构成。电泳结果表示，重组枯草芽孢杆菌在Eg Ⅶ基因片段大小符合处出现条带，表明成功将Eg Ⅶ-pMA5转化到B.subtilis WB600中。刚果红染色结果显示重组枯草芽孢杆菌在CMC培养基上出现较大直径的透明圈，重组菌株上清粗酶液DNS酶活力达到22.71 U/mL，表明绿色木霉内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ可以在枯草芽孢杆菌中表达，并具有较高活性。重组酶酶学性质分析表明，该酶的最适温度是60℃，最适pH值为6.4，且温度在50℃以下，pH值在5.6～8.0范围内，酶活力具有良好的稳定性。【结论】通过对内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ克隆及分析，获得了表达内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ的枯草芽孢杆菌基因工程菌，了解了重组酶酶学性质，为纤维素酶的广泛应用提供了理论基础。
[期刊] 林业科学
[作者]
杨立宾 宋瑞清 邓勋 李冲伟
采用直接提取法和分步提取法对哈茨木霉T28发酵液进行萃取,获得6种提取物;将各提取物对致病疫霉进行抑菌活性研究,并对具有最佳抑菌效果的提取物进行GC-MS分析。结果表明:采用分步提取法和乙酸乙酯为萃取液的提取物对致病疫霉菌丝生长、孢子囊萌发、孢子囊释放游动孢子具有最佳的抑制效果,抑制率分别为67.06%,71.71%和76.25%;采用直接提取法获得的提取物抑制效果次之。2种方法的提取物中分别含有10个和15个组分,其中相同组分为2,5-二叔丁基酚、邻苯二甲酸二叔丁酯、邻苯二甲酸二异丁酯、十八碳酸甲酯、邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸单(2-二乙基己基)酯,这些组分可能为对致病疫霉菌具有抑制作用的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冀颖 李梅 田云龙 刘卫德 牛静 蒋细良
【目的】克隆哈茨木霉几丁质合酶基因全序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】利用多聚酶链式反应(PCR)和染色体步移技术(genome walking)克隆几丁质合酶基因全序列;应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析;通过同源建模,对蛋白质的三维结构进行预测。【结果】从哈茨木霉(Trichoderma harzianum Th-33)中扩增得到几丁质合酶基因ThChsC(GenBank登录号HQ419000),编码区(CDS)长为2 835 bp,由4个外显子和3个内含子组成,开放阅读框(ORF)长2 688 bp,编码895个氨基酸。序列比对和同源性分析显示,该基因与串...
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哈茨木霉 几丁质合酶 基因克隆 序列分析
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